川芎嗪对烫伤的实验研究

药理学论文第1共4页川芎嗪针对烫伤的实验研究张东（陕西理工学院，生物科学与工程学院，生工091班，陕西，汉中，723000）指导老师：陈曦［摘要］目的：探讨川芎嗪对烧伤早期血管内皮细胞的保护作用。方法：用豚鼠30%TBSAⅢ度烫伤为模型，分为复苏组(n=48)、治疗组(n=48)和伤前对照(n=8)。复苏组在烧伤后立即给予平衡液复苏，治疗组在复苏同时给予川芎嗪。分别在伤前、伤后2、4、8、12、24和48小时，测定血浆内皮素(ET)、一氧化氮(NO)；在伤后4和8小时取回结肠动脉中段作透射电镜观察。结果：治疗组各时相点ET水平较复苏组低(P＜0.05，P＜0.01)，NO水平无显著性差异，两组ET/NO比值比较，有显著性差异(P＜0.05)。病理显示，治疗组血管内皮细胞损害明显轻于复苏组。结论：川芎嗪对烧伤早期血管内皮细胞有保护作用。[关键词]川芎嗪；血管内皮细胞；内皮素；一氧化氮。引言严重烧伤早期，血管内皮细胞(VEC)受激或损伤是导致血管通透性增高，引发低血容量性休克及脏器功能损害的重要病理基础。川芎嗪具有改善微循环、抗血小板凝集、防止血液粘稠度升高的作用。为此，我们采用豚鼠30%TBSAⅢ度烫伤为模型，在体液复苏同时，应用川芎嗪，通过对回结肠动脉内皮细胞的病理观察，结合血浆中内皮素(ET)、一氧化氮(NO)和ET/NO比值的变化，初步探讨川芎嗪在烧伤早期对血管内皮细胞的保护作用。1材料与方法1.1动物模型与分组英国种豚鼠104只，雌雄各半，体重300±25g(安徽医科大学实验动物中心提供)。随机分为复苏组(n=48)、治疗组(n=48)和伤前对照(n=8)。用戊巴比妥钠15mg/kg腹腔内注射麻醉，背部去毛，置于100℃水浴锅内烫伤12秒，造成背部30%TBSAⅢ度烫伤(病理切片证实)。伤后立即按Parkland公式腹腔注射平衡盐溶液，治疗组在复苏同时，腹腔注射盐酸川芎嗪10mg/kg(常州福民制药有限公司，批号960628)。致伤后单笼饲养。伤前对照只进行同样操作，但不烫伤。1.2观察指标及方法1.21血浆ET的测定：分别在伤前、伤后2、4、8、12、24和48小时各活杀8只，经下腔静脉取血2ml，置含10%EDTA30μl和抑肽酶40μl的试管中混匀，低温离心分离血浆，放免测定血浆中ET浓度(试剂由解放军总医院放免研究所提供)。1.22血浆NO水平：在采集ET标本同时，取静脉血2ml，立即放入试管中，低温离心分离血浆，重氮化反应测定NO浓度［4］(试剂由安徽医科大学临床药理研究所提供)。1.23透射电镜观察：在伤后4、8小时取回结肠动脉中段5cm，用3%戊二醛固定，常规漂洗，经锇酸后固定，常规包埋，超薄切片，铅复染后用透射电镜观察(日立7—000型透射电镜)。1.3统计学处理各项数据采用+s表示，应用SAS统计软件包进行t检验。2结果2.1血浆ET水平变化(表1)伤后复苏组、治疗组ET水平立即增高，8h达峰值，随后虽降低但仍明显高于伤前对照。治疗组各时相点ET值低于复苏组，在2、4、8、12h差异显著(P＜0.05，P＜0.01)。2.2血浆NO浓度变化(表2)两组伤后各时相点血浆NO水平较伤前增高，峰值在伤后8h，其中在8、12、24h与对照组比较，差异显著(P＜0.05)；治疗组各时相点NO水平较复苏组低，但两组相比，差异不显著。