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文献翻译题目大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用学生姓名韩向前专业班级食品质量与安全11-01班学号541003040110院（系）食品与生物工程学院指导教师(职称)张华（副教授）完成时间2015年6月5日大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用1大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用摘要:大葱绿叶提取物（WOE）对小鼠体抗炎效果研究，WOE在0.15-1g/kg范围内对卡拉胶处理后的小鼠足跖的肿胀呈浓度依赖性。WOE的抗炎效应和它能降低组织中NO和肿瘤凋亡因子水平密切相关。更多研究显示WOE保护作用的证据是它能增强脂质在体内的抗氧化能力和提高包括过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶在体内的抗氧化酶活性。另外在晚期疼痛阶段，WOE也可以减少乙酸诱导的小鼠扭体反应次数和减弱福尔马林诱导小鼠的疼痛。总的来说，结果显示WOE可以作为抗炎化合物的天然来源。关键词：大葱/抗氧化/抗炎症/卡拉胶1简介炎症是公认的应对组织损伤的生物学过程。在受损伤部位，血管壁通透性增加，随后免疫细胞迁移导致炎症过程中的水肿。与此同时，产生的活性氮和促炎症因子等机制被激活，这加大了炎症的损伤。许多含有丰富抗氧化物质的天然产品显示抗炎症的保护效应。卡拉胶诱导的炎症模型通常被用于评估天然产物在抗急性炎症病理改变上的效用。卡拉胶有非常复杂的分子结构，是一系列的多糖。卡拉胶能诱发以吞噬细胞迁移和自由基爆发和炎症因子释放开始的急性炎症(Salvem-inietal.,1996)。例如，先前的研究表明卡拉胶处理后氧化应激反应和肿瘤坏死因子是炎症新陈代谢中主要的调节方(Rocha,Fernandes,Quintao,Campos,&Ca-lixto,2006)。此外，组织中细胞内应对炎症应激反应的机制主要包括：过氧化物酶有超氧化物歧化酶（SOD），过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）。最近的研究表明受损细胞抗氧化系统引起微生物繁殖进而发展成一系列炎症和癌症疾(Val-ko,Rhodes,Moncol,Izakovic,&Mazur,2006)。另外，加重炎症在组织中的效应的原因部分疑似为诱导氧化应激中的耗尽内源性抗氧化酶的活性的特(Valkoetal.,2007)。这项研究引发了着眼于研究天然产物在抑制氧化应激产物和增加组织中的酶促抗氧化剂的作用研究。大葱（葱属，葱科），重要的蔬菜用于亚洲菜肴调味，他一般被称为青葱，已报道能清除活性氧(Wangetal.,2006)，抑制低密度脂蛋白氧化(Wang,Chen,Liang,&Duh,2005)，调节高密度脂蛋白受体(Duh,Hsiao,&Wang,2008)和降低血大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用2压(C-hen,Tsai,&Chen,1999)。虽然大葱显示各种生物活性，但是很少有研究专注于它们在卡拉胶作用与身体上诱导的炎症的保护效应。因此，本次研究的目标是确定（大葱水提取物）WOE对于卡拉胶诱导的炎症和氧化损伤的保护效应。另外也评定WOE了的止痛效果。2材料和方法2.1材料硫代巴比妥酸(TBA),λ-carrageenan(卡拉胶)、N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐、磺胺、黄嘌呤,黄嘌呤氧化酶、谷胱甘肽和消炎痛(INDO)从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。2.2样品制备取大葱绿叶(500克)，用食物处理器(日本、东京、型号MJ-C85；过滤器孔隙大小；0.2毫米)挤压和过滤，重复十次,获得大葱绿叶汁液(200克)，然后10000g离心30分钟,获得上清液(170克)。然后，上清液过滤，-80°C冷冻干燥24h。2.3动物雄性印记控制区（ICR）小鼠（18-25克），从biolasco台湾有限公司获得。