慢性阻塞性肺疾病老年患者支气管肺泡灌洗液中细胞白介素-8变化的临床意义

老年慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液中细胞、白介素-8变化的临床意义【摘要】目的：观察老年COPD患者支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中的细胞学、IL-8水平变化。探讨在老年COPD发病及病情演变过程中炎性细胞及IL-8的作用和临床意义。方法:选取2013年10月至2014年3月我院COPD患者31例（男26例，女5例，年龄60-80岁）为实验组，对照组（无急、慢性气道疾病史，影像学无异常）10例（男6例，女4例，年龄60-70岁）。根据中华医学会呼吸分会慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013年修订版），将实验组分为COPD急性加重期组（n=15）,COPD稳定期组（n=16），又进一步将COPD患者（n=31）分为吸烟组（n=25）和不吸烟组（n=6）。行支气管肺泡灌洗（Bronchoalveolarlavage，BAL），采用瑞氏染色法对实验对象BALF细胞进行分类比较，并采用双抗定量夹心酶联免疫吸附法测定BALF中IL-8水平。结果：（1）COPD急性加重期组BALF中嗜中性粒细胞（NEU）及嗜酸性粒细胞（EOS）比率（55.43±24.31%,9.30±8.11%）,稳定期组（28.98±20.43%,2.22±1.13%）和对照组（2.25±1.21%,0.48±0.62%），三组比较差异显著（P均0.05）。（2）COPD急性加重期组、稳定期组和对照组BALF中IL-8水平分别为1123±67.33pg/ml、855±197.17pg/ml和208.2±177.65pg/ml，三组显著性差异（P均0.01）。（3）本组实验IL-8与NEU比率呈正相关（r=0.865,P0.01），与FEV1呈负相关（r=-0.628,P=0.004）。FEV1与NEU以及EOS呈负相关（r=-0.958,P0.01；r=-0.881,P0.01）。（4）COPD吸烟组BALF中IL-8水平（1060.16±126.55pg/ml）明显高于不吸烟组（680.33±165.52pg/ml），差异具有统计学意义（P0.01）。结论：NEU、EOS和IL-8参与了气道炎症反应，可能可用来判断疾病程度。检测IL-8、NEU和EOS可能对明确老年COPD发病机制有指导意义,判断治疗效果和预后。【关键词】慢性阻塞性肺疾病，白介素-8，嗜中性粒细胞，嗜酸性粒细胞,支气管肺泡灌洗，支气管肺泡灌洗液作者单位：300052天津医科大学总医院高干病房TheclinicalsignificanceofbronchoalveolarlavagecellsandIL-8levelsingerontalpatientswithchronicobstructivepulmonarydisease【Abstract】Objective:ToobservethevariationofcytologyandIL-8inthebronchoalveolarlavagefluidofgerontalpatientswithCOPD.IllminatetheroleandclinicalsignificanceofthecytokinesinthepathogenesisandprogressionofCOPDoftheaged.Methods:Thirty-onepatientsdiagnosedasCOPDinourhospitalfromOct.2013toMar.2014andthecontrolgroup(n=10)werechoseninexperimentation.TheexperimentgroupwascomposedoftheelderlypatientsdiagnosedasCOPDanddividedintotwogroups,exacerbationgroup(n=15)andstablegroup(n=16).AndtheCOPDgroupwasdividedintotwogroupsbyciggrate.Takethebronchoalveolarlavagefluidfrom15acuteexacerbationofCOPDpatients、16stableCOPDpatientsand10controls.Afterthat,centrifugatetohavethebronchiallavagefluidsupernatantsandcytologicalcompostition.Tosmearcellwithcentrifugefilmpreparationmethod,stainingwithHE,cytologiccategorizationbymicroscope.ToobservetheexpressionofIL-8inthebronchoalveolarlavagefluidbyEnzymelinkedimmunosorbentassay.Results:(1)TheneutrophilandeosinophilinBALFofacuteexacerbation、stableCOPDgroupandcontrolgroupwere(2.25±1.21%,0.48±0.62%)、(28.98±20.43%,2.22±1.13%)、(55.43±24.31%,9.30±8.11%)respectively.TheneutrophilandeosinophilofacuteexacerbationandstableCOPDgroupweresignificantlyhigherthancontrolgroup(P0.05).(2)IL-8inBALFofacuteexacerbation、stableCOPDgroupandcontrolgroupwere1123±67.33pg/ml、855±197.17pg/ml和208.2±177.65pg/ml，respectively.IL-8ofacuteexacerbationandstableCOPDgroupweresignificantlyhigherthancontrolgroup(P0.01).