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1专题二课题１微生物的实验室培养1、有关平板划线操作正确的是（）A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养2、下列常用的无菌操作中错误的是()A．无菌操作不要求杀死培养基中的一切细菌B．用酒精擦拭双手方法对操作者进行消毒C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精３．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是()A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质上是完全相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法４．(2012·广东模拟)下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的()。A．利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D．用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先减少后增加５、为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列叙述不正确的是()A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4℃保藏的方法6．(2013·衡阳模拟)下列关于大肠杆菌的培养中叙述不正确的是()A．在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件B．在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行消毒C．若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度D．使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃7．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是()A．接种时再拿起来方便B．在皿底上标记日期等方便C．正着放置容易破碎D．防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染８．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为()①溶化②调pH③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③９、从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从_______环境采集。（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择的培养基，并在条件下培养。（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图甲效果的接种方法是，获得图乙效果的接种方法是。（4）配制培养基时各种成分在熔化后分装前必须进行，接种前要进行。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在条件下进行。1０．(8分)下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5g10g5g20g1000mL(1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行________处理。该培养基从物理性质上分类属于________。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是________和________。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举两项)_______________________________________________________________。１１、（2011新课标）【生物——选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。2１２．(2009·宁夏卷)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(消毒、灭菌)；操作者的双手需进行清洗和________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的________。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的________。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_______________________________________________________________。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。１３．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题：(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有基本成分是________和________。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是________。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐______细菌，这种培养基被称为________。专题二课题１微生物的实验室培养答案１－５ＤＤＢＤＤ６-８ＢＤＢ９１０、答案：(1)氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌固体培养基(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染。(任选两个)１１.【答案】（1）原油选择（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）强（4）干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰１２答案：(1)温度酸碱度易培养生活周期短(2)灭菌消毒损伤DNA的结构(3)比例合适(4)鉴定(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌１３答案：(1)氮源(碳源不作要求)碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌(3)恒温培养箱无菌水(4)多高(5)盐(或NaCl)选择培养基3课题２土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比（）A．比实际值高B．比实际值低C．和实际值一致D．比实际值可能高也可能低2.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24-48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数3．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做()。A．鉴别培养基B．加富培养基C．选择培养基D．基础培养基4.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是（）A.图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B.如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C.若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D.使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落5.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：（1）制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。（2）为了得到更加准确的结果，你选用法接种样品。（3）适宜温度下培养。结果分析：（1）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信，其理由是。A．一个平板，统计的菌落数是230B．两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C．三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260D．四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250（2）一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0．2mL）。（3）用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量，因为。6.为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理:。（2）培养基中加入尿素的目的是筛选，这种培养基属于培养基。（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和，实验中需要振荡培养，原因是。（4）转为固体培养基时，常采用接种，获得单菌落后继续筛选。（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行处理后，才能倒掉。7.根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、尿细菌、纤维杆菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容：首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物4的混合液分别接种到各种培养基上培养。（1）利用无氮培养基可筛选出。（2）用不含有机碳源的选择培养基可筛选出。（3）酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入。（4）用含较高浓度NaCl的培养基可选择出；或者根据菌落的颜色呈现色，将其挑取单独培养。（5）利用伊红和美蓝培养基培养混合菌，菌落呈色并带有金属光泽的是，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红和美蓝鉴别培养基来确定。（6）在无氧环境下培养混合菌，可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制的生长，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出。（7）利用碳源为纤维素的液体培养基可筛选。（8）若筛选尿细菌，则配制的培养基特点是。8.某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤，并回答有关问题：（1）主要步骤：①制备两种培养