实验前，这些小鼠要在恒温22±1℃,相对湿度55±5%,12h暗光交替周期的有机玻璃笼子里喂养至少2周，期间获得适量的食物和水。根据美国国立卫生研究院实验动物照护及使用指导所有试验程序可以进行。这项研究获得了中国医科大学实验动物照护及使用委员会（IACUC）的批准。2.4卡拉胶(CARR)引起水肿的测定卡拉胶诱导后爪水肿模型用于抗炎活性的测定(Sheuetal.,2009)。一个为期两周适应期的二十五只（18–25g）小鼠随机分为五组（N=每组5只）。（1）注射卡拉胶组：在小鼠的跖侧的右后爪注射1%卡拉胶（50ul）；(2)吲哚美辛（INDO）阳性对照组:吲哚美辛(10mg/kg)注入小鼠腹腔内,90min后卡拉胶注射。（3–5）WOE治疗组：每组分别口服WOE的剂量为0.25、0.5和1克/公斤，2h后卡拉胶注射。卡拉胶注射之后的1、2、3、4、5h内用使用体积描记仪（模型7159，UgoBasile，瓦雷泽，意大利）测量小鼠的足爪体积。小鼠足爪的肿胀程度通过a减b表示，其中a代表注射卡拉胶后小鼠足爪的体积，b代表注射卡拉胶前小大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用3鼠足爪的体积。5h后，杀死小鼠，解刨卡拉胶诱导引起水肿的足爪组织。用冰冷的生理盐水冲洗组织，在立即放入是组织一倍体积的冷的生理盐水中，并4℃均质。然后匀浆12000g离心5分钟，足爪组织的上清液存储在-20℃用来测定丙二醛（MDA）和抗氧化酶活性。此外，血液回收用来NO和TNF-α的测定。2.5组织脂质过氧化的测定组织脂质过氧化是通过硫代巴比妥酸活性物质（TRARS）的方法来评价的(T-amura&Shibamoto,1991)。简言之，脂质氧化产品是与硫代巴比妥酸在酸性高温条件下反应生成一种红色复合物TRARS，在532nm处确定TBARS的吸光度。2.6血清中一氧化氮含量的测定用蒸馏水将血清样品稀释四倍，再加入硫酸锌(300毫克/毫升)脱蛋白且使最后硫酸锌浓度为15毫克/毫升，然后室温下10000g离心5min，取100ul上清液加入微孔板里，再加入100ul格里斯试剂（0.1%N-（1-萘基）乙二胺盐酸盐，1%磺胺5%磷酸）。反应10min后测量吸光度，通过亚硝酸钠吸光度校准曲线计算得出相应数据。2.7血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的测定使用商业酶联免疫试剂盒(Biosource国际公司,CA)根据其使用说明书测定血清中肿瘤坏死因子-α，从标准曲线中计算肿瘤坏死因子-α。2.8爪组织中抗氧化酶活性的测定细胞色素C还原法(Flohe&Otting,1984)测定总超氧化物歧化酶（SOD）活性。黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中产生的O2使一定量的氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C，后者在550nm有最大光吸收。细胞色素C减少的抑制速率达到50%时所需的酶量定义为一个单位的超氧化物歧化酶。总过氧化氢酶（CAT）活性的测定如前面所述(Armstrong&Browne,1994)。总之，通过测定在240nm处的吸光度来测量10mMH2O2在20mM磷酸盐缓冲液（pH=7）中的减少。用摩尔吸光系数计算活度。总谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）测定如前面所述(Flohe&Gunzler,1984)。将酶溶液加入到由过氧化氢和还原型谷胱甘肽混合的0.1mM的Tris（pH=7.2）缓冲液中，并在340nm处测定吸光度。从校准曲线中计算活性，酶活大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用4性定义为：每分钟催化1毫克蛋白质所需NADPH的纳摩尔量。由布拉德福德染料结合法测定组织的蛋白质浓度(Bradford,1976)。2.9醋酸扭体反应老鼠(18-25g)如上所述随机分配。（1）注射醋酸组：小鼠腹腔内注射1%的醋酸(10毫升/公斤)。（2）吲哚美辛（INDO）阳性对照组:吲哚美辛(10毫克/公斤)注入小鼠腹腔内，25min后醋酸注射。（3–5）WOE治疗组：每组分别口服WOE的剂量为0.25、0.5、1克/公斤，55min后醋酸注射。