药理学论文第2共4页表1两组血浆ET水平变化比较(±s)组别nET(pg/ml)伤前伤后2h4h8h12h24h48h复苏组48125.65145.55182.7164.95146.84130.76±14.24△±15.22△±21.7△±25.1△±16.24±17.47治疗组48107.55129.2152.66145.47137.39121.93±12.99±11.88±16.42±18.51±19.88±12.58对照组868.9±16.57注：与对照组比较，P＜0.01；与治疗组同期比较，ΔP＜0.05,ΔΔP＜0.01.表2两组血浆NO水平变化比较(±s)组别nNO(μmol/ml)伤前伤后2h4h8h12h24h48h复苏组482.8783.2153.6793.4332.9352.945±1.295±1.456±1.396±0.927±0.996±0.894治疗组482.7852.9493.4133.3913.2462.783±1.063±1.041±1.38±0.9870.974±1.036对照组82.502±0.683注：与对照组比较,P＜0.052.23血浆ET/NO比值的变化（见图1）图1血浆ET/NO比值变化药理学论文第3共4页图2伤后4小时可见血管内皮细胞(VEC)肿胀，细胞间隙增宽〈↓〉，线粒体〈M〉肿胀，空泡变。TEM×7000图3伤后8小时可见内皮细胞膜完整性破坏，部分内皮细胞〈↓〉脱落。TEM×3000图4伤后4小时见内皮细胞结构完整，线粒体〈M〉肿胀，图5伤后8小时可见核膜〈CN〉出现皱拆，药理学论文第4共4页线粒体〈M〉肿胀空泡变。TEM×10000复苏组伤后4h可见血管内皮细胞肿胀，细胞间隙增宽，线粒体肿胀空泡变(图2)；伤后8h见内皮细胞膜完整性破坏，部分内皮细胞脱落(图3)。治疗组伤后4h可见内皮细胞膜结构完整，核膜清晰，线粒体肿胀，嵴突清晰(图4)；伤后8h见核膜出现皱折，胞浆空泡变，线粒体肿胀(图5)。3讨论严重烧伤早期发生广泛的微血管通透性增加，凝血抗凝血功能紊乱和血管功能失调，都与血管内皮细胞受损有着密切关系。在正常生理状态下，内皮细胞产生缩血管物质(ET)与舒血管物质(NO)，两者比值保持在一个稳定的水平上，维持着血管正常的舒缩功能和正常的脏器血流量。烧伤后早期物理因素和体液因子引起广泛的毛细血管通透性增加，大量的体液丢失，使微循环发生障碍，组织血液灌注不足，血管内皮细胞因缺氧性损害，ET和NO分泌增加，且比例失调。研究发现，ET分泌量的增加比NO更有意义。缩血管物质的过量增加，加重了组织的缺血缺氧性损伤程度，且在一定程度上往往使复苏治疗失败。川芎为我国常用的活血化瘀中药，其味辛、微苦，主要有效成份为川芎嗪。现代药理学研究表明，川芎嗪有扩张血管，抑制血小板聚集，改善微循环和减轻组织缺氧性损害作用［5］。本研究结果说明，川芎嗪可明显降低烧伤后血浆ET水平，改善烧伤后ET/NO比值，因而保证了血流动力学的稳定，增加微循环血流灌注。形态学观察显示，治疗组血管内皮细胞损伤程度较复苏组明显减轻。说明川芎嗪对烧伤早期血管内皮细胞有保护作用。参考文献［1］杨宗诚，高建川.血管内皮细胞在烧伤脏器损害发病的作用.中华整形烧伤外科杂志，1995；11(3)：225～227［2］史荫绵，张亚菲，郑志民等.川芎对球膜和软脑膜慢性微循环障碍影响的实验研究.中华医学杂志，1980；60(10)：623～624［3］李安国，贺石村.川芎嗪抗凝血酶诱导的单个核细胞血小板聚集.中国药理学通报，1990；6(5)：311～313［4］ArcherS.Measurmentofnitriceoxideinbiologicalmodels.FASEBJ,1993;7:349～360［5］毛象刚.川芎嗪的药理作用及临床应用.医师进修杂志，1989，16(8)：31～33药理学论文第5共4页药药药理理理学学学论论论文文文指导老师：陈曦年级：生工091学号：0912024013姓名：张东