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湘南学院教师备课课程名称：医学微生物学任课老师：授课对象：授课地点：形态学实验室课时量：个学时授课日期：讲授方法：示教法、实验教学法教具：CAI课件、显微镜、玻片、香柏油、去油剂等讲授课题：实验一细菌的形态与结构【目的要求】1、学会正确使用显微镜油镜及其保护法2、认识细菌的基本形态3、认识细菌的鞭毛、荚膜、芽胞【教学重点】油镜的使用和保护、细菌的基本形态、特殊结构【教学难点】油镜的使用原理及方法【思考题】1、如何识别油浸镜？油浸镜的使用步骤怎么样？2、镜下观察细菌染色标本时应注意哪些方面？【参考文献】1、刘晶星主编.医学微生物学与寄生虫学（第三版）.人民卫生出版湘南学院教师备课社，2002，72、唐珊熙主编.微生物学与微生物学检验(卫生部规划教材).人民卫生出版社，2001，2。【板书设计】实验一细菌的形态与结构一、实验目的1、学会正确使用显微镜油镜及其保护法2、认识细菌的基本形态3、认识细菌的鞭毛、荚膜、芽胞二、实验内容（一）实验室规则（二）CAI课件学习（三）油镜的使用1、原理2、使用方法3、保护法（四）细菌的基本形态的观察（操作）（五）细菌的特殊结构的观察（操作）【教学步骤】导言:细菌的形态学检查是细菌检验的重要方法之一,可根据其形态、结构和染色性初步确定其种属，对及时选用抗生素治疗疾病有一定参考意义。实验一细菌的形态与结构一、实验目的1、学会正确使用显微镜油镜及其保护法2、认识细菌的基本形态湘南学院教师备课3、认识细菌的鞭毛、荚膜、芽胞二．实验内容(一)实验室规则１．严肃认真，室内保持安静。认真听讲，仔细操作，课前预习，按时完成实验报告。２．注意安全，避免发生事故和实验室感染。穿好工作服,不要用手摸头面部，禁止将食物带入实验室或将实验室物品带出。用过的实验器材放在指定地方。若发生事故，应立即报告老师。离开实验室前，请洗手。３．爱护公物，节约使用实验材料。如有损坏应立即报告老师并进行登记，听候处理。４．实验后打扫卫生，关好水电门窗。(二)CAI课件学习细菌的三种形态、排列、镜下可见的三种特殊结构（三）显微镜油镜的使用及保护法1、油镜的识别“油”、“oil”、“HI”(HomogeneousImmersion)放大倍数“100×”2、油浸镜的使用原理（绘图讲解）香柏油的折光率近似于玻片的折光率，滴加香柏油能减少光线的折射。3、油浸镜的使用及保护法湘南学院教师备课⑴低倍镜对光(光线宜强：用凹面采光；聚光器上升；光圈全部打开)。⑵滴油，转换油浸镜。（注意油量，载物台应平放）⑶调焦（先粗后细，注意油浸镜始终浸泡在油中）。保护法：干净纸→二甲苯(去油剂)→干净纸（一字法擦）。(四)细菌基本形态的观察(操作)1、葡萄球菌（G+，菌体球形，葡萄状排列）、2、痢疾杆菌（G-、杆状、短小、散在排列）3、水弧菌(G-，菌体弯曲成弧状、散在排列)(五)细菌特殊结构的观察(操作)注意菌体和各特殊结构的颜色，鞭毛的数目、形态、长短和位置，荚膜的厚度，芽胞的形态、大小、位置。1、鞭毛(变形杆菌)：周鞭毛，有的脱落了。菌体和鞭毛都呈红色。2、荚膜(肺炎球菌)：菌体成双排列，紫色，荚膜无色。3、芽胞(破伤风杆菌)：菌体G+杆状，顶端有一个圆形较菌体大的不着色的芽胞。小结：油浸镜的使用关键是：光线宜强，调焦过程中始终保持油镜头浸在油中，即油镜头与玻片间无空气段。湘南学院教师备课课程名称：医学微生物学任课老师：授课对象：授课地点：形态学实验室课时量：个学时授课日期：讲授方法：示教法、实验教学法教具：CAI课件、显微镜、玻片、香柏油、去油剂等讲授课题：实验二革兰氏染色法【目的要求】掌握革兰氏染色法、熟悉细菌涂片的制备【教学重点】革兰氏染色方法、结果【教学难点】脱色时间的把握授课时数：2学时讲授方法：实验教学法、示教法教具：示教用玻片、混合菌液、染液、显微镜、粉笔等板书设计：实验二革兰氏染色法（GramStain）一、实验目的二、实验器材1、混合菌液（葡萄球菌与水弧菌）、水弧菌湘南学院教师备课2、染色液：结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%酒精,稀释复红3、其它：玻片、酒精灯、接种环、显微镜等三、实验原理（略）四、实验步骤及方法五、实验结果（绘图）六、临床意义七、注意事项教学步骤：导言：最经典、最常用的细菌鉴别染色法是革兰氏染色法。