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福建畜牧兽医第30卷增刊2008年35我国对猪瘟疫苗与免疫的研究进展郭加丰福建省漳州市农业学校363000文献标识码：A文章编号：1003-4331(2008)07-0035-03我国是世界养猪大国，国家对猪瘟免疫防治方面的研究十分重视。尤其在猪瘟疫苗的开发与应用、猪瘟免疫程序与免疫效果等方面做了大量应用性研究，并取得了一定的成果。1猪瘟疫苗的研究建国初期(1951-1952年)，何正礼、方时杰等选用抗原性优良的石门系毒株研究改进制成CSF结晶紫灭活疫苗效果明显。广泛应用后对控制当时猪瘟的流行曾起过一定的作用。1950年中国兽医药品监察所开始探索培育猪瘟兔化弱毒株，从1954年开始系统传代测试，经过长期的试验和系统验证，终于选育出一株适应于家兔的猪瘟病毒变异株—中国株(即C株)，证明有高度的安全性和优良的免疫原性，而且具有毒力不返强、无残毒的优点。从1957年开始C系在我国广泛应用，同时也推广到欧亚许多国家，使这些国家最终控制或消灭了猪瘟。应该说猪瘟弱毒疫苗的广泛应用，对于控制CSF的流行起到了关键性的作用。但是，由于应用这类疫苗后并没有彻底阻断HCV的传播途径与流行［1］，HCV仍然存在并以低水平进行传播。因此，改进传统疫苗与研制新型疫苗已成为当今猪瘟疫苗研究发展的新方向。近十年，国内外都在致力于开发猪瘟的重组弱毒疫苗、亚单位疫苗和标记疫苗等基因工程疫苗的探索性研究，经过不懈的努力，目前也取得了阶段性的成果［2］。主要有：1)重组疫苗。它是以无致病力或低毒力的痘病毒(VAC)和伪狂犬病毒(PRV)为载体，将HCV-E2基因与之重组研制的基因重组疫苗。如我国四川农业大学郭万柱教授研制出了伪狂犬/猪瘟活载体重组疫苗，但重组疫苗的安全性和实用价值目前还有争议。2)亚单位疫苗。应用化学的方法从病毒粒子中分离出保护性抗原可以制成亚单位疫苗。亚单位疫苗是病毒粒子的一部分，不含有核酸，非常安全。因具有良好的安全性和稳定性而备受研究人员的青睐，并于1988年被载入《欧洲药典》［3］。亚单位疫苗的免疫原性通常较低，需要与佐剂合用，或偶联到适当的载体上应用。从完整病毒粒子上制备具有免疫36福建畜牧兽医第30卷增刊2008年原性的亚单位疫苗时，由于抗原量的限制，制备过程复杂，成本往往比较高。因此，采用基因工程的方法，不仅能够克隆得到编码病毒保护性抗原的基因，而且能够在体外对其进行改造或修饰，并重新转移到异源生物宿主体内或培养细胞中，使病毒蛋白获得大量表达。利用真核细胞高效表达系统来表达HCV免疫原蛋白，并以此表达产物为抗原可获得基因工程亚单位疫苗。目前国际上又兴起了对猪瘟亚单位标记疫苗的研究，该疫苗是对传统的猪瘟兔化弱毒苗进行改进，使其缺失某一基因(如E0)或某一特殊片段(如E2)，但其免疫原性仍然保存。亚单位标记疫苗与亚单位疫苗不同之处，在于同时建立了相应的特种抗原的亚单位疫苗，将其接种于猪之后能与自然感染HCV的猪所产生的抗体相区别，从而达到区别人工接种疫苗和自然感染HCV的目的。标记疫苗是目前猪瘟疫苗发展的趋势，目前已完成E2亚单位标记疫苗及重组活疫苗效率的测定，均能显著减少疫苗免疫猪群中猪瘟病毒的水平及垂直传播，同时通过血清学方法能区分疫苗免疫猪与自然感染猪［4］。标记疫苗的使用对于猪瘟的控制和消灭具有十分重要的意义。3)核酸疫苗。它是将连接有HCV主要保护性抗原E2基因的表达载体直接免疫动物，使病毒核酸在动物机体内进行表达，从而刺激机体产生免疫保护。解放军军需大学余龙兴等已用猪瘟DNA疫苗成功地保护了受到HCV攻击的猪。近几年来，一种基于甲病毒复制子的基因递送载体被广泛用于研制复制型DNA疫苗。研究证实，以600ug的剂量免疫猪三次，可提供抵抗致死性强毒攻击的免疫保护［5］。这种疫苗在动物中具有良好的免疫效果，并且优于相应的常规DNA疫苗，免疫剂量也显著降低［6］。但是到目前为止，还没有一种核酸疫苗被批准进入临床应用。其主要的原因是免疫剂量和制备工艺、制备成本问题。在疫苗生产方面，我国早期研制成功的猪瘟结晶紫灭活疫苗，在猪瘟兔化弱毒疫苗研制成功之前为猪瘟的预防工作作出了巨大的贡献。