清远震兴农产品有限公司大肠菌群检验培训检验依据•食品微生物学检验大肠菌群计数(GB4789.3-2010)第一法大肠菌群MPN计数法术语和定义•大肠菌群:在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性艳阳革兰氏阴性芽孢杆菌。•最大可能数MPN:基于泊松分布的一种间接计数方法。设备和材料•恒温培养箱:36±1℃•恒温水浴箱:46±1℃•天平:感量为0.1g•无菌吸管:1ml(具有0.01ml刻度)或微量移液器培养基和试剂•月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST•煌绿乳糖胆盐BGLB•无菌生理盐水检验程序检样25g(ml)样品+225ml生理盐水,均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液,接种LST肉汤管不产气36±1℃24±2h产气BGLB肉汤36±1℃48±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告具体操作步骤标示取样初发酵试验接种1ml原液到LST肉汤,共3管接种1ml原液到9ml生理盐水,相当于稀释成10-1样品液初发酵接种10-1稀释样品液到LST肉汤,每管接种1ml,共3管。然后再稀释接种。以此类推,每个稀释度接种3管,接种3个连续稀释度,共9管。培养条件24±2h观察结果稀释度10010-110-2阳性管数200阳性:指产酸产气复发酵试验注意:接种环要彻底灼烧灭菌复发酵试验注意:接种完毕要灼烧灭菌接种培养条件培养条件:36±1℃,48±2h观察结果凡是不符合产酸产气两者条件的,报告大肠菌群阴性产酸产气,报告大肠菌群阳性大肠菌群最可能数(MPN)的报告根据复发酵观察结果,查国标《食品微生物学检验大肠菌群计数》(GB4789.3-2010)附录B大肠菌群最可能数(MPN)检索表例如:观察结果如下例如:稀释度10-110-210-3检样量g/ml0.10.010.001阳性管数200根据检索表查出9.2cfu/g(ml),相当于每100g(ml)样品中最大可能数是920个大肠菌。稀释度10010-110-2检样量g/ml10.10.01阳性管数200当检样量是检索表的10倍时,检索表的结果要降低10倍,即查出结果9.2cfu/g(ml),再降低10倍,准确报告应是0.92cfu/g(ml),其余以此类推。回顾检验程序24±2h无菌取样培养条件:36±1℃,24±2h初发酵:选择三个适宜的连续稀释度的样品液,每个稀释度接种3管,每管接种1ml,共9管培养条件:36±1℃,48±2h复发酵:产酸产气的LST肉汤管中分别取培养物1环,接种于BGLB管中练习根据观察结果检索稀释度10-210-310-4阳性管数212怎么报告结果练习题答案稀释度10-110-210-3阳性管数212MPN27cfu/g答案:27*10=270cfu/g稀释度10-210-310-4阳性管数212培训到此结束谢谢!