山楂降血脂作用有效部位的研究

山楂降血脂作用有效部位的研究唐世英1,胡桂才2,李来1,杨凤国1(1.承德医学院,河北承德067000;2.承德医学院附属医院,河北承德067000)[摘要]目的:探讨山楂降脂作用及其有效部位。方法:把山楂分离成总黄酮、残渣、浸膏3个组分,每种组分取4个剂量水平。16只金黄地鼠按直接设计方案进行实验。每周测定血浆总胆固醇、甘油三酯。结果:山楂总黄酮、残渣及其交互作用与TC、TG呈显著性负相关。结论:总黄酮是山楂降脂作用的主要成分,残渣可加强总黄酮降TG的作用。[关键词]山楂;黄酮;胆固醇;甘油三酯;活性部位中图分类号:R285·5文献标识码:A文章编号:1000—2723(2009)05—0043—03许多含山楂的中成药或自拟处方[1~5]具有降血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的作用。虽然多数作者认为山楂制剂降脂作用的主要成分是山楂黄酮,但却缺乏直接证据证明这一观点。为此,本实验拟对山楂降脂作用及其活性部位予以探索。1、材料与方法1.1山楂成分的提取与分离[6~7]生山楂(北京同仁堂制药厂生产)以4倍体积的80%乙醇回流提取,每次3h,共3次,得初提物和残渣。初提物回收、挥干乙醇后用乙酸乙酯萃取,挥干后得总黄酮,剩余部分挥干得浸膏。测定各组分的总酸度[8](K系数取0.070)、高效液相法测定总黄酮含量(北京市防疫站测定)结果见表1。本实验拟观察3种组分、各取4个水平(见表2)对血TC、TG的影响。表1三种组分中总酸度和总黄酮含量组分总酸度(%)总黄酮(%)残渣0.9575.000黄酮0.420.005浸膏67.270.0401.2动物实验从军事医学科学院购置16只6~8周龄雄性金黄地鼠,按TC水平随机编为1~16号。在SAS6.12上运行“直接设计程序”,选出最佳试验方案[9],见表2的第1~4列。动物饲以含胆固醇0.2%、脂肪20%的高脂饲料,按表2剂量临时配药,每日1次灌胃2mL/100g·wt。表2直接设计动物实验实施方案(g/kg·wt)动物编号浸膏总黄酮残渣TC(mmol/L)TG(mmol/L)10.000.000.65404.37309.2320.000.151.95178.30143.0830.000.050.00343.14427.6940.000.051.95240.87264.6250.260.100.65329.69315.3860.260.100.00356.60670.7770.260.150.00222.03670.7780.260.101.30253.66400.0090.520.000.65182.34230.77100.520.001.30240.20163.08110.520.051.95213.29204.62120.520.101.30137.26170.77130.780.151.30215.30266.15140.780.051.95235.49418.46150.780.000.65328.34224.62160.780.150.00215.30247.691.3样品采集及检测用药4周后,乙醚麻醉动物,用肝素化的毛细管从内眦静脉取血40μL,用毛细管离心机分离血浆,用北京中生试剂公司生产的总胆固醇试剂盒和甘油三酯试剂盒测定TC、TG。1.4统计学方法用SAS6.12作多元逐步回归分析,选入变量α=0.05,剔除变量α=0.10。2、结果给药第4周测定动物血浆TC、TG,结果见表2的第5~6列。以TC、TG为应变量,总黄酮、浸膏、残渣及它们之间的一级交互作用与二级交互作用为自变量进行多元逐步回归分析,结果见表3、表4。2.1影响TC的因素(见表3)表3各种组分及其交互作用对TC的影响回归模型回归系数tP标准化系数截距498.5613.3080.00010.0000总黄酮-732.48-4.350-0.00142.3119浸膏-413.62-1.8450.0949-0.2511残渣-128.92-5.0840.0005-1.0172浸膏×残渣173.973.0670.01190.8649由标准化系数可知,山楂总黄酮是降TC的主要成分,其次是残渣和浸膏。但浸膏与残渣交互作用项有显著性,当两者合用时升高动物TC。