(3)PositivecorrelationwasobtainedbetweenIL-8andneutrophilratio(r=0.865,P0.01),andnegativecorrelationbetweenIL-8andFEV1(r=-0.628,P=0.004).TherewasnegativecorrelationbetweenFEV1andneutrophilandeosinophilegranulocyteinBALF(r=-0.958,P0.01;r=-0.881,P0.01).(4)ThelevelofIL-8inBALFofsmokinggroup(1060.16±126.55pg/ml)wassignificantlyincreasedthanthegroupnon-smoking(680.33±165.52pg/ml)(P0.01).Conclusions:Theresultsshowusthatneutrophil、eosinophilandIL-8takedpartintheairwayinflammationofCOPD.Todetectneutrophil、eosinophilandIL-8maybeamuchbettermethodforidentifingthepathogenesisandreflectingtheprogressionoflocalinflammationinCOPDpatient,besides,toobservethelevelofIL-8andcytologicalchangeplaysanimportantroleinthediagnosisandprognosisofCOPDoftheaged.【Keywords】chronicobstructivepulmonarydisease,interleukin-8,neutrophil,eosinophilegranulocyte，bronchoalveolarlavage,bronchoalveolarlavagefluid慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种具有气流受限特征的可以预防和治疗的疾病，气流受限不完全可逆、呈进行性发展，与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关。越来越多的研究证明，COPD与气道、肺实质和肺血管慢性炎症反应相关，中性粒细胞在COPD患者气道分泌物中比率明显升高[1~6]，且嗜酸性粒细胞在COPD患者气道中已经被检测到[7~9]，更有学者认为气道阻塞的程度与支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中的嗜酸细胞以及中性粒细胞浸润程度有关[10~13]。且近年来随着对气道炎症机制研究的深入，国外学者发现IL-8在COPD患者血中、痰及BALF中明显升高，且BALF中IL-8水平明显高于血清[11、13、14、15]。而对于COPD老年患者BALF中IL-8的研究在国内尚少见报道。为了更好反映我国老年人COPD局部气道炎症情况，我们对老年COPD患者BALF中细胞进行分类比较，对IL-8水平进行了测量，并对他们的相关性进行了分析。对象和方法一、研究对象实验组选择自2013年10月～2014年3月于我院慢性阻塞性肺疾病患者共31例，其中急性加重期组15例（男11例，女4例），平均年龄61±13岁，其中吸烟者14例，不吸烟者1例。临床缓解期组16例（男15例，女1例），平均年龄63±9岁，其中吸烟者11例，不吸烟者5例。均符合我国慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013年修订版）诊断标准[16]，并符合下列标准：（1）无哮喘病史，吸入沙丁胺醇200μg后FEV1占预计值可逆性小于10%。（2）无合并严重心、肝、肾等系统疾病。又进一步将实验组（n=31）分为吸烟组（n=25）和不吸烟组（n=6）。对照组10例，其中男6例，女4例，平均年龄65±5岁，经询问病史，均无呼吸系统疾病史，近2月无急、慢性气道炎症疾病史，肺功能测定和影像学检查均未发现异常。二、肺功能检测采用肺功能仪对实验对象行肺功能检查（COPD患者行支气管扩张试验后肺功能检查），记录FEV1数值。受试者行肺功能检查前至少48小时未用长效支气管扩张剂或8小时内未用短效支气管扩张剂。三、标本采集分别对COPD急性加重期、稳定期患者和对照组行支气管肺泡灌洗，一般取右肺中叶灌洗[17]。1、先通过一细硅胶管在要灌洗的肺段经活检孔注入2%利多卡因1~2ml，做灌洗肺段局部麻醉；2、将纤维支气管镜顶端紧密楔入右肺中叶开口处，再经活检孔通过硅胶管快速注入37℃灭菌生理盐水。每次20ml,总灌洗量为60~100ml。3、立即用70mmHg(1mmHg=0.133kPa)负压吸引回收灌洗液，回收率为40%。4、立即将回收液用双层无菌纱布过滤，记录回收液总量，装入硅塑瓶，置于装有冰块的保温瓶中，送往实验室。四、标本处理将回收灌洗液装入塑料离心管内，在4℃下以1200r/min离心10min,将上清液置于无菌塑胶管中-20℃储存，留取细胞成份。BALF有核细胞计数分类：将BALF中有核细胞离心涂片后，行瑞氏染色，在40倍光学显微镜下计数200个细胞，进行细胞分类计数统计。IL-8活性测定：采用双抗定量夹心酶联免疫吸附测定法（EnzymeLinked-Immune-SorbentAssay,ELISA）检测BALF中IL-8值，试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。五、统计学处理本研究采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，数据以均数±标准差（X±s）表示，其中多个样本均数比较采用单因素方差分析（onewayANOVA），对两样本资料比较采用成组t检验（Independent-