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安捷伦液相的基本操作目录一.色谱基础知识二.Agilent液相色谱仪基本操作三.常见色谱故障一.色谱基础知识1.色谱法的分离原理溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。2.HPLC的特点和优点①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。二.Agilent液相色谱仪基本操作流动相瓶排气阀电源开关二元泵自动进样器柱温箱检测器进入工作站主界面编辑完整方法仪器方法设置方法信息仪器/采集数据分析运行时选项表仪器方法设置仪器方法设置仪器方法设置仪器方法设置单次样品：样品命名工作站使用序列样品：命名与序列表设置工作站使用打开仪器1脱机数据文件夹序列样品数据单次样品数据色谱图样品数据色谱图编辑色谱峰数据数据分析数据分析数据分析调节积分参数数据分析报告→打印报告三.常见色谱故障常见色谱故障----基线噪音可能原因:a、检测池脏b、检测池灯能量下降c、由泵引起的脉冲d、检测器上的温度效应e、检测其中有气泡通过常见色谱故障----基线漂移可能原因:a、梯度洗脱所用溶剂有吸收b、流动相脏c、色谱柱没有用流动相平衡d、系统中污染物溢出e、实验温度不稳定常见色谱故障----拖尾峰可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷b、进样体积过大c、柱外扩散效应d、碱性基质与硅羟基作用e、重金属反应常见色谱故障----前伸峰可能原因：a、色谱柱过载b、进样体积过大c、大峰之前有未彻底分离的小峰常见色谱故障----负峰可能原因：a、样品吸收比流动相吸收小b、溶解样品的溶剂通过色谱柱平衡被破坏c、示差检测器中最常见，溶质的折光指数小于溶剂的折光指数。常见色谱故障----鬼峰常见原因是流动相脏，尤其是水相。要求使用超纯水，最多两天就换常见色谱故障----双峰可能原因：a、柱头塌陷或柱床运动b、柱前滤芯堵塞c、组分共流出d、样品量过大f、进样器的进样流路存在分叉流路常见色谱故障----峰扩展可能原因：a、柱效降低或有柱塌陷b、进样体积过大c、流动相粘度大常见色谱故障----压力过高可能原因：a、色谱柱进样口过滤芯被污染b、冲洗阀过滤芯被污染c、色谱柱被污染d、连接管路的毛细管堵塞e、进样器转子上凹槽被堵塞f、进样针或针座被阻塞常见色谱故障----压力过低可能原因：a、溶剂进样口过滤芯堵塞b、连接管路泄漏c、溶剂或流速改变d、主动阀失灵、四元比例阀失灵或单向阀失灵e、色谱柱失效（固定相流失）谢谢！