但由于灭活疫苗产生免疫力慢，免疫期短，生产成本高，现已不生产使用。中国系C株是于1956年开始用于制造弱毒疫苗，并在全国推广。对控制猪瘟的发生起到决定性的作用。自从1956年中国株猪瘟兔化弱毒疫苗应用以来，全国各疫苗生产厂家对猪瘟疫苗的生产工艺也在不断地进行一系列的改进和提高，1958年研制成功冷冻干燥苗，适于工厂化生产；1964年将猪瘟兔化弱毒接种于3～5日龄的乳兔，取乳兔肝脾及肌肉组织制成乳兔组织苗，大大提高了产量，降低了生产成本，并于1965年在全国推广应用；猪瘟兔化弱毒接种于牛，病毒在牛体内繁殖，采取感染牛的淋巴结、脾脏，制成牛体反应苗；1974年黑龙江省兽医研究所采用猪肾细胞培养猪瘟兔化弱毒获得成功，1975年开始由中国兽医药品监察所组织中试，1978-1980年全国有13个厂生产乳猪肾细胞苗，由于用猪肾同源细胞生产疫苗有带猪瘟强毒的危险，因此，又于1980年研制成功绵羊肾细胞苗，1982年和1985年又相继研制成功奶羊肾细胞苗和犊牛睾丸细胞苗，这些异源细胞苗的投产，不仅提高了疫苗的产量，同时也使疫苗的质量有了进一步的提高。近年来，随着养猪业的发展和技术进步的需要，我国C株疫苗的生产和应用也发生了变化，目前，猪瘟疫苗的类型主要有成兔脾淋苗、牛体反应苗、乳兔冻干苗、牛睾丸细胞苗等。免疫程序为种猪接种2次/年，商品猪进行一免、二免(有些再加超前免疫)。细胞苗免疫剂量采用适当提高剂量的方法［17］(这是由于多年来我国在免疫剂量上规定猪瘟弱毒细胞苗肌肉注射量每头份为150RID，这个剂量在目前新情况下的实际应用中被证实剂量不足、保护力差。为提高免疫效果所采取的一种措施)。2猪瘟疫苗免疫程序(Vaccinationschedules)的研究由于免疫程序的制定与免疫效果密切相关，良好的免疫效果必定有一个科学合理的免疫程序。在这方面专家也做了大量的研究并取得可喜的成果。SanipaSuradhat［7］对猪瘟的首免日龄进行研究，结果表明，5周龄免疫猪瘟疫苗比3周龄免疫猪瘟疫苗的免疫效果好，猪体内IFN-γ和中和抗体滴度都相对较高，而育肥猪的免疫效果比种猪的免疫效果差。刘莉等［8］对仔猪免疫程序研究认为仔猪在18日龄时开始进行母源抗体水平监测，至50%仔猪母源抗体效价降低到1：16对仔猪进行首次免疫接种；至50日龄时再次进行免疫抗体水平监测，至50%左右仔猪抗体效价再次降到1：16时，进行二次免疫接种。蔡葵蒸［9］等研究结果表明，仔猪用细胞苗28日龄首免4头份，55日龄二免4头份和2头份的抗体效价在180日龄均达到1∶16以上。孙伟等［10］对不同日龄的猪用不同剂量的猪瘟兔化弱毒疫苗进行免疫，通过正向间接血凝试验进行猪瘟抗体监测。结果表明，用1头份猪瘟弱毒苗在配种前15d免疫母猪可保证其仔猪体内母源抗体较高，对仔猪首免用1头份猪瘟疫苗进行超免、在60日龄用2头份的猪福建畜牧兽医第30卷增刊2008年37瘟疫苗进行二免的免疫效果最好。杨林等［11］采用不同免疫剂量(2、4、6头份)的猪瘟兔化弱毒细胞苗，于配种前空怀期接种母猪，检测其抗体水平。结果表明，4头份剂量免疫效果最好。王火平［12］在仔猪猪瘟免疫程序的研究中，将超前免疫的第二次免疫时间从60d提前至45d，免疫剂量从1头份提高到4头份，在80d时可使猪瘟抗体由原来的2提高到4.2(P＜0.01)。建议猪瘟的超前免疫剂量2头份，45～50日龄进行二免剂量4头份较为合适。3免疫增强剂的研究免疫增强剂是即可使机体免疫功能短暂增强作用的物质。与疫苗同时使用以提高免疫效果。目前较常用的免疫增强剂有转移因子、干扰素、黄芪多糖、左旋咪唑、维生素E、微量元素硒等。李祥瑞等［13］经试验观察了重组白细胞介素-2(IL-2)对健康成年猪和PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果的影响，结果显示重组白细胞介素-2(IL-2)和猪瘟疫苗一起免疫健康猪，20d后间接血凝抗体滴度达到1∶64的猪的比例为87.5%，而不注射重组白细胞介素-2(IL-2)的对照组抗体滴度可以达到这一水平的比例只有25%。