由丹麦学者革兰首创。实验二革兰氏染色法（GramStain）一、原理G+菌细胞壁致密、含粘肽多、95%的酒精不易进入，且能使细胞壁脱水浓缩、通透性减低，使胞内染料一碘复合物不易脱出，仍为紫色。而G一菌细胞壁疏松、含粘肽少、脂质多、95%的酒精溶解脂质后易进入细胞而使之脱色，复染后为红色。二、步骤1、制片：⑴涂片：要求薄而均匀⑵干燥：可自然干燥或在火焰上方利用热空气干燥⑶固定：涂膜面向上，在火焰外焰以中等速度通过三次，以玻片反面湘南学院教师备课触及手背皮肤不烫为宜.(固定的目的是什么？)2、染色：⑴初染：结晶紫染液1分钟⑵媒染：卢戈氏碘液1分钟⑶脱色：95%酒精约30秒⑷复染：稀释复红1分钟3、结果：（绘图）染成紫色的为G+菌，染成红色的为G—菌4、临床意义（提问）5、注意事项：⑴涂片要薄而均匀⑵固定温度要适宜⑶脱色时间要把握好⑷染液的质量、菌龄等要注意（5）染液要均匀覆盖在菌膜上小结：革兰氏染色的关键在于严格把握脱色程度，此外，其结果与培养基成分，培养条件，菌龄及操作技术等有关。思考题：影响革兰氏染色结果的因素有哪些？参考文献：1、柴顺根主编.临床微生物学及检验实验指导.吉林科技出版社，19952、刘晶星主编.医学微生物学与寄生虫学（第三版）.人民卫生出湘南学院教师备课版社，2002，7课程名称：医学微生物学任课老师：授课对象：授课地点：形态学实验室课时量：个学时授课日期：讲授方法：示教法、实验教学法教具：CAI课件、显微镜、玻片、香柏油、去油剂等讲授课题：实验三细菌的生理【目的要求】1、了解培养基的制备程序。2、掌握细菌在液体、半固体、固体培养基中的生长现象。3、掌握细菌的接种法。【教学重点】细菌在液体、半固体、固体培养基中的生长现象【教学难点】细菌的接种法。授课时数：2学时讲授方法：实验教学法、示教法教具：培养基成分、菌钟、接种环、酒精灯等板书设计：实验三细菌的生理学湘南学院教师备课一．实验目的1、了解培养基的制备程序。2、掌握细菌在液体、半固体、固体培养基中的生长现象。3、掌握细菌的接种法。二．实验内容(一)培养基的种类及制备程序（示教）(二)细菌的接种法(操作)(三)细菌培养法(四)细菌在培养基中生长现象的观察(示教)教学步骤：实验三细菌的生理学一、培养基的种类及制备程序（示教）（一）培养基的种类：1、按用途可分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、厌氧培养基。2、按理化性状可分为：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。（二）基础培养基的制备程序：调配→溶化→纠正PH值（目测比色法）→过滤澄清→分装→灭菌（此两步依具体情况而定）→检定(质量检验、无菌检验)→冰箱保存。1、调配量筒取800ml蒸馏水，先加入少量到三角烧瓶中、再按基础培养基配湘南学院教师备课方用天平准确称取各成分，称好后连用纸一并放入三角烧瓶，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。2、溶化用玻棒轻轻搅拌，并将称量纸轻轻挑出，也可放在电炉上隔着石棉网加热溶化或（在水浴箱中）隔水溶化。4、矫正PH值：用比色法（单管法、在四孔比色架上进行)矫正时应比实际需要的PH高0.1～0.2注意加碱或加酸时要精确缓慢，每加一滴后要充分混匀，比色不足再加第二滴（有时需控制半滴）4、过滤澄清：可省5、分装：量不宜超过2/3琼脂斜面：试管的，制成斜面长度约试管长度的，趁热将试管斜置，保持试管下端有1cm柱高。平板：9cm平皿倾注培养基13～15ml，倾注平板先轻摇，使培基平铺再静置,待凝固。(倾平板时，让培养基盖过平板底部4/5，此时量即可）斜面、平板都先灭菌后分装、倾注平板、需先冷至500C再倾注、避免过多冷凝水。