多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的原理它是基于双抗夹心法的化学发光检测方法，在固相基质上包被12种肿瘤标志物的抗体，捕捉被检者血清中对应的肿瘤标志物，结合第二抗体（标有示踪标记物），然后催化化学反应产生光信号，用专门的芯片阅读仪读取光信号，对肿瘤标志物进行定量检测。多肿瘤标志物蛋白芯片的应用范围1.临床应用肿瘤患者的辅助诊断、疗效判断、病情检测、预后评估；评价手术、放疗、化疗是否有效。反映手术是否根除，有无复发和转移等。2.筛查应用肿瘤高危人群的定期筛查，高危人群包括：45岁以上人群；各慢性炎症和慢性疾病患者、有肿瘤家族史者、肿瘤高发区居民等。3.研究应用肿瘤分子流行病学调查及肿瘤标志物生物学研究。多肿瘤标志物的临床意义肿瘤标志物是指肿瘤细胞分泌或脱落到体液或组织中的物质，或是宿主对体内寄生物反应而产生并进入到体液或组织中的物质。目前临床上常用的肿瘤标志物大多是肿瘤相关抗原。这些肿瘤标志物并非肿瘤细胞所特有，而是肿瘤细胞的表达量明显增加，与正常细胞存在量的差异。肿瘤标志物大多无器官特异性（广谱标志物），因此基本上不可以定位。同一种肿瘤可以有几种不同的肿瘤标志物，不同肿瘤可能有相同的肿瘤标志物。如CA125不仅是卵巢癌相关抗原，也是其他肿瘤（肺癌、肝癌、胰腺癌、胃肠道癌等）的相关抗原。肿瘤标志物在一些良性疾病和炎症时也会有不同程度升高。一般表现为中等程度升高。此时，仅仅根据肿瘤标志物一次检测是很难定性的，而应连续监测，通过动态观察可以判断肿瘤的消退、疗效及预后复发。将最常见的12种肿瘤标志物集成在一张芯片上，使原来需要进行12次实验的操作一次完成。一次检测提供12种肿瘤标志物的信息，使医生可以更好的从相对全方位的信息角度做出准确判断。肿瘤标志物参考值临床意义癌胚抗原（Carcinoembryonicantigen，CEA）5μg/L点击甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）20μg/L点击癌抗原125（Cancerantigen125，CA125）35kU/L点击癌抗原15-3（Cancerantigen15-3，CA15-3）35kU/L点击糖链抗原19-9（Carbohydrateantigen19-9，CA19-9）35kU/L点击糖链抗原242（Carbohydrateantigen242，CA242）20kU/L点击前列腺特异性抗原（Prostatespecificantigen，PSA）和游离型前列腺特异性抗原（Free-PSA）PSA5μg/Lf-PSA1μg/L点击神经元特异性烯醇化酶（neuron-specificenolase，NSE）13μg/L点击人绒毛膜促性腺激素（humanchorionicgonagotropin，hCG、β-HCG）β-HCG3μg/L点击生长激素（HGH）7.5μg/L点击铁蛋白（Ferritin，Fe）男性:322μg/L;女性:219μg/L点击注：以上资料仅供医生参考，临床医生须根据病例具体分析。如何合理应用肿瘤标志物由于各种免疫标记技术的快速发展，所检肿瘤指标越来越多，对肿瘤的早期诊断、观察评价治疗效果及判断预后具有极大意义，但至今仍没有一种标记物是对肿瘤完全特异的。其原因是一些良性病变也能出现程度不同的阳性反应，即便是肿瘤本身也常可由于在发生发展过程中的各种因素而呈一过性或阶段性阴性反应。故此，近年来国内外学者一致认为动态观察和多种标志物联合检测，并紧密结合临床表现，特别是影像特点综合判断，是提高肿瘤诊断阳性率最富有成效的方法与措施。一、影响肿瘤标志物测定的因素到目前为止还未发现有理想的具有100%灵敏度和100%特异性的肿瘤标志物，因为肿瘤标志物不仅在发生癌变时产生，在正常的和良性疾病情况下也有不同程度表达，肿瘤标志物的产生还受到一些生物活性因子的影响。因此，在肿瘤标志物检测中要注意假阳性和假阴性的问题。