给经2次猪瘟疫苗免疫但抗体滴度在1∶32以下的PRRS抗体阳性猪单独注射重组白细胞介素-2(IL-2)，20d后，注射前检测不到抗体的猪都检测到抗体，注射前抗体滴度在1∶8～1∶16之间的猪抗体滴度提高到1∶32～1∶64。再次用猪瘟疫苗和重组白细胞介素-2(IL-2)共同免疫，可使抗体提高4倍以上。而不注射的对照组抗体滴度略有下降。说明重组白细胞介素-2(IL-2)可以减轻PRRS感染所引起的免疫抑制，提高猪瘟疫苗的免疫效果。张光勤等［14］也观察了重组白细胞介素-2对经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗免疫效果的影响，结果表明，进行猪瘟疫苗免疫时应用重组白细胞介素-2，可以显著提高母猪和育成母猪猪瘟疫苗的抗体滴度水平和整齐度。张世军等［15］用苜蓿多糖作为猪瘟兔化弱毒疫苗的强化剂，对60日龄体重18～20kg的仔猪进行免疫试验，结果表明，苜蓿多糖可使猪外周血液的B淋巴细胞增多，IgG水平提高，可显著增强猪瘟疫苗的免疫效果。余克伦等［16］以玉米花粉多糖作为免疫增强剂按剂量50mg、100mg、200mg分别与猪瘟弱毒细胞冻干苗共同免疫猪，测定其免疫效果。结果表明，各剂量组的IHA抗体效价均高于对照组。T细胞活性E花环试验测得的活性E花环百分率分别为21.84%、25.46%、21.92%，均高于对照组15.91%。T淋巴细胞转化试验显示，各试验组的T淋巴细胞转化率分别为55.32%、56.39%、54.29%，均高于对照组47%。根据试验结果选取100mg剂量组在两个猪场进行田间扩大试验，测得的IHA抗体效价亦高于对照组。研究结果表明，玉米花粉多糖既可提高体液免疫又增强细胞免疫。参考文献：［1］蔡宝祥.当前我国猪瘟防制中存在的问题和对策［J］.畜牧与兽医，2002(11)：6.［2］刘菲，立成军，黄勇.猪瘟的流行与控制［J］.黑龙江畜牧兽医，2005(8)：45-47.［3］胡慧，邱昌庆.猪瘟诊断和防制研究进展［J］.中国兽医科技，2004，34（6）：36.［4］赵耘，秦玉明，张广川.国外猪瘟病毒试验室诊断、流行病学及标记疫苗研究进展［J］.中国兽药杂志，2004，38（7）：16-24.［5］李娜，赵建军，赵和平，等.基于甲病毒复制载体子的猪瘟DNA疫苗的免疫效力评价［C］.亚洲猪病学会第三届学术会议论文集（中文版），2007：140.［6］陈焕春.中国养猪现状与猪病防制研究［C］.亚洲猪病学会第三届学术会议论文集（中文版），2007：5.［7］SanipaSuradhat，DVM.，ph.D.猪瘟疫苗免疫的研究：成功免疫的关键因素［C］.亚洲猪病学会第三届学术会议论文集（中文版），2007：36.［8］刘莉，金璐娟，杨旭，等.规模化猪场仔猪猪瘟母源抗体消退规律［J］.黑龙江畜牧兽医，2004(10)：46-47.［9］蔡葵蒸，张明林，柴君秀，等.猪瘟威胁区猪场仔猪免疫程序的探讨［J］.中国兽医科技，2002，32(3)：22-24.［10］孙伟，杨英，王平荣.猪瘟免疫程序及免疫效果研究［J］.畜牧与兽医，2003(6)：29-30.［11］杨林，孙刚，赵春泰.黑龙江省猪瘟免疫程序的研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2004(10)：47-48.［12］王火平.仔猪猪瘟超前免疫的研究［J］.福建畜牧兽医，2005，27（4）：8-9.［13］李祥瑞，徐立新，赵星灿，等.重组白细胞介素-2提高PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果的试验［J］.畜牧与兽医，2002，34(5)：9-11.［14］张光勤，李旺，李治力.重组白细胞介素-2对猪瘟疫苗免疫效果的影响［J］.河南农业大学学报，2003，37(2)：175-176.［15］张世军，王三虎，赵坤.苜蓿多糖对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫应答强化作用的研究［J］.河南农业科技，2003(10)：57