搜索
第25卷第28期2015年10月中国现代医学杂志ChinaJournalofModernMedicineVol.25No.28Oct.2015文章编号：1005-8982（2015）28-0036-05·临床论著·尿足细胞标志蛋白podocalyxin在肾病综合征合并急性肾损伤诊断中的价值王福珍1，丘昭文1，朱杰2，吴森超1，林冲云1，王朝晖3（1.福建医科大学附属龙岩市第一医院肾内科，福建龙岩364000；2.上海师范大学数理学院，上海200234；3.上海交通大学医学院附属瑞金医院肾内科，上海200025）摘要：目的探讨原发性肾病综合征（PNS）患者尿液中podocalyxin（PCX）的变化对急性肾损伤（AKI）的诊断价值。方法对PNS合AKI患者（n=33例，AKI组）和未合并AKI患者（n=24例，非AKI组）尿液PCX、血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C（CystatinC，CysC）、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和血浆清蛋白（ALB）水平进行检测，观察上述指标与病情关系。结果AKI组尿PCX（42.04±11.01）ng/ml显著高于非AKI组（30.88±9.93）ng/ml；血清CysC水平（1.91±0.54）mg/L显著高于非AKI组（1.29±0.34）mg/L，而血清LDL-C和血浆ALB水平在两组中比较差异无统计学意义。随着AKI病情加重，估算的肾小球滤过率（eGFR）的减少，尿PCX、血清CysC增加更为明显。结论联合检测原发性肾病综合征患者尿PCX、血清CysC有助于AKI的诊断及病情判断。关键词：尿液；podocalyxin；肾病综合征；急性肾损伤中图分类号：R692UrinarypodocalyxinasamarkerofprimarynephroticsyndromecomplicatedwithacutekidneyinjuryFu-zhenWANG1,Zhao-wenQIU1,JieZHU2,Sen-chaoWU1,Chong-yunLIN1,Chao-huiWANG3(1.DepartmentofNephrology,theFirstHospitalofLonyan,FujianMedicalUniversity,Longyan,Fujian364000,P.R.China;2.MathematicsandScienceCollege,ShanghaiNormalUniversity,Shanghai200234,P.R.China;3.DepartmentofNephrology,RuijinHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200025,P.R.China)Abstract:【Objective】Toexplorethediagnosticvalueofacutekidneyinjury(AKI)inthechangesofprimarynephroticsyndrome(PNS)patient'surinepodocalyxin(PCX).【Methods】TheconcentrationofurinePCXandserumCystatinC(CysC)andserumlowdensitylipoprotein-cholesterol(LDL-C)andalbumin(ALB)isdetectedinthegroupofPNSwithAKI(n=33cases)andthegroupofPNSwithoutAKI(n=24cases).Thenweobservetherelationbe－tweentheindexabove-mentionedandthepatient'scondition.【Results】TheurinePCXandserumCysCinthegroupofPNSwithAKIaresignificanthigherthanthegroupofPNSwithoutAKI.ThereisnosignificantdifferenceoftheserumLDLandALBinthetwogroups.Asthepatient'sconditionbecomemoreseriousandtheestimationglomerularfiltrationrate(eGFR)becomefewer,theincreasingofurinePCXandserumCysCismoreevident.【Con－clusions】TheconjoineddetectionofurinepodocalyxinandserumCysCinthePNSpatientsisbeneficialtoearlydiagnosisandjudgmentofpatient'sconditionofAKI.Keywords:urine;podocalyxin;nephroticsyndrome;acutekidneyinjury原发肾病综合征（primarynephroticsyndrome，AKI会加重患者病情，增加治疗难度和病死率。它可PNS）常合并急性肾损伤（acutekidneyinjury，AKI）。发生于PNS病程中的任何阶段。若能及时诊断，合收稿日期：2015-06-03[通信作者]林冲云，E-mail：lingchongyun@163.com文献标识码：A·36·第28期王福珍，等：尿足细胞标志蛋白podocalyxin在肾病综合征合并急性肾损伤诊断中的价值理治疗，大部分患者肾功能可好转，预后较好，但也有少数病例发展为慢性肾衰竭，需要终生替代治疗。因此，探索PNS合并AKI的早期诊断生物学标志物是临床研究的重要问题。PNS常常伴有足细胞的病变，因此，我们试图通过检测PNS患者尿液中足细胞标志蛋白之一podocalyxin的水平来分析其与PNS合并AKI之间的关系。1资料与方法1.1一般资料选择2011年1月-2013年3月福建医科大学附属龙岩市第一医院肾内科住院的PNS患者。其中，男32例，女25例；年龄20～65岁，平均（30.5±8.5）岁。本研究经医院伦理委员会批准，参加者均签署知情同意书。