1、引起假阳性的因素：（1）良性疾病：炎症性疾病一些肿瘤标志物表达增加。肝脏良性疾病时AFP、CA19-9、CEA及肾功能衰竭时CA15-3、CA19-9、CEA和PSA水平均会升高。（2）生理变化：妊娠时AFP、CA125、HGH和月经时CA125也会升高。（3）肿瘤手术/放疗/化疗过程中：由于肿瘤组织受到破坏或肿瘤坏死时某些肿瘤标志物产生增加，从而影响肿瘤标志物的测定，造成假阳性。（4）样本中的免疫球蛋白可通过与测定中所使用的特异性抗体发生反应而影响测定结果。如自身免疫疾病患者常有可与抗体反应的类风湿因子（RF）及针对动物免疫球蛋白的嗜异性抗体均会引起假阳性反应，表现为所有指标或除PSA、f-PSA外其他指标全部阳性。2、引起假阴性的因素：（1）产生肿瘤标志物的肿瘤细胞数目少。（2）细胞或细胞表面被封闭。（3）机体体液中一些抗体与肿瘤标志物（肿瘤抗原）形成免疫复合物。（4）肿瘤组织本身血循环差，所产生的肿瘤标志物不能分泌到外周血中。3、血标本的采集、储存不当也会影响肿瘤标志物的测定结果（1）血清：将全血在室温下（25℃左右）静置1小时左右或37℃水浴15分钟，然后2000r/m离心5分钟，分离血清。血清量不少于300μl（实际检测量需100μl）。（2）溶血需要重新抽血；黄疸血不宜检测；脂血要求血清在20000r/min离心3分钟以上，除去上层油脂后才可检测。（3）血清分离于1.5或2.0ml的离心管中（干净、干燥），当天不能检测者，需放置在4℃冰箱保存；若一周内不能检测则放置在-20℃储藏，冻藏血清融化后，混合均匀即可检测，但不可以反复冻融。避免微生物污染。二、肿瘤标志物测定意义及周期1、动态记录肿瘤标志物的浓度变化，随着时间的推移浓度值逐渐升高，临床参考价值更大。可用于健康和亚健康人群体检时的肿瘤筛查，以及良性疾病患者肿瘤标志物升高的动态观察，可每年检测1-2次。2、肿瘤患者定期测定肿瘤标志物：（1）治疗前应测定每个患者肿瘤标志物的原始值。（2）治疗后第1-2年：1次/每月，第3-5年：1-2次/每年，第6年：1次/年。每次改变治疗方法前、肿瘤标志物浓度升高或怀疑复发和转移时，均应及时测定肿瘤标志物的浓度。三、蛋白芯片检测出现阳性时应考虑：1、若是门诊患者：此结果可以作为医生临床诊断的参考依据，建议结合其他检查进行综合判断。2、若为普查体检人群：建议2-6个月后再检测一次，如两次检测某些指标均高于参考值，且高得很多，则应去医院做临床检查，以便及时确诊和治疗。临床检查后未能发现有疾病存在则可考虑定期随访。通常，肿瘤标志物升高意味着各种炎症疾病、慢性疾病及肿瘤，后者常常超出临界参考值数倍，尽管良性疾病亦偶见此情况。3、若为肿瘤治疗后患者：应高度怀疑有否复发、转移等，应进行相应的检查和治疗。四、蛋白芯片检测出现阳性时应根据被检者情况综合判断由于一种肿瘤可以出现多种指标阳性，一种肿瘤指标与多种肿瘤相关，所以在体检或门诊患者中出现某些指标阳性，应根据被检者情况综合判断。1、参考值的确定是采用该试剂盒对大量正常人群的检测结果统计，以95%的正常人群小于该值来界定，由于存在人群差异，推荐只能作为参考。所以并不是所有正常人绝对应该在临界值之下。2、血清（溶血、脂血等）的因素，被检者身体状况的波动（如炎症）等等干扰因素，有时会使生化检测指标出现上扬，甚至达临界值的2倍。对于此类无症状体检者，建议采取短期随访，2个月后复检，如维持原值或有下降，认为阴性，如果持续上升应高度警惕。3、目前临床研究表明不存在性别特异性指标。CA125、CA15-3、β－HCG等指标在男性患者中也可有不同程度的提高。PSA原来一直认为是前列腺癌完全特异性指标，但是研究表明在一些非前列腺癌症患者中，尤其是肝癌、胰腺癌，也有较高比例的阳性，且阳性值很高，有的高达200－300ng/ml。我们曾在遇到女性PSA阳性时，用其它公司进行单指标复检，得到的结果与我们是一致的。4、Ferritin是一个非特异性指标。