抗风湿及镇痛类中成药和保健品非法添加化学物质的检测方法研究进展(修改)

*作者简介:申兰慧（1979-），女，江苏姜堰，硕士，主管药师，从事质量检验和标准的研究，Email:[e-mail],Tel:[phone]抗风湿类及镇痛类中药制剂中非法添加化学物质的检测方法研究进展申兰慧（江苏省无锡药品检验所，无锡，214021）摘要对抗风湿类及解热镇痛类中药制剂中非法添加化学物质的分析方法进行综述。现在主流的分析方法主要是薄层色谱法、高效液相色谱法、液质联用。并参考相关文献，根据分析方法对各种抗风湿类及解热镇痛化学物质分别进行阐述。关键词中药制剂非法添加化学物质检测方法ProgressofDetectionMethodsforChemicalMaterialsillegallyaddedinAntirheunaticandAnalgesiaTraditionalChineseMedicineShenLanhui（WuxiInstituteforDrugcontrolJiangsuProvince,Wuxi，214021）ABSTRACTTheauthoroverviewedtheanalyticalmethodsforchemicalmaterialsillegallyaddedinAntirheunaticandAnalgesiaTraditionalChineseMedicine.ThemaincurrentanalyticalmethodwereTLC,HPLC,andLC-MS.TheauthorreferredcorrelatedocumentsandexplainedAntirheunaticandAnalgesiachemicalmaterialsseparatelyaccordingtheanalyticalmethods.KEYWORDSTraditionalChineseMedicine,illegallyadded,chemicalmaterials,detectionmethods近年来，中成药及保健品非法添加化学物质越来越引起人们的关注，特别是抗风湿类及解热镇痛类的情况比较突出，因为我国风湿类及骨刺骨痛的人群比较多，需要患者一直服药，不法药商为了谋取非法利益，通过非法加入化学药品,使疗效缓和的中成药具有了暂时的速效、高效或特效,增加销量,获取非法高额利润。同时,由于中成药成分复杂,《药品标准》不可能规定与化学药品同样进行“全成分”检测,添加西药不易被识别,隐蔽性较强,造成这些“药品”容易蒙混过关,逃避了监督检查。笔者就近几年来结合自己的日常检验及文献资料对抗风湿类及解热镇痛类中成药和保健品中非法添加西药成分的分析方法进行综述，以便为相关药品监督管理部门及时发现这种非法添加行为提供技术支持，保证患者用药安全。一、可能添加的抗风湿类及解热镇痛类西药1、糖皮质激素药：氢化可的松、地塞米松、曲安奈德、醋酸泼尼松龙、醋酸氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氢化泼尼松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸曲安奈德、醋酸氟轻松。12、解热镇痛抗炎药：阿司匹林、布洛芬、萘普生、芬布芬、布洛芬、吲哚美辛、双氯芬酸钠、吡罗昔康、美洛昔康、对乙酰氨基酚、盐酸罗通定。二、分析方法1、薄层色谱法（TLC）TLC检测灵敏度差，不易定量，但实验操作简便快速，故可以作为初筛方法，为HPLC、HPLC-MS进行进一步确证提供参考。夏瑞[等[1]采用氯仿-甲醇(9：1)提取样品后，分别点于同一硅胶G薄层板，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385：60：15：2)为展开剂，展开后，以碱性四氮唑蓝试液为显色剂，同时有效地分离5种糖皮质激素，共检查十几批治疗风湿性关节炎和哮喘的中药制剂，有两批中检出含有醋酸泼尼松，同样采用MS／MS进行验证，本法检测阳性反应的，经质谱验证确认为阳性。