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Agilent1200LC培训一、培训目的：●基本了解1200LC硬件操作。●掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows2000（或WindowsXP）画面。2、打开1200LC各模块电源。3、待各模块自检完成后，双击“Instrument1Online”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,点击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中。6、打开“Purge”阀。7、点击“Pump”图标，点击“Setuppump”选项，进入泵编辑画面。8、设Flow：3-5ml/min，点击“OK”。9、点击“Pump”图标，点击“Pumpcontrol”选项，选中“On”，点击“OK”，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。10、点击“Pump”图标，点击“PumpControl”选项，选中“Off”，点击“Ok”关泵，关闭Purgevalve。11、点击“Pump”图标，点击“Setuppump”选项，设Flow：1.0ml/min。12、点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以四元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。点击“Ok”。（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：analysis”外的三项，点击“Ok”，进入下一画面。2、方法信息：●在“MethodComments”中写入方法的信息（如：Thisisfortest!）。●点击“Ok”进入下一画面。从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中除“Data3、泵参数设定：（以四元泵为例）●在“Flow”处输入流量,如1.0ml/min，在“SolventB”处输入70,(A=100-B-C-D),也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。4、自动进样器参数设定:（以标准型G1329A为例）●选择合适的进样方式,如图所示，进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。●点击“Ok”进入下一画面。“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击“Edit”键进行进样程序编辑。●点击“Ok”进入下一画面。5、柱温箱参数设定:G1316B:在”Temperature”下面的空白方框内输入所需温度或与检测池一致,并选中它,点击”more”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致或与检测池一致。●点击“ok”进入下一画面。6、DAD检测器参数设定:G1315B:检测波长:254nm,BW=4nm,参比波长=360nm,BW=100nm;●检测波长：选择设置需要的检测波长，一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peakwidth（Responsetime）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit-狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。Store选项选择“All”。7、点击“Method”菜单，选中“SaveMethodas”,输入方法名。点击“Ok”。8、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,然后点击“Change”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“Ok”.(如同时检测二个信号,则重复8)。9、从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项，如下图所示，输入操作者名称，如zzz；在“Datafile”中选择“Manual”或区别:Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix-在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。“Prefix”。10、点击“ok”,从“Instrument”菜单选择“Systemon”，或依次点击图标开启各模块。11、等仪器Ready，基线平稳，从“RunControl”菜单中选择“Runmethod”，进样。（DAD,VWD色谱图如下所示：）12、自动收集器设置：点击收集器——SetupFractionCollector进入如下界面：先选中“UseTimetable”进入可编辑状态——点击“FractionPreview”进入下图所示界面：点击“LoadSignal”：调出用制备方法跑的数据，调整TimeTable里面的收集时间，点击“Refresh”即可看到可视化的接收情况，直至设置完所有需要接收的peak；点击“OK”，然后保存方法即可。（三）、数据分析方法编辑:1、桌面点击““Instrument1Offline””进入数据分析画面。2、从“File”菜单选择“Loadsignal”，选中您的数据文件名，如下图所示。点击“Ok“，则数据被调出。3、做谱图优化：从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项，如下图所示。从“Ranges”中选择“Full”或“Autoscale”及合适的显示时间或选择”UseRanges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ok”。4、积分:●从“Integration”菜单中选择“IntegrationEvents”选项，如下图所示。选择合适的“Slopesensitivity”，“Peakwidth”，“Areareject”，“Heightreject”。●从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。●点击左边“√”图标，将积分参数存入方法。5、打印报告:●如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。●从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，进入如下图所示画面。●点击“QuantitativeResults”框中“Calculate”右侧的黑三角，选中“Percent”（面积百分比），其它选项不变。点击“Ok”。想输出到打印机上，则点击“Report”底部的“Print”钮。(四)、关机:●关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。●退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。●关闭Agilent1200各模块电源开关。(五)、Agilent1200LC维护保养：●色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。*●手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。●流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。*●带seal-wash的1200，要配制90%水+10%异丙醇，开启seal-wash清洗泵，溶剂不能干涸。●从“Report”菜单中选择“Printreport”，则报告结果将打印到屏幕上，如维护知识问答1为什么溶剂和样品要过滤?溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。2为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制:90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力，不能干涸。3为什么Agilent1200LC的流动相管路非常细?在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent1200LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。毛细管线分类：0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红色。PEEK管线：内径-----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。毛细管线优点:柔韧性好.***Agilent公司同时备有1/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些。4流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLD，可能会造成荧光猝灭。常用的脱气方法比较：氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。抽真空脱气法：易抽走有机相。超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。在线真空脱气法：Agilent1200LC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞，以及堵塞后的处理？溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH=4-7）。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。A：请严格执行溶剂过滤。B：请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液C：如果应用许可，可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。E：避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。6Agilent1200LC泵如何维护？Agilent1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相，及时合理的维护非常重要。A：流动相使用前请必须脱气、过滤。B：使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。C：关机前，用相应的溶剂充分冲洗系统。D：及时更换PurgeValve内的过滤芯。（当打开PurgeValve时，压力高于10bar，表明过滤芯已堵）。E：使用合适的密封圈。7如何选择合适的泵头活塞密封圈？泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用，但使用正相溶剂（如正己烷），不适合使用标准活塞密封圈，特别是长时间使用时，需更换另一种不同的密封圈，我们建议使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-14202/pk）***注意：聚四氟乙烯密封圈的压力范围为：0-200bar；建议在泵的压力限制中，将最大压力设为200bar。8使用梯度比例发时要注意那些事项？当盐溶液