大肠菌群检验作业指导书

广西XX天然品有限公司大肠菌群检验作业指导书文件编号：制定部门：质检部版本/修订：生效日期：2014.01.01页码：第1页，共2页编写人/日期：审核人/日期：批准人/日期：修改标志：修改次数：修改人/日期：1目的规定大肠菌群的检验方法，以按标准化进行操作。2适用范围适用于大肠菌群检验。3术语大肠菌群：在37℃、24h能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌,它主要来源于人畜粪便,通常可作为水体粪便污染的指标菌。4职责质检员负责按作业指导书进行检验。5流程图无6作业内容6.1设备和材料净化工作台、培养箱（36±1℃）、新飞展示柜（0-10℃）、刻度吸管（10mL）、试管（18×200mm）、酒精灯、镊子、放大镜、培养皿、三角瓶（500mL）、显微镜等、40孔口的试管架、洗耳球等实验器材6.2培养基和试剂75%酒精、生理盐水（0.9%）、乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液等培养基及试剂。6.3操作步骤6.3.1样品处理一般情况下，产品没有受到污染，按照以下方法检验：取待检样品10mL接种于含10mL双料乳糖胆盐发酵管内,接种5管，置于36±1℃生化培养箱内培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，可报告为大肠菌群阴性，如有产酸产气者，按下列程序进行。6.3.2分离培养从产酸产气的发酵管中用接种环挑取样液，划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃生化培养箱内，培养18-24h。取出观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。6.3.3证实试验广西XX天然品有限公司大肠菌群检验作业指导书文件编号：制定部门：质检部版本/修订：生效日期：2014.01.01页码：第2页，共2页编写人/日期：审核人/日期：批准人/日期：修改标志：修改次数：修改人/日期：用接种环挑取疑似大肠菌群菌落（菌落呈黑紫色，表面有金属光泽），接种于乳糖发酵管内，置36±1℃生化培养箱内培养24±2h。同时对上述可疑菌落进行革兰氏染色、镜检。凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。6.3.4MPN值计算及报告结果根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL样品中大肠菌群的最可能数。表：用5管10ml水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限阳性反应管数MPN/100ml95%可信限下限上限0006.012.20.112.625.10.519.239.21.629.44163.352.95＞168.0无限例如：经过确定性检验后，大肠菌群有3管阳性，从上表查得MPN为9.2/100ml若确定检验样品已经受到严重污染，按照GB8537-20084.52.1.5.2矿泉水水源检测方法进行。无8相关记录无