醋酸注射腹腔五分钟后，在接下来的10分钟记录醋酸致小鼠扭体次数(Sheuetal.,2009)。2.10福尔马林试验用福尔马林试验测定样品的镇痛活性(Sheuetal.,2009)。老鼠(18–25g)如上所述随机分配。（1）福尔马林注射组：20ul5%福尔马林注入小鼠右足爪的背表面。（2）吲哚美辛（INDO）阳性对照组:吲哚美辛(10mg/kg)注入小鼠腹腔内，30min后福尔马林注射。（3–5）WOE治疗组：每组分别口服WOE的剂量为0.25、0.5、1克/公斤，60min后福尔马林注射。接下来的30min观察记录小鼠舔注射后爪。在注射福尔马林第一个5分钟被称为早期阶段，第15到40分钟为后期阶段。总时间舔或咬着受伤的爪子（疼痛行为）是用秒表测量。每5分钟记录一次活性。2.11统计分析数据由±SE表示。统计评估是由单向方差分析(方差分析其后的多重比较体验）。统计意义的表达为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001。3结果研究新的抗炎产品，抑制卡拉胶诱导水肿的体内试验是一个很好的方法。图1显示了WOE对卡拉胶诱导小鼠足爪水肿的影响。消炎痛是一种用于减少肿胀等急性炎症反应抗炎药。根据图1，在与卡拉胶注射组比较之后，小鼠注射消炎痛的1–5h后足爪水肿体积减少了9–46%。此外，注射卡拉胶后的5h内，WOE在0.25–1克/公斤范围内对抑制卡拉胶诱导水肿呈浓度依赖性关系。当WOE剂量在1克/公斤时，小鼠足爪水肿体积减少了29.6%，这些数据表明，WOE能够抑制一定的急性炎症反应。大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用5图1：WOE和消炎痛对卡拉胶诱导小鼠足爪水肿的影响脂质氧化不仅是细胞损伤的一个标志同时也已经被确认是体内炎症反应的过程。据图2所示，与对照组相比，卡拉胶能够致脂质的氧化水平增加3–4倍，卡拉胶诱导的脂质氧化水平组显著增加。然而，脂质氧化水平在WOE的存在下明显降低，和消炎痛作用相似。WOE治疗(0.25–1克/公斤)脂质氧化减少了20–49%与卡拉胶注射组相比。健康的条件下，抗氧化酶能够降低有害的氧化应激的积累。表1显示了在小鼠足爪肿胀中CAT、SOD和GPX的活性。如表1所示，卡拉胶使小鼠足爪肿胀中CAT,SOD和GPX的活性分别降低了43%、74%和50%与对照组相比。在0.25–1克/公斤的范围内，WOE增加CAT活性到122–145%、SOD168–319%、GPX121–176%与卡拉胶注射组相比。同时消炎痛增加CAT活性（153%）、SOD（334%）、GPX（179%）与卡拉胶注射组相比。这些数据表明，在炎症期间，抗氧化酶活性的升高可能是WOE的保护作用。大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用6图2：WOE和消炎痛对小鼠水肿的足爪中脂质氧化的影响影响表1：WOE和INDO对小鼠水肿的足爪中CAT、SOD、GPX活性的影响此外，许多研究已经表明炎症过程中NO会增加、INOS的表达增强、TNF-α增多。血清中亚硝酸盐的含量是细胞内NO和INOS产物常规指标。图3所示，与对照组相比，卡拉胶使血清中的亚硝酸盐含量增加了8.8倍。同时，消炎痛使血清中亚硝酸盐含量下降到42%与卡拉胶注射组相比。WOE在0.25-1克/公斤的范围内使血清中亚硝酸盐含量降低了17–53%与卡拉胶注射组相比。另一方面(图4)，卡拉胶使血清中TNF-a的量增加了10倍与对照组相比。消炎痛使血清中TNF-α的量减少到41%卡拉胶注射组相比，WOE在0.25–1克/公斤的范围内使血清中TNF-α量降低了24–51%与卡拉胶注射组相比。这些数据表明，WOE能作为一种炎症抑制剂在炎症反应中降低NO和TNF-α的量。大葱绿叶提取物对小鼠的抗炎作用7图3：WOE和INDO对卡拉胶诱导的小鼠其血清中亚硝酸盐含量的影响图4：WOE和INDO对卡拉胶诱导的小鼠其血清中TNF-α含量的影响腹部伸展的累积量与醋酸引起的疼痛程度相关（图5A）。与醋酸注射组对比，WOE显著减少着小鼠扭体次数，当小鼠WOE口服剂量为0.25、0.5、1g/kg时，小鼠的扭体次数分别减少了13%、36%、50%。WOE(1g/kg)对抑制醋酸诱导小鼠扭体的效果与消炎痛（10毫克/公斤）效果一样（P＜0.001）。如图5B所示，WOE在后期阶段对抑制福尔马林引起的疼痛有显著效果，然而，前期阶段却