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大网格吸附树脂的吸附等温线的制作一、实验目的和要求1.通过实验，加深对大网格树脂吸附机理的理解；2.了解吸附等温线的制作过程和操作方法。二、实验原理大网格树脂吸附法是利用树脂表面分子（包括树脂外表面和空隙的内表面）与生化物质分子间的范德华力作用，将液体中的生化物质吸附到树脂表面，与大量杂质分离，然后再用适当的溶剂将其洗脱下来。大网格聚合物吸附树脂是一种应用广泛的吸附剂，它与大网格离子交换树脂的主要区别在于其内部结构没有可与被交换的离子基团，因此，是利用分子间作用力进行吸附。吸附等温线是表征不同物质吸附的特征曲线，表明在一定温度下，树脂吸附平衡时的吸附量与溶质浓度之间的函数关系，常用Langmui方程和Freundlich方程来描述，前者是建立在单分子吸附层的基础上的，后者是经验式。本实验采用Freundlich方程式，它对本实验树脂的吸附行为具有更好的吻合性。Freundlich方程式如下：1nm=K（2—10—1）等式两边取对数，得到下式：1lgm=lglgnK（2—10—2）式中：m——吸附平衡时固相吸附量（mg/g树脂）——吸附平衡时液相质量浓度（mg/ml）K和n——常数由式（2—10—2）可见，lgm与lg为线性关系，可由实验求出。本实验以木瓜蛋白酶为实验对象，采用HZ802非极性大网格树脂为吸附剂，在25℃温度下，制作吸附等温线。三、实验器材与试剂（一）器材水浴恒温振荡器，分光光度计，精密电子天平，25ml具塞试管，15ml试管、比色皿，真空泵，移液枪，烧杯，漏斗，滤纸等。（二）试剂大网格吸附树脂，木瓜蛋白酶，95%乙醇，蒸馏水。四、操作方法（一）吸附等温线的制作1.吸附树脂的预处理新树脂孔内还有合成树脂时残留的致孔剂等杂质，故应预处理除去。用95%乙醇于烧杯中浸泡树脂，倾去上浮的杂质，反复多次，直到倾出的液体与蒸馏水混合不产生白色浑浊（澄清）为止。再用蒸馏水洗至倾出液无乙醇味即可，最后用真空抽滤，成为抽干树脂。2.配木瓜蛋白酶称取木瓜蛋白酶1g，溶于50ml蒸馏水，配成约20mg/ml的溶液。3.精确吸取上述溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于7只具塞试管中，加入蒸馏水，均稀释至10ml，配成1、2、4、6、8、10、12mg/ml的溶液。4.称取7份抽干吸附树脂各0.5g，小心倒入上述7只具塞试管中，盖上瓶盖，置于25℃恒温摇床6h左右。5.达到吸附平衡后取出，滤纸过滤液体到试管中，除去溶液中的树脂，测定木瓜蛋白酶液相平衡的A值，带入标准曲线求出对应的浓度。6.用以下求平衡时树脂上的吸附量m（mg/g树脂）：0e0-xm=m（）V式中：0和e——分别为溶液初始质量浓度和平衡质量浓度（mg/ml)V——溶液体积（ml）m0——树脂质量（g）以液相的平衡质量浓度（mg/ml）为横坐标，树脂的平衡吸附量（mg/g树脂）为纵坐标，作25℃时的吸附等温线曲线图。（二）制作木瓜蛋白酶浓度标准曲线1.精确称取木瓜蛋白酶20mg与烧杯中，加入10ml蒸馏水，配制成2.0mg/ml的标准溶液2.吸取上述标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml于试管中，分别用蒸馏水稀释至5ml，然后用石英比色皿，在280nm分光光度计下测吸光值A。作线性回归，求线性方程和相关系数R。【注意事项】1.用分光光度计测量木瓜蛋白酶时，应用石英比色皿（280nm下玻璃比色皿有吸光值）。2.木瓜蛋白酶用完后记得放回4℃冰箱。3.实验数据可用Excel软件分析。【实验准备】仪器数量试剂带塞25ml试管8支木瓜蛋白酶普通10ml试管8支蒸馏水漏斗1个95%乙醇滤纸若干1ml移液枪（及枪头）1支20μl移液枪（及枪头）1支小烧杯（100ml或50ml）1个石英比色皿2个HZ802大网格吸附树脂10g布氏漏斗真空抽滤机分光光度计恒温摇床五、实验结果及分析1、实验结果木瓜蛋白酶标准曲线的制作浓度（mg/ml）A值0.080.0370.160.0680.240.0100.320.1350.400.1700.480.201木瓜蛋白酶标准曲线y=0.4179x+0.0013R2=0.999600.050.10.150.20.2500.10.20.30.40.50.6浓度（mg/ml）280nm吸光值实验结果A值液相平衡浓度（mg/ml)初始浓度（mg/ml)树脂吸附量0.2130.50658052219.8683895670.5781.379995214212.400095721.1942.854032065422.91935871.8014.306532663633.869346731.9654.698971046866.020579092.6156.2543670731074.912658532.8686.85977506612102.804498725℃吸附等温曲线y=7.9272e0.3763xR2=0.966020406080100120012345678液相平衡质量浓度（mg/ml）树脂的平衡吸附量（mg/g树脂）lgρlgm-0.2953515130.9942462850.139877581.0934250380.4554588481.3602024620.6341277451.529806820.6720027691.8196793290.7961833671.874555210.8363098752.01201212lgm与lgρ线性关系图y=0.1813x+0.8013R2=0.977200.511.522.5012345678lgρlgm根据Freundlich方程：1lgm=lglgnK求得：n=5.5157K=6.3285