自PNS发病（或复发）至入院时间为3～30d，其中，33例合并急性肾损伤，24例肾功能正常作为对照组。所有病例均符合以下标准：①24h尿蛋白定量3.5g/d，血浆白蛋白30g/L，伴或不伴水肿，高脂血症；②排除继发性肾病综合征（如狼疮性肾炎、乙型肝炎病毒相关性肾炎、过敏性紫癜性肾炎、肾淀粉样变和糖尿病肾病等继发性肾脏病变）；③所有病例均进行了肾活组织病理检查。1.2AKI的诊断按2012年KDIGO指南的诊断和分期标准，即48h内血肌酐上升≥0.3mg/L或较原先水平增高50％；和（或）尿量0.5ml/（kg·h）持续6h以上（排除梗阻性肾病或脱水状态）；并分为1～3期。1期为清肌酐升高达基础值的1.5～1.9倍，或升高值≥26.5μmol/L（0.3mg/dl），和（或）尿量0.5ml/（kg·h）持续6～12h；2期为血清肌酐升高达基础值的2.0～2.9倍，和（或）尿量0.5ml/（kg·h）持续12h以上；3期为血清肌酐升高达基础值的3.0倍，或血肌酐升高至≥353.6umol/L，开始肾脏替代治疗，和（或）尿量0.3ml/（kg·h）持续24h以上，或者无尿持续12h及以上。1.3研究方法1.3.1分组方法每个研究对象入院时立即留取1次血液及尿液标本，入院时合并AKI患者以入院时肾功能所处分期列入相应分组，住院期间肾功能正常者列为对照组（非AKI组），住院期间出现急性肾损伤者列入肾损伤组（AKI组）。1.3.2标本采集所有受试者取空腹静脉血10ml，采用西门子全自动生化分析仪测定血清肌酐、血清CysC、血清总胆固醇、血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和血浆清蛋白（ALB）。留取24h尿，记录尿量后从中取出10ml尿标本，尿蛋白定量采用邻苯三酚红比色测定法。1.3.3尿podocalyxin的检测采用CUSABIO有限公司生产的酶联免疫试剂盒检测尿PCX。具体操作步骤如下：留取肾病患者清洁中段晨尿10ml，用无菌管收集尿液于2~8℃1000×g离心15min取上清用于实验。分别设标准品孔、待测样本孔。每孔分别加标准品或待测样本100μl，轻轻晃动混匀，覆上板贴，37℃温育2h。弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl，覆上新的板贴，37℃温育1h。弃去孔内液体，甩干，洗板3次。每次浸泡2min，200μl/每孔，甩干。每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μl，覆上新的板贴，37℃温育1h。弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每次浸泡2min，200μl/每孔，甩干。依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色15~30min。依序每孔加终止溶液50μl，终止反应。在反应终止后5min内用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。数据处理将标准品及样本值减去SO孔数值后绘制曲线，以标准品的浓度为纵坐标（对数坐标），OD值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。根据样本OD值，由标准曲线查出相应的浓度。1.3.4eGFR的计算采用针对中国慢性肾脏病患者改良的简化MDRD公式来评算肾小球滤过率[1]，即eGFR（ml/min/1.73m2）=175×[Scr（mg/dl）]-1.234×年龄-0.179×（女性×0.79）1.4统计学方法使用JMP9进行统计计算。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组比较采用独立因素t检验，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用Tukey检验，eGFR与尿PCX、血CysC和血肌酐之间的两两关系用Pearson相关性分析，以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肾病综合征合并与不合并急性肾损伤患者的各项临床指标比较与非AKI组相比较，AKI组患者尿PCX、血CysC、血肌酐、血尿酸和血纤维蛋白原的水平明显升高（均P0.001），eGFR值显著下降（P0.001）。AKI·37·中国现代医学杂志第25卷组患者使用利尿剂人数高于非AKI组（P0.001）。尿蛋白定量、血总胆固醇、血低密度脂蛋白胆固醇和AKI组患者收缩压高于非AKI组（P0.001），舒张血纤维蛋白原等，两组比较差异均无统计学意义压两组差异无统计学意义。其他指标如年龄、病程、（均P0.05），见表1。表1两组患者的基线情况比较（±s）x组别年龄/男/女病程/使用利尿剂/收缩压/舒张压/尿蛋白定量/血浆清蛋白/岁月%mmHgmmHg（g/24h）（g/L）AKI组（n=33）31.2±7.929/143.21±2.2248.48%137±2184±135.22±2.0718.83±3.66非AKI组（n=24）33.1±9.224/103.58±1.6420.83%125±1982±115.55±2.5719.56±4.97P值0.3350.297＜0.001＜0.0010.1130.2850.166组别血总胆固醇/血低密度脂蛋白纤维蛋白原/血尿酸/血肌酐/血CysC/eGFR/尿PCX/mmol/L胆固醇/(mmol/L）(g/L）(μmol/L）(μmol/L)(mg/L）2[ml/（min·1.73m）](ng/ml）AKI组（n=33）8.85±3.126.67±2.656.87±1.74498.36±175.73194.38±31.011.91±0.5421.33±8.8542.04±11.01非AKI组（n=24）9.21±2.647.80±2.994.59±1.57396.57±165.7874.38±9.521.29±0.3484.07±10.5130.88±9.93P值0.0970.1020.0010.0010.0010.0010.0010.0012.2