影响灭活的因素

影响灭活的因素主讲人：第四组二〇一三年六月九日一．灭活的概念是指破坏病原微生物的生物学活性、繁殖能力及致病作用，或者破坏外毒素的毒性作用但尽可能不影响其免疫原性，用以只别的灭活疫苗活类毒素。灭活是兽用生物制品制备过程中的一项必不少的环节。二．灭活的方法灭活方法可分为：1、物理灭活法热灭活、超声波灭活法、紫外线灭活法、射线灭活法等。2、化学灭活法利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变而产生的使其丧失生命力、感染性或活性的方法。三．常用的灭活剂甲醛甲醛及其37%——40%溶液即福尔马林，是病毒学中普遍应用的一种病毒灭活剂，在动物灭活疫苗制作中尤为常用。用甲醛灭活的时间长，一半需要在37—39oC处理24h以上或者更长的时间。灭活的浓度为0.1%--0.8%结晶紫它主要是它的阳离子与微生物蛋白质的羧基形成带弱点的化合物，妨碍微生物的正常代谢，扰乱微生物的氧化还原作用，使电势升高而不适于卫生物的生长繁殖。对革兰氏阳性菌主要是干扰细胞壁肽聚糖的合成。苯酚为无色结晶或白色榕块，有特殊气味，有毒及腐败性，易潮解，溶于水及有机溶剂。苯酚的灭活机制是使微生物的蛋白质发生变性和抑制特异的酶系统（脱氨酶、氧化酶等）的活性，从而导致微生物死亡，常用浓度为0.3%--0.5%。四．常用灭活疫苗及灭活方法猪丹毒灭活疫苗0.2%—0.25%甲醛370C18—24h禽巴氏杆菌蜂胶灭活疫苗0.1%甲醛370C7—12h猪多杀性巴氏杆菌病疫苗0.1%甲醛370C7—12h犬瘟热肝脾组织灭活苗0.1%甲醛370C24h鸡传染性法氏囊病组织灭活苗0.4%370C20—24h猪瘟结晶紫疫苗血毒4：甘油结晶紫1（1000ml甘油+2.5g结晶紫）370C--380C6—8d狂犬病羊脑组织苗组织苗1：苯酚甘油溶液4（含60%甘油及1%苯酚的蒸馏水。360C7d破伤风类毒素0.4%甲醛370C--380C21—31d五．影响灭活的因素所谓的灭活效果，是指灭活的完全性，即被灭活物的活性是否能完全丧失或破坏，并且灭活后是否保留良好的抗原性。灭活效果，常受灭活剂量、温度、时间、PH、灭活物种类、浓度等因素的影响。1、灭活的特异性指某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物则效力很差。酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，对真菌和病毒不太敏感;阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对组织无刺激性，能杀死多钟革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌芽孢作用弱。2、微生物的种类及其特性不同种类的微生物如细菌、病毒、真菌等对灭活剂的敏感性不同，同一种微生物在不同的生长阶段对其灭火剂的敏感性不同，如细菌的芽孢对其灭活剂的抵抗力大于繁殖体，生长期细菌对灭活剂的敏感度应大于静止期。另外微生物的含氧浓度也会影响灭活的效果，一般含氧量越高，甲醛等灭活剂的消耗越大，灭活脱毒越慢。3、灭活温度通常同一浓度灭活剂的灭活速度与温度成正比。温度每上升100C，细菌死亡率可成倍增加。金属盐类的杀菌效果增加2.5倍;苯酚的杀菌作用增加5--8倍。但是，如果温度超过400C或更高，将会影响微生物的抗原性。4、灭活剂的浓度灭活剂的浓度越高，微生物灭活脱毒的速度越快，抗原损失的也越大。分批加入灭活剂棵保护抗原的免疫原性。5、灭活时间一般灭火时间与灭活浓度及灭活温度反比。但是为了保证品质质量，短时间能达到灭活效果最好。6、pHpH对细菌的灭活作用影响很大。在微酸性是灭活速度慢，细菌抗原性保持较好；在碱性时灭活速度快，蛋抗原性易受破坏；pH也影响灭活剂的电离度，一般来说，未电离的分子较易通过细菌细胞膜，灭活效果较好。7、有机物的存在生物制品中含有较多的蛋白质等有机物质，这些有机物质吸附于灭活剂的表面或者与灭活剂的化学基团结合，影响灭活剂的灭活能力。受这种因素影响较大的灭活剂有苯胺类染料、汞制剂、阳离子去污剂等。12畜牧6班