多管发酵法测定水中大肠菌群

综合实验报告书（2014~2015学年）实验题目多管发酵法总测定水中大肠菌群学院名称生物与食品工程学院专业（班级）2012级生物工程姓名（学号）孙大林20122151032015年01月13日多管发酵法测定水中大肠菌群摘要：利用多管发酵法检测自来水和池塘水中大肠菌群的数量，以对不同水样的大肠菌群污染情况做出初步判断。根据«中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法»中有关大肠菌群的检测方法与指标对上述水样进行检测。通过记录阳性管数并查最大可能数表（MPN）查出不同水样中大肠菌群的可能含量。多管发酵法的原理是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验等三个步骤进行实验，得出水样中总大肠菌群数，实验结果以最大可能数MPN表示。关键词：多管发酵法、大肠菌群、最大可能数（MPN）Abstract:theuseofmultipletubefermentationtestoftapwaterandthenumberofcoliformgroup,pondwaterindifferentwatersamplesofcoliformbacteriapollutionmakeapreliminaryjudgment.AccordingtothePeople'sRepublicofChinanationaldrinkingwaterstandardinspection»inthefecalcoliformdetectionmethodandindexofthewatersamplesfortesting.Tubebyapositiverecordnumber(MPN)maximumpossiblelogtablesandcheckofcoliformbacteriamaycontentindifferentwatersamples.Multi-tubefermentationprincipleisbasedonfecalcoliformbacteriacanfermentlactoseproduceacidgasandpossessagramnegative,nospore,assumestherodsandsooncharacteristics,throughtheearly(step)fermentationtest,plateseparationandthecomplexfermentationtestthreestepsoftheexperiment,itisconcludedthatthetotalnumberofcoliformbacteriainwatersamples,theexperimentalresultswiththegreatestpossiblenumberofMPNsaid.Keywords:multi-tubefermentationcoliformgroupthegreatestpossiblenumber(MPN)由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。1材料与方法1.1器材l．培养基乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水；2.仪器或其他用具载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。1.2方法1．水样的采取(1)自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。2．自来水检查（1）初（步）发酵试验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样（如图ⅩⅣ-1）。混匀后，37℃培养24小时，24小时未产气的继续培养至48小时。（2）平板分离经24小时培养后，将产酸产气及48小时产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18—24小时，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。（a）深紫黑色、有金属光泽。（b）紫黑色、不带或略带金属光泽。（c）淡紫红色、中心颜色较深。（3）复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1—3个，37℃培养24小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表ⅩⅣ-2，即得大肠菌群数。3．湖水等的检查（1）将水样稀释成10-1与10-2。（2）分别吸取1ml10-2、10-1的稀释水样和1ml原水样，各入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml和100ml原水样，分别注入装有5ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。（3）以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。（4）将100、10、1、0．1（10-1）ml水样的发酵管结果查表ⅪⅤ-3，将10、1、0．1（10-1）、0．01（10-2）ml水样的发酵管结果查表ⅪⅤ-4，即得每升水样中的大肠菌群数。2结果与分析1．结果（1）自来水100ml水样的阳性管数是0个；10ml水样的阳性管数是1个。查表ⅪⅤ-2得每升水样中大肠菌群数是3个。（2）湖水阳性结果记“+”；阴性结果记“—”。水样管（ml）发酵结果100+10+1+0.1+0.01+查表ⅪⅤ-3得每升水样中大肠菌群数是大于2380个；查表ⅪⅤ-4得每升水样中大肠菌群数是23800个。2.分析（1）大肠菌群的定义是什么？答：大肠菌群：在一定条件下能够发酵乳糖、产酸产气的需氧或兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。（2）为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？答：a.来历相当：大肠杆菌与病原菌都是来自温血动物，都是可以在其粪便中检测出来的；b.抗原性一致：大肠杆菌与病原菌对不利条件的承受力都是相同的，只要一方死亡，另一方也会死亡。所以只要大肠杆菌不能存活的地方，病原菌一定不会存活。c.大肠杆菌的检测较病原菌简单可靠。D.大肠杆菌出现的频率高。（3）EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？答：成分：蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、伊红美蓝。作用：肠道的菌选择。（4）经检查，水样是否合乎饮用标准？（3）答：自来水水样合乎饮用标准；湖水水样不合乎饮用标准。3讨论(包括心得体会)本实验应用多管发酵法检测自来水和池塘水中大肠菌群的数量。以对不同水样的大肠菌群污染情况做出初步判断。根据«中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法»中有关大肠菌群的检测方法与指标对上述水样进行检测。通过记录阳性管数并查最大可能数表（MPN）查出不同水样中大肠菌群的可能含量。心得：所谓磨刀不误砍柴工，前期的搜集资料，制定方案，方法设计等相应的准备工作，可以大大降低实验过程中中的失误，避免了手忙脚乱，加快实验进程，是实验顺利开展的先决条件！在实验过程中会遇到一些挫折与失败，导致之前的努力付诸东流，但是这并不会影响我的心态以及后续的实验操作，因为我知道做实验最重要的是需要有坚韧不拔的毅力和乐观的心态。面对失败，我要做的是细致地分析它的原因，再积极的找出解决办法，这才是做实验所应该具备的素质。做实验遇到困难是难免的。而解决问题的办法往往是从与同伴的交流与讨论中得出的。与小组成员的团结协作和充分交流可以降低个人失误，从而增加实验成功的概率。