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高二生物学案NO.8制作人：贺东奇审核人：苏子文2012.3.9姓名班级小组12.2.2动物细胞融合与单克隆抗体一、学习目标1、理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义2、理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用重点：动物细胞融合过程和单克隆抗体的制备过程及应用。二、学习过程【思维提升】1.植物体细胞杂交与动物细胞融合以及单克隆抗体不同点？2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。3.整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。4、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤（1）抗原制备；（2）免疫动物；（3)免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；（4)细胞融合；（5）杂交瘤细胞的选择培养；（6）杂交瘤细胞的筛选；（7）杂交瘤细胞的克隆化；（8）单克隆抗体的检定；（9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；（10）单克隆抗体的大量制备。【能力提升】世纪金榜35页典例一和典例二典例三：下图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题：（1）图中有A、B两次筛选过程，其中A过程目的是筛选出，B过程目的是筛选出。（2）请根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法）从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。方法：。原理：。比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇（PEG）诱导克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有用灭活病毒诱导制备单克隆抗体植物细胞杂交(番茄马铃薯植株)生产单克隆抗体过程第1步原生质体的制备(酶解法)正常小鼠的处理(注射灭活抗原)第2步原生质体的融合(物化法)动物细胞融合(物化生法)第3步杂种细胞的筛选和培养杂交瘤细胞的筛选和培养第4步杂种植株鉴定提纯单克隆抗体(特异性强、灵敏度高)原理/理论基础细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖融合前处理酶解法除去细胞壁：纤维素酶、果胶酶注射特定抗原法免疫处理正常小鼠促融因子物理法：电刺激、离心、振动化学法：聚乙二醇物化法：与植物相同生物法：灭活的仙台病毒意义和用途(1)克服有性远缘杂交不亲和性障碍(2)培育作物新品种①制备单克隆抗体②有助于疾病的诊断、治疗、预防