2.2影响TG的因素(见表4)表4各种组分及其交互作用对TG的影响回归模型回归系数tP标准化系数截距301.166.5790.00010.0000总黄酮411.303.2910.00720.9581浸膏-2220.41-4.1330.0017-0.0995残渣253.442.9010.01440.9299浸膏×残渣-1721.30-4.4740.0009-1.1635从标准化系数可知,总黄酮是降TG的主要成分,残渣与总黄酮有交互作用,两者合用时降TG作用加强。浸膏可升高TG。3、讨论我国有着丰富的山楂资源,所以对山楂的研究有着广泛的社会、经济效益。我国传统医学中山楂主要用于消食导滞、健脾开胃,近年来也曾有“山楂降脂片”、“益心酮”、“山楂酮”、“心安胶囊”等用于心绞痛、冠心病及高脂血症。国外用其花、叶、果提取物治疗心血管系统疾病也已有悠久历史,如德国的“Esbericard”、“Crataegutt”和保加利亚的“Crataemon”均为山楂属植物花、叶的制剂,用于心血管疾病的治疗[10]。国内大量对山楂类中成药或自拟处方的研究显示山楂具有降血胆固醇与甘油三酯的作用。如对实验动物有降脂作用的有复方山楂果茶、沙棘-山楂汁[11]、枸杞、山楂等提取物[12]、山里红、山楂、野山楂和云南山楂[13]、山里红水浸膏、山楂、黄芪及刺五加[14]等。人口服山楂制剂高脂康[15]等也有降脂作用。多数作者认为山楂制剂降脂作用的主要成分是黄酮,并有人把黄酮含量作为山楂类制剂的质量评价指标[6],但目前缺乏实验证据说明黄酮是山楂降脂作用的主要成分。直接设计是在改进正交设计与均匀设计的基础上发展起来的,可用计算机辅助设计,是一种经济、高效的设计方案,可应用于中药有效成分、最佳剂量及各种组分间的交互作用的筛选。为此,我们将山楂提取分离,得到黄酮、残渣、浸膏3种组分,分析提取方法并结合对3种组分的检验报告,残渣中主要成分为纤维素,浸膏中主要成分为有机酸,黄酮组分中主要成分为山楂总黄酮。采用直接设计方案进行动物实验,结果显示总黄酮是山楂降血TC、TG的主要成分,而且初步证明山楂黄酮与残渣合用时,其降TG作用加强。这提示我们,对山楂黄酮降脂作用的机制、交互作用的机制值得进一步研究。参考文献[1]刘全亮,杨中林.不同纯度山楂叶总黄酮降血脂作用的比较[J].海峡药学,2008,20(2):23-25.[2]薛洁,夏昌隆.山楂药理研究进展[J].新疆中医药,2002,20(4):69-71.[3]焦利萍.山楂总黄酮对急性血瘀模型大鼠血流变学指标的影响[J].中国药物与临床,2008,8(1):49-50.[4]叶希韵,徐敏华,李晓峰,等.山楂叶总黄酮降血脂防治鹌鹑脂肪肝形成的实验研究(英文)[J].复旦学服(医学版),2009,36(2):142-148.[5]谢伟华,孙超,刘淑敏.山楂黄酮对高脂血模型小鼠血脂及生脂基因转录表达的影响[J].中国中医杂志,2009,34(2):224-229.[6]徐任生,陈仲良.中草药有效成分提取与分离[M].上海:上海科学技术出版社,1981.321-28.[7]肖崇厚.中药化学[M].上海:科学技术出版社,1998.279-281.[8]黄伟坤.食品检验与分析[M].北京:轻工业出版社,1989.19-20.[9]胡良平.现代统计学与SAS应用[M].北京,军事医学科学出版社,2000.278-293.[10]ChristopherH,StevenF.Hawthorn.HerbalGram1990,(22):20-32.[11]董文彦,张琦,史晓伟,等.沙棘-山楂汁对小鼠血脂的影响[J].沙棘,1995,8(3):36-39.[12]鲍世铨,朱梅,王进玲,等.枸杞、山楂等提取物对家兔降血脂作用的研究[J].中国生化药物杂志,1994,15(4):286-287.[13]陈红宾,江京俐,於兰,等.四种山楂属植物的药理作用及其LD50比较[J].中国中药杂志,1994,19(8):454-455.[14]王树立.山楂、黄芪及刺五加对豚鼠胆固醇代谢的影响[J].中西医结合杂志,1987,8:483-484.[15]方成武.高脂康口服液质量标准的研究[J].安徽中医学院学报,1997,16(3):57-58.