周镒等[2]采用甲醇提取样品后，分别点于同一4.68%磷酸二氢钠溶液制备硅胶GF254薄层板，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15：5：1)为展开剂，检出三批天麻胶囊中非法掺入吲哚美辛。刘元瑞等[3]采用薄层色谱联合质谱(TLC-MS)技术检测中药制剂中含有的多种化学药品，采用薄层色谱法初筛，利用薄层制备色谱技术将可疑斑点分离后进行质谱检测，并与对照品的质谱图比较确认，在延香镇痛胶囊检出双氯芬酸钠、卡马西平、盐酸曲马多。2、HPLC法HPLC专属性强，具高效、快速、适应面广，特别是近年来采用二极管阵列检测器（DAD），提供了识别添加化学物质成分的科学性与准确性。目前HPLC仪已经比较普及使用，因此建立的检验方法一旦成熟，将成为目前这类研究中最为普遍采用的方法。郭瑞峰等[4]采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)同时分离测定中药保健品中l0种常用的激素成分。方法是：色谱柱为ODSC18柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为240nm，可以快速筛查出纯中药制剂或食用保健品中的激素类西药成分。1收稿日期2010-3-19修回日期2010-3-25夏瑞等[5]建立抗风湿类中药制剂中违法添加糖皮质激素的检测方法，以DiamondC18色谱柱，流动相A为水-四氢呋喃(100：1)，B为乙腈-水-四氢呋喃(80：20：1)梯度洗脱，检测波长240nm。结果表明在该液相条件下，能同时有效分离13种糖皮质激素，通过比较样品和对照品色谱保留时间和其紫外光谱信息，以及样品中峰纯度检查，并经MS-MS验证，证实样品中含有醋酸泼尼松。庄晓庆[6]利用HPLC法测定天麻胶囊中非法掺入的吲哚美辛，以KromasilC8柱为色谱柱，0.1mol/L冰醋酸溶液-乙腈(52.5：47.5)为流动相，检测波长为228nm，通过TLC法发现样品在与吲哚美辛对照品相应的位置上有相同颜色的斑点，初步确定样品中含有吲哚美辛。再通过二极管阵列检测器对供试品色谱图中与吲哚美辛对照品峰保留时间基本一致的色谱峰进行了紫外光区的光谱检测，两者的光谱行为一致。进一步确定供试品中含有吲哚美辛，并通过方法学验证，测定三批天麻胶囊中掺入吲哚美辛的量分别为2.56mg/粒，2.96mg/粒，2.68mg/粒。徐灿辉等[7]利用HPLC法测定神风液中非法掺加的双氯芬酸钠，以KromasilC18柱为色谱柱，流动相为0.025mo1/L磷酸液(用三乙胺调节pH值至3.0士0.05)一乙腈(40：60)，检测波长为276nm。该方法能灵敏、准确地对神风液中掺加的双氯芬酸钠进行定量分析，专属性较强，同样也能适用于其他药品或食品中非法掺加的双氯芬酸钠的定量分析。3、紫外扫描分析法（UV法）王世清[8]采用TLC法，成条带状点样，在紫外灯（254nm）下刮下与醋酸泼尼松对照品相应位置上的样品斑点，加无水乙醇溶解，在200~300nm范围内进行扫描，结果样品溶液与醋酸泼尼松对照品在229~235nm之间均有最大吸收。4、液相色谱-质谱法（HPLC-MS）HPLC-MS是当前鉴别中药制剂中掺入化学药物有效分析方法之一，中药制剂化学成分复杂，要获得准确的结果就必须采用专属性高的分析手段，HPLC-MS正好具备这一优势，由于其分析不需要实现待测物质与干扰组分的完全色谱分离，可以通过对质荷比的筛选得到单一组分的色谱图，同时还可以通过二级质谱分析对结构做进一步确证，但目前液相色谱-质谱联用仪价格昂贵，尚不能普及使用。姜建国等[9]采用液相色谱-质谱联用法检测中药是否添加激素，样品以VenusilMPC18柱色谱柱进行分离，以0.01mo1/L醋酸铵-乙腈(45：55)为流动相，二极管检测器扫描表明，醋酸泼尼松对照品溶液和供试品溶液中相应的紫外光谱图一致，并得到相应的一级质谱准分子离子。综合色谱保留时间、准分子离子和紫外光谱三方面的信息，证实风湿筋骨康胶囊非法添加了醋酸泼尼松。韩加怡等[10]利用LC-MS和AA等方法检测确定中成药豨莶风湿片中掺有双氯芬酸钠，即通过TLC，HPLC，LC-MS，AA四种色谱和光谱的联合检测，逐步证明中成药豨莶风湿片中掺有双氯芬酸钠。