微生物标本采集手册

1微生物标本采集手册目录第一章血液及骨髓标本的微生物检验.................2第二章痰标本的微生物检验.........................6第三章上呼吸道标本的微生物检验...................8第四章尿液标本的微生物检验......................9第五章粪便标本的微生物检验......................11第六章化脓和创伤标本的微生物检验................13第七章脑脊液标本的微生物检验....................15第八章胆汁标本的微生物检验......................16第九章胸水标本的微生物检验......................18第十章腹水标本的微生物检验......................19第十一章心包液标本的微生物检验..................20第十二章关节液标本的微生物检验..................22第十三章鞘膜积液标本的微生物检验................23第十四章生殖道标本的微生物检验..................24第十五章外眼部标本的微生物检验..................272第一章血液及骨髓标本的微生物检验一、检查项目血液、骨髓液的细菌培养二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标本送检指征】病人出现以下临床表现，或同时具备以下几种临床表现时应采集血培养。1发热（≥38℃）或低温（≤36℃）2寒战3白细胞增多（＞10×109/L，特别有“核左移”时）4粒细胞减少（成熟的多形核白细胞＜1×109/L）5血小板减少6皮肤、粘膜出血7昏迷8多器官衰竭9血压降低10呼吸加快几种特殊情况：1可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细菌，应增加尿液和脑脊液培养。2老年菌血症病人可能不发热或不低温，如伴有身体不适、肌痛或中风，可能是感染性心内膜炎，也应采取血培养。骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的，临床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率会远高于血培养。3【标本采集的容器】安图双向培养瓶【标本的采集方法】防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题，采血前严格执行消毒程序是十分重要的。1皮肤消毒程序：严格按以下三步法进行：(1)75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。(2)用一根碘酊或聚维酮碘（碘伏）棉签消毒皮肤，1～2％碘酊作用30s或聚维酮碘作用60s，从穿刺点向外以1.5～2cm直径画圈进行消毒。(3)75％酒精脱碘。对碘过敏的病人只能用75%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。2培养瓶消毒程序(1)用75％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2)酒精作用60s。(3)在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。3培养瓶接种程序抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，然后再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。【标本采集注意事项】1血培养采集的时间和频率(1)采血培养应尽量在抗菌药物使用之前，在24h内采集2～3份血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养），每次2瓶。因为研究已证实，2～3份血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。4(2)入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3天，每天采集2份，可选用能中和或吸附抗菌药物的培养基。(3)对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒战或发热后1h采集。因为发热时血液中可能没有细菌。(4)可疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者，应在不同部位采集2～3份血培养。(5)不明原因发热，如隐性脓肿、伤寒热和波浪热，先采集2～3份血标本，24～36h后估计体温升高之前，再采集2份以上。(6)可疑为菌血症或真菌血症，但血培养持续阴性，应改变血培养方法，选择其它种类的培养瓶，如高渗培养瓶，中和抗生素培养瓶，结核菌培养瓶等，以获得罕见的或苛氧的微生物。(7)可疑为细菌性心内膜炎，在1～2h内多部位采集3份血标本，如果24h阴性，再采取3份以上的血标本。2采血量成人：推荐每个血培养瓶应加的血量为5～10ml，血液和肉汤比为1：5～10（体积：体积）。儿童：因很难获得大量的血液，一般静脉采血1～5ml用于血培养。血液量太多或太少都不利于细菌的检出，血液的培养量每增加1ml,阳性率增加3～5％。人体血液内包含各种抑制细菌生长的因子或抗生素，注入血液太多可能会抑制细菌的生长。骨髓采血量一般为1～2ml。【标本的送检地点】检验科微生物室*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。【标本的保存】含血样的培养瓶应立即送往实验室；如不能及时送检，应将其放在室温，切忌冰箱存放。因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡，而使培养阳性率下降。5在运往实验室的途中如果天气寒冷，应采取一定的保温措施。6第二章痰标本的微生物检验一、检查项目痰液的细菌培养、真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标本送检指征】1咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰。2咯血：肺结核病人常痰中带血。3呼吸困难4发热5胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸痛。*肺部感染的患者有25～50％可能发生菌血症，应同时作血培养。【标本采集容器】一次性无菌留痰盒。【标本采集方法】1自然咳痰法：咳痰前，先用清水或漱口液反复漱口（为减少口腔正常菌群污染标本），然后用力自气管中咳出第一口痰于无菌容器内。