（斜面可先分装后灭菌、避免污染）6、灭菌：高压蒸气法121.30C,15～30分钟15磅/英寸2、0.103MPa/cm2、1.05Kg/cm2滤过除菌法：用于糖溶液、尿素、血清及其他因加热即破坏的物质。湘南学院教师备课7、检定：无菌检验和质量检查8、保存；40C冰箱、主要是防止干涸、变质、污染、不宜贮存过久，液体培养基应直立放置，琼脂平板应将底朝上，盖在下（倒置），用牛皮纸包裹或装于保鲜袋内，以减少水分蒸二、细菌的接种法(操作)人工培养细菌时，需将标本（细菌）接种于培养基再行培养。（一）、接种工具的有关知识接种环：常用于挑标本、菌液、划线接种；接种针：常用于挑菌落、穿刺接种、斜面接种。（二）、接种程序灭菌接种环（针）→俟冷→沾取细菌标本→进行接种（包括启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环（针）灭菌（三）、接种法（依不同用途和不同培养基而定）1、平板划线接种法（1）、曲线划线法（2）、分区划线法接种环与培养基表面呈45度角划线，利用手腕的力量快速在平板上左右来回作密而不重的曲线连续划线，充分利用平板。分区划线时，每画一区要烧灼接种环，后一区的划线与前一区相交数次后，后面的划线不相交。2、斜面划线法湘南学院教师备课（1）纯培养和保存菌种时，可用接种环也可用接种针。先从斜面底部沿斜面向上划一条直线，再在斜面作“S”划线。（2）、鉴别培养基中用接种针、先穿接种、再在斜面作“S”划线。注意：挑了菌的接种环不要接触试管壁。3、液体培养基接种法此接种法应避免接种环与液体过多的接触，以免形成气溶胶，造成实验室污染。4、半固体培养基接种法（穿刺接种法）不能穿透到底，退出时应按原路线退出。三、培养法1、需氧培养法370C恒温箱倒置培养（平板），试管则竖直在试管架上培养，18～24h后观察。2、厌氧培养法3、二氧化碳培养法四、细菌在培养基中生长现象的观察(示教)接种后细菌经一般培养法(需氧培养法)37℃24h后观察结果。1.在液体培养基中⑴均匀混浊如葡萄球菌;⑵沉淀形成如链球菌;湘南学院教师备课⑶形成菌膜如枯草杆菌。2.在固体培养基中⑴菌落：不同细菌的菌落其大小、形态、边缘、凹凸、色泽、透明度、溶血等不同。⑵菌苔。3.在半固体培养基中⑴沿穿刺线生长:无动力;⑵向穿刺线周围扩散生长:有动力。注意事项：1.接种时不能划破培养基。2.严格无菌操作。3、分区划线每划完一区需烧灼接种环；液体接种时避免将接种环在液体培养基中搅拌形成气溶胶造成污染。4、接种后及时标上标鉴，标明菌种、时间、姓名。小结：细菌接种在适当的培养基中，经适当的培养基可形成肉眼可见的生长现象，并依不同的生化反应结果进行鉴定。思考题：1.固体、液体、半固体培养基各有何用途？2、简述平板划线接种的目的。参考文献：湘南学院教师备课1.刘晶星主编.医学微生物学与寄生虫学（第三版）.人民卫生出版社，2002，72.倪语星主编，微生物学与微生物学检验实验指导(卫生部规划教材)，人民卫生出版社，2000，2。湘南学院教师备课课程名称：医学微生物学任课老师：授课对象：授课地点：形态学实验室课时量：个学时授课日期：讲授方法：示教法、实验教学法教具：CAI课件、显微镜、玻片、香柏油、去油剂等讲授课题：实验四细菌的分布、消毒灭菌【目的要求】1、证实细菌在自然界和人体的分布2、树立无菌观念3、验证高温、紫外线、化学消毒剂对细菌的影响4、熟悉常用的消毒灭菌器【教学重点】细菌在自然界和人体的分布【教学难点】无菌观念的树立授课时数：2学时讲授方法：实验教学法湘南学院教师备课教具：菌种、培养基、棉签、化学消毒剂等板书设计：实验四细菌的分布、消毒灭菌一、实验目的1、实细菌在自然界和人体的分布2、树立无菌观念3、验证高温、紫外线、化学消毒剂对细菌的影响4、熟悉常用的消毒灭菌器二、实验内容1、空气中细菌的检查（操作）2、咽喉部细菌的检查（操作）3、手指皮肤消毒前后的细菌的检查（操作）4、煮沸消毒试验(示教)5、紫外线杀菌试验（操作）6、药敏试验（操作）7、常用消毒灭菌器的介绍(示教)教学过程：导言：细菌广泛存在于自然界和人体，今天用实验的方法证实细菌在