在正常人群中范围大，所以在Ferritin单独出现阳性时无特殊预警意义，只有结合其他指标才能做出判断。5、如果是有症状就诊的患者，检测指标出现阳性，而且往往会出现强阳性，则增加了恶性肿瘤的可能性。6、对于随访中的肿瘤治疗后病人，出现原肿瘤指标的反弹或出现新的阳性指标，则应严密监控，积极寻找原发灶或转移灶。第五章临床报告回到[医生手册]首页通过对上海华山医院、上海曙光医院、上海新华医院、上海长征医院、上海市第一人民医院、上海长海医院、浙江医科大附属二院等医院约6000份血清的临床验证显示，灵敏度：真阳性/（真阳性+假阳性）80%，特异性：真阴性/（真阴性+假阴性）90%，批间差：15%；批内差10%。个案分析个案一：（乳腺癌早期发现病例）某女性，52岁，育有一子，母乳喂养。因其母有乳腺癌史，自己有双侧乳腺小叶增生，去医院体检，自觉无任何不适症状，当时查双侧乳房未发现明显肿块，医院建议患者进行多肿瘤标志物蛋白芯片检测，结果显示CA199与CA153分别升高到52.78ng/ml和61.84ng/ml。蛋白芯片检测结果如图：CA15-3---CA19-9---报告显示如下：*男性322ng/ml，女性219ng/ml患者在医院进一步B超检查，B超显示：右侧乳腺可见边界不清楚的小肿块，周围血管纹理紊乱，可见钙化点。CT检测，第一次CT检查断层扫描距离为0.5cm，未见明显肿块阴影，后扫描距离改为0.1cm，隐约可见肿块。患者于7月31日做了探查性手术，术中冰冻切片提示：右侧乳房乳腺小叶增生，部分导管上皮高度增生活跃，局限性癌变，故进行了左侧乳房乳腺改良根治术。术后患者恢复良好。病理诊断结果：乳腺导管内癌。个案二：某女，年龄81。发现右臂肿瘤。经检查发现原发灶为肺癌，临床分期：T4N3M1。细胞学诊断：间叶组织来源恶性肿瘤。在当地医院选了3个指标做放免检测结果为阴性，具体如表1。用多肿瘤标志物蛋白芯片检测后6项指标阳性，具体如表2。表1放免结果(阴性)：指标浓度参考ＣＡ７２４33.8U/mlＣＡ２４２16.7820U/mlＣＥＡ4.575ng/ml表2芯片结果(六个指标阳性)：指标浓度参考ＣＡ１９９65.1835U/mlＣＡ２４２23.2120U/mlβ－ＨＣＧ21.633ng/ml*项目数据参考值浓度单位项目数据参考值浓度单位CA19-952.7835.00U/mlAFP1.0020.00ng/mlNSE1.0013.00ng/mlFree-PSA0.101.00ng/mlCEA0.505.00ng/mlPSA0.065.00ng/mlCA2429.1320.00U/mlCA12512.7135.00U/mlFerritin205.48*ng/mlHGH1.647.50ng/mlBeta-HCG0.503.00ng/mlCA15-361.8435.00U/mlＡＦＰ25.0620ng/mlＣＡ１２５165.8635U/mlＣＡ１５３91.4235U/ml个案三：病人，毛先荣，男45岁，10月份感冒后开始出现咳嗽、咳少量黄脓痰，未予重视，一月后症状无减轻，于当地医院就诊，胸片显示右肺下叶软组织阴影，用青霉素抗炎治疗二周，咳嗽少有好转，复查胸片，病灶无明显变化，于南昌医院做纤维支气管镜检查，未作明确诊断。11月转至上海市徐汇区中心医院就诊，12月初出现午后低热，无胸痛，痰血、盗汗等症状。CT:右肺下叶背段4-5cm类圆形软组织。医院用CT、B超等方法未能做出明确诊断。蛋白芯片检测结果如图：---CA125:146.84u/ml---Beta-HCG:60ng/ml患者于12月进行手术切除。术后：病理报告右下肺腺鳞癌（低分化），近肿瘤支气管旁淋巴结均见转移。免疫组化肿瘤细胞HCG++,CA125+多肿瘤标志物蛋白芯片检测采血要求1.空腹，不饮水。2.采静脉血２ｍｌ，无需加抗凝剂。3.离心2000rpm×5min，吸出血清转移至另一干净的EP管内，待测。4.溶血、黄疸血的样品会影响结果，不宜检