对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入45℃10％NaCL水溶液，使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽。2气管镜采集法：用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取得标本。3胃内采痰法：无自觉症状的肺结核病人尤其婴幼儿不会咳嗽，有时将痰误咽入胃中，可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。4管穿刺法：主要用于厌氧菌培养7小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿受到刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。【标本采集注意事项】1采集时间：（1）以晨痰为好。多数病人清晨痰较多，易于采集。且清晨痰含有的病理成分较多。会增加培养的阳性率。（2）最好在应用抗菌药物之前采集标本。2送检采集后应立即送检，以防止某些细菌在外环境中死亡。做结核分支杆菌和真菌培养的标本如不能及时送检，可放4℃保存，以免杂菌生长。【标本的送检地点】检验科微生物室*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。8第三章上呼吸道标本的微生物检验一、检验项目上呼吸道标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标本送检指征】1病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。2细菌性咽－扁桃体炎：明显咽痛、畏寒、发热，体温可达39℃以上。3上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管－支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。【标本采集容器】咽拭子或鼻咽拭子。【标本的采集方法】嘱患者用清水反复漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，用无菌棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次，拭子要避免接触口腔和舌粘膜。【标本采集注意事项】1采集时间：应于抗生素应用之前。时间上可无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。2送检：应立即送检。【标本的送检地点】检验科微生物室。*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。9第四章尿液标本的微生物检验一、检查项目尿液的细菌培养，真菌培养、结核菌培养、真菌涂片、结核菌涂片。二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标本送检指征】1有典型的尿路感染症状；2肉眼脓尿或血尿；3尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；4不明原因的发热，无其他局部症状；5留置导尿管的病人出现发热；6膀胱排空功能受损；7泌尿系统疾病手术前。【标本采集容器】无菌试管或无菌尿液标本留取容器。【标本的采集方法】1清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围，开始排尿，将前段尿排去，插入性接取中段尿约10ml于无菌容器中，立即送检，于一小时内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。2耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦，病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。103直接导尿：按常规方法对会阴部进行清洗消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道的细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。4小儿收集包：对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。5留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者，应在更换新尿管时留取尿标本。【标本采集注意事项】一般于晨起第一次尿液送检。应选在抗菌药物应用之前。【标本的送检地点】检验科微生物室。*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。11第五章粪便标本的微生物检验一、检验项目粪便标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培养、肠道菌群、真菌涂片、结核菌涂片。二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标本送检指征】1急性腹泻：大便次数明显增多，腹痛，里急后重，往往伴有发热，大便性状为粘液便或脓血便。2慢性腹泻：大便次数多，多为稀便，伴有全身乏力等症状。3无痛性大量水样便或米泔样稀便。4先吐后泻：恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史，多为细菌性食物中毒所致。5抗生素治疗后腹泻：常发生于长期抗生素治疗后，糊状便，排便次数增加。6高热惊厥：通常为中毒性痢疾，多见于婴幼儿和小儿。【标本的采集容器】一次性无菌便盒。【标本的采集方法】1自然排便采集法：自然排便后，调取有脓血粘液部位的粪便2～3g，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。2直肠拭子法：如不易获得粪便时或排便困难的患者及幼儿，可采用直肠拭子方法采集，取出后置于灭菌容器内送检。【标本采集注意事项】1采集时间：应在急性期采样，以提高检出率，最好在用药前。2送检：应立即送检，如不能立即送检，放入Cary-Blair运送培养基或pH7.012的磷酸盐甘油（0.033mol/LPBS与等体积的甘油混合）中运送和保存。【标本的送检地点】检验科微生物室。*标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。13第六章化脓和创伤标本的微生物检验一、检验项目脓汁和创伤部位分泌物的细菌培养、真菌培养、结核菌培养、一般细菌涂片、真菌涂片、结核菌涂片。二、标本采集【标本采集前的注意事项】应在抗生素应用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。【标