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-1-专题二微生物的培养和应用课题1微生物的实验室培养【目标定位】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【自主预习】一、培养基：1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？[来源二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：(一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下：[来源:学#1．对实验操作的、操作者的和进行。2．将用于微生物培养的、和等器具进行。3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。(二)消毒和灭菌1．消毒是指。常用的方法有、、消毒法。2．灭菌是指。常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是，本实验可分成和两个阶段进行。-2-（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：、、、、。〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①在火焰旁右手拿，左手；②使锥形瓶的瓶口；③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝固后，将平板。〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？〖思考8〗平板倒置的目的是什么？〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？（二）纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷却的接种环伸入到。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。⑧将平板培养。〖思考10〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是？在作第二次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线？-3-2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度，然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的。系列稀释操作：①取盛有mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。②用灼烧冷却的移液管吸取mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。③从101倍液中吸取mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。〖思考11〗系列稀释操作的注意事项是什么？涂布平板操作：⑴将浸在盛有的烧杯中。⑵取少量（不超过），滴加到培养基表面。⑶将的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却。⑷用涂布器将菌液地涂布在培养基的表面。涂布时可，使菌液分布均匀。四、结果分析与评价1．培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2．在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3．培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？〖思考12〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？〖思考13〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？【随堂检测设计】1．下列关于微生物营养的说法，正确的是A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量c．除水以外的无机物仅提供无机盐D．无机氮源也能提供能量2．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅3．以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D．待平板冷却凝固约5～10min后将平板倒过来放置【拓展训练设计】-4-1．下列有关培养基的叙述正确的是A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含A．碳源、磷酸盐和维生素B．氮源和维生素C．水、碳源、氮源和无机盐D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3．获得纯净培养物的关键是A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B．接种纯种细菌C．适宜环境条件下培养D．防止外来杂菌的入侵4．下列常用的无菌操作中错误的是A．用酒精擦拭双手B．用氯气消毒水源C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭5．有关倒平板的操作错误的是A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置6．有关平板划线操作正确的是A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养7．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面[来源:Zxxk.Com]C．再放在适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落8．涂布平板操作需要用到A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、移液管、酒精灯C．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、接种环、酒精灯9．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是A．对比观察培养基有没有被微生物利用B．对比分析培养基是否被杂菌污染C．没必要放人未接种的培养基D．为了下次接种时再使用10．菌种保藏应控制的条件是（1）湿度（2）低温（3）干燥（4）有光（5）隔绝空气（6）适当有氧A．（1）（4）（6）B．（2）（3）（6）C．（1）（5）（6）D．（2）（3）（5）11．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是A利于大肠杆菌的接种B防止杂菌污染C利于培养的冷却D防止皿盖冷却水倒流入培养基12．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在中保温1-2天看有无，如果没有说明制作合格，反之则不合格。-5-参考答案基础知识一、1.营养物质生长繁殖液体固体2水.碳源氮源无机盐PH特殊营养物质氧气3维生素，酸性，中性或微碱性，无氧〖思考1〗:C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。二（一）杂菌1.空间衣着手，清洁和消毒2.器皿接种用具，培养基，灭菌3.酒精灯火焰4.周围的物品（二）1.略巴氏消酒精2.略灼烧干热高压蒸气〖思考2〗:防止感染实验操作者。〖思考3〗避免妨碍热空气流通。〖思考4〗有利于锅内温度升高，100kPa，121℃，15～30，零，容器中的液体暴沸，实验操作、一1计算→称量→溶化→灭菌→倒平板思考5：防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。〖思考6〗糖维生素和有机氮2：50，锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开一条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置〖思考7〗消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。〖思考8〗防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。〖思考9〗不能。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。〖思考10〗增大接种面积，保持通气并防止杂菌感染。答案。二、平板划线.稀释涂布平板1通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，①接种环，烧红。③，消灭试管口杂菌。④菌液中取出一环菌种。⑥，伸入平板内划3～5条平行线，⑦，第一区划线末端开始向第二区域内，，第五区的划线与第一区划线，⑧，倒置放在培养箱中〖思考11〗消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种；防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。[来源:Z,xx,k.Com]2不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，①，9mL，灭菌。②，1。③，1〖思考12〗操作中试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。整个操作过程中使用了1支移液管结果分析与评价-6-1对照，培养基灭菌不彻底。2呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。〖思考14〗有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。[来源:学科网]〖思考15〗临时保藏法和甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。【例1】解析：此题考查学生对微生物的营养和能源的理解。对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D启示：含C、H、o、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；无机物也可提供碳源、氮源和能源。【例2】解析：此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。答案：C启示：微生物培养过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，分别又有各种不同的方法。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。【例3】解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50℃，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A启示：固体培养基的制作步骤是：“计算→称量→溶化→灭菌→倒平板”顺序不能颠倒。并且在制作过程特别是倒平板时彻底做到“无菌”。【例4】解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B基础自测一、1．A2．C3．D4．D5．C6．C7．D8．D9．C10．B。11D。。12。C。13。D。14。B。15。C。16。D。17。B。二、18．恒温箱菌落生长，菌落生长19(1)需要灭菌(2)需要灭菌(3)需