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检验科李长丕临床基因扩增实验室技术人员再培训暨实验室技术人员上岗培训班（2013年3月13日至16日）李金明毕业于中国协和医科大学研究生院临床检验诊断学专业，获医学博士学位。现为卫生部临床检验中心临床免疫室主任，研究员，中国协和医科大学研究生院博士研究生导师。PCR实验室的设计及质量管理2标本的采集、运送和保存3PCR的基本原理和方法1临床PCR检验仪器设备4PCR技术的检验项目5主要内容原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的基本原理实时荧光PCR技术实时荧光定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析。Real-timePCR仪ABI7500原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法TaqMan分子信标蝎形探针数字双杂交探针双链DNA交联荧光染料常用方法实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术TaqMan实时荧光定量PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术双链DNA（dsDNA）交联荧光染料实时荧光PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术分子信标实时荧光定量PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术双杂交探针实时荧光PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术蝎形探针实时荧光PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术的常用方法实时荧光PCR技术数字（Digital）实时荧光PCR原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实验室认可预验收3Clicktoaddtitleinhere2Clicktoaddtitleinhere2实验室质量管理体系的建立2临床PCR实验室的标本接收及分区规划设计1实时荧光PCR技术临床PCR实验室的设计及质量管理原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目应在四个测定区域之外的地方或区域内接收接收的标本应收集在原始容器中在核酸提取时带入至标本制备区标本采集血清分离编号保存或检测一、标本接收要求标本接收及分区规划设计实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目什么样的PCR检验实验室是最标准的？标本接收及分区规划设计实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目在标本接收区分离血清（浆）标本需要哪些设备呢？标本接收及分区规划设计实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目标本接收及分区规划设计二、实验室分区设计原则及工作流程一般原则因地制宜各区独立方便工作注意风向（理想的PCR实验室设计）产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊工作流向扩增区标本制备区试剂准备区实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实验室质量管理体系的建立实时荧光PCR技术硬件软件人员文件资质、培训质量手册程序文件SOP文件记录•方法学•试剂的选择及评价实验室设施及环境实验室仪器检测体系原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术实验室认可预验收提出申请登记备案接受审核原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术•全国中等卫生职业教育卫生部“十一五”规划教材•养临床微生物检验的基础知识和实际操作能力中等卫生校医学检验专业的专业课之一临床检验的质量保证关键性环节解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一临床标本的正确采集、运送、保存的重要性原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术2标本运送1标本采集3临床标本的处理和保存原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术标本采集1标本采集时间对扩增检测结果的影响2标本采集部位的准备3标本的类型和采集量5采样及运输容器4采样质量的评价6标本采集中的防污染原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术标本运送样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定EDTA抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄。实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的运送条件作出相应的规定。标本运送原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目实时荧光PCR技术临床标本的处理和保存常见标本血清全血PBMC痰液棉拭子血清脓液乳汁组织原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目加样器核酸提取仪扩增仪测序仪杂交仪恒温干浴仪冰箱生物安全柜离心机原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目仪器设备的维护与校准实时荧光PCR技术原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目基因扩增仪器设备的管理实时荧光PCR技术仪器设备质控方法频度失控标准扩增仪仪器校验实验当仪器移动时实验失败热电偶检测温度扩增功能检测每月一次每4个月一次如靶温度或温度差异超出允许范围待测孔未出现扩增，检测温度加样器校准每年2次不符合要求水浴箱温度检测每次实验不符合要求原理方法设计管理标本处理仪器设备检验项目HAVHBVHCVHIV人乳头瘤病毒巨细胞病毒SARS-CoVEB病毒流感病毒沙眼衣原体结核杆菌淋病奈瑟菌幽门螺杆菌肺炎支原体刚地弓形虫解脲支原体实时荧光PCR技术实时荧光PCR技术实时荧光PCR技术