刘福艳等[11]采用液相色谱-离子阱质谱联用法对6种抗风湿中药制剂的提取液进行分析，选用AgilentC18柱，以0.02mol/L醋酸铵-1%醋酸溶液-甲醇(32：3：65)为流动相，通过相对分子质量、一级及二级质谱碎片信息、液相色谱保留时间和紫外光谱四方面的信息对抗风湿制剂中非法掺入的化学物质进行定性鉴别，结果6批抗风湿类中药，3批检出掺有萘普生，其中2批检出同时掺有吲哚美辛。三、我所近几年来在抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质的检出情况2004年以来，我所在中成药及保健品非法添加化学物质方面很关注，以日常筛查及建立补充检验方法及项目来对可疑中成药及保健品进行检测，对抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质检测情况见表1表1无锡所在抗风湿及镇痛类中成药及保健品非法添加化学物质情况年份品种批号检出可疑成分检测方法2006天麻胶囊050802盐酸罗通定TLC、HPLC、LC-MS2006天蚕镇痛片875043，875016双氯芬酸钠TLC、HPLC2006抗痛风中成药无（群众举报）醋酸泼尼松TLC、HPLC2006美诺骨德参酮片080501美洛昔康TLC、HPLC2009抗风湿胶囊无证经营萘普生、吲哚美辛、双氯芬酸钠、布洛芬、吡罗昔康TLC、HPLC2009追风透骨丸无证经营吲哚美辛、布洛芬、醋酸泼尼松TLC、HPLC为提高检出效率，药检工作者逐渐摸索出同时测定多种非法添加化学成分的液相系统，笔者针对抗风湿及解热镇痛类中成药和保健品非法添加化学物质建立了2~3个液相系统，将可能添加的化学物质进行有效的分析。在建立中药非法添加化学药品的检测方法时，笔者按照如下的思路进行分析检测：首先了解非法添加化学成分及基质的信息，根据中成药的处方以及药效、临床上提供的毒副作用、群众举报等方面的信息初步确定非法添加化学成分的种类及其理化性质。其次，寻找目标化学物质的对照品或原料，初步确立分析手段。最后进行样品分析，与对照品或原料比较，相互验证，确证阳性样品。综上所述，近年来在中药制剂中非法掺入化学药物以醋酸泼尼松、双氯芬酸钠、吲哚美辛、萘普生、吡罗昔康为常见。在检验方法或技术方面，大部分文献均采用TLC、HPLC、HPLC-MS等技术，TLC操作简便、成本较低，易在基层推广，可用于初步筛选可疑样品；UV法可作为有力的鉴别工作；通过HPLC分离样品，用二极管阵列检测器检测，可基本确定样品中是否含有某一化学成分；有条件者再采用HPLC-MS联用或直接电喷雾三重四级杆质谱技术等手段深入分析，将更进一步确保结果准确无误。灵活运用各种检测方法，在以后的检验工作中有针对性地进行检测，就可以更快更准地发现非法添加物质，为监管部门提供技术支持。但作为出具检验报告书的药品检验部门则必须严格按国家食品药品监督管理局批准的方法进行检验，方可判定是否非法添加化学物质，目前大多以HPLC-MS-MS联用法作为主要的检验手段。但由于补充检验方法及项目具有一定的时效性，在具体工作中，仅依靠国家食品药品监督管理局的授权方法是远远不够的，建议国家食品药品监督管理局出台有关中成药非法添加化学药品检验方面的指导原则，使各级药品检验机构在工作中能够灵活把握，避免出现药检机构对于使用非标方法检测出来的结果无法出具正式报告而使非法添加化学药品的中成药继续逍遥法外的尴尬局面[12]。参考文献1夏瑞,董素英,车宝泉薄层色谱法快速鉴别中药制剂中的糖皮质激素[J].药物分析杂志,2008，28（3）：470-4712周镒,许啸,龚旭东等薄层色谱法测定天麻胶囊中掺入的吲哚美辛[J].药学与临床研究,2008，16（2）：161-1623刘元瑞,葛海生,赵康虎等应用TLC-MS技术检测镇痛中药制剂中添加的3种化学药品[J].中国药学杂志,2008，43（22）：1747-17504郭瑞峰,郄冰冰,何建峰反相高效液相色谱法检查中药保健品中的激素类西药成分[J].《中国药业》,2007，16(5):23-245夏瑞,车宝泉RP-HPLC方法鉴别中药制剂中的糖皮质激素[J].《药物分析杂志》,