搜索
专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养了解有关微生物及培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：课题背景微生物研究和应用的前提：如何获得纯净培养物？防止杂菌入侵，获得纯净的培养物①提供合适的营养和环境条件②确保其他微生物无法混入一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌主要内容一基础知识1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2.类型：按物理性质划分：按化学成分划分：按用途划分：（一）培养基固体培养基液体培养基有无凝固剂琼脂分离鉴定工业生产（1）按物理性质划分：天然培养基合成培养基:（2）按化学成分划分：按照需要的成分进行配置。（3）按用途划分：选择培养基:鉴别培养基:加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物。加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物。加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌3.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源（二）无菌技术防止外来杂菌的污染.1.哪里需要无菌？2.如何控制无菌？无菌的意义：（1）实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。（2）培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。（4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。1.无菌的范围消毒:2、无菌技术的种类灭菌:使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。※芽孢：在某些细菌生长的一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或柱形的，抗逆性强的休眠体。※孢子：真菌所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接发育成新个体。接种室内空气、接种箱、超净工作台用紫外线照射30min紫外线消毒实验者的手臂、实验台等酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌的70～75℃,30min；80℃,15min巴氏消毒日常食物、罐装食品100℃,5～6min煮沸消毒法适用范围条件方法（1）消毒15～30min100kPa，121℃培养基、实验器材高压蒸汽灭菌1～2h干热灭菌箱（160℃～170℃）耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）干热灭菌烧红酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种的工具、试管口、瓶口灼烧灭菌灭菌时间所需条件适用对象灭菌方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手大肠杆菌的纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基二实验操作（二）纯化大肠杆菌1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：加棉塞、包牛皮纸、橡皮筋勒紧（一）制备培养基培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌阅读课本P17，思考与讨论倒平板操作后面的四个问题。计算称量溶化调节pH灭菌倒平板（一）制备培养基1.将培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。12342.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手立即盖上皿盖。4.等待平板冷却凝固（约需5～10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：①防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染②避免培养基中水分过快蒸发。答：最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。5.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体单个细胞单个菌落（二）纯化大肠杆菌从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的过程。何为分离纯化？如何纯化？接种常见方法平板划线法操作核心防止杂菌污染，保持培养物纯度如何分散成单个细胞？稀释涂布平板法斜面接种穿刺接种微生物群分散1.平板划线法：分区划线法连续划线法（1）概念与原理：聚集的菌群连续划线稀释分散单个细胞菌落生长繁殖1.灼烧接种环，直至将接种环_______2.在_______旁冷却接种环，并打开棉塞3.试管口通过火焰.4.将已______的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液6.将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划__________条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。5.试管通过火焰，并塞上棉塞火焰冷却三至五7.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_______开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四区域内划线。末端烧红8.将平板_____放入培养箱中培养。倒置第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环灭菌接种环（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者接种结束后杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞每次划线前杀死接种环上原有微生物取菌种前目的灼烧时期（2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。（3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3个划线平板1个不划线平板（重复实验）（空白对照）（3）培养放入37℃恒温箱中培养12h～24h2.稀释涂布平板法①菌液的梯度稀释：②涂布平板操作：(1)概念与原理：聚集的微生物单个细胞菌液梯度稀释菌落涂布平板(2)操作：生长繁殖①系列梯度稀释操作9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰1～2cm处。②涂布平板操作：(1)涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如:①酒精灯与培养皿的距离要合适②吸管头不要接触任何其他物体③吸管要在酒精灯火焰周围等等各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照稀释103倍稀释104倍稀释105倍放入37℃恒温箱中培养12h～24h（3）培养1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。三、结果分析与评价3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃四菌种的保存3～6个月，转移培养练习1.不能作为异养微生物碳源的是（）A．牛肉膏B．含碳有机物C．石油D．含碳无机物D2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（）A．碳源B．氮源C．无机盐D．生长因子A3.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素，可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（）①大肠杆菌②霉菌③放线菌④纤维素分解菌A.④②B.①②C.①③D.③④解析：选A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素，大部分微生物却不能；培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌，但霉菌能够生长。习题巩固1.获得纯净培养物的关键是A、将用于微生物培养的器皿.接种用具和培养基等器具进行灭菌B、接种纯种细菌C、适宜环境条件下培养D、防止外来杂菌的入侵2.下列操作与无菌技术无关的是A、接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B、接种前用火焰烧灼接种针C、培养在50℃左右时搁置斜面D、在酒精灯的火焰旁完成3.外科手术器械和罐头食品的处理,要以能够杀死什么为标准A、球菌B、杆菌C、螺旋菌D、芽孢DCD编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml4．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类是。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入，用于培养，自养型微生物含碳有机物金黄色葡萄球菌（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养。（4）表中营养成分共有类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是。（6）右表中各成分重量确定的原则是。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分。固氮微生物3调整pH依微生物的生长需要确定琼脂（或凝固剂）编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml