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实验二、显微镜下常见微生物的观察一、实验目的1、了解真核细胞的各种形态以及形态与机能的关系2、观察四类微生物的个体形态，掌握生物绘图的方法与技巧；3、学习用压滴法制做标本片。二、实验原理生物细胞可分为原核细胞和真核细胞两大类。原核细胞由细胞膜、细胞质和核物质等部分组成，不具有典型的细胞核结构及多种细胞器，如细菌细胞。原生动物是动物中最原始、最低等、结构最简单的单细胞动物，原生动物从单个细胞内分化出各种细胞器来完成多细胞动物所表现的各种生活机能。真核细胞由原核细胞进化而来，其内部结构与机能更是复杂和多层次化。在结构上，真核细胞突出表现为以膜系统的分化为基础，形成了有膜包围的典型细胞核和结构与功能更专一的多种细胞器，如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体、叶绿体及液泡等。并且，构成真核生物的真核细胞种类繁多，形态各异，其形态的多样性又与机能密切联系。细胞内的结构在自然状态下，近于无色，一般要经过染色后方可在普通显微镜下显示的较清楚。不同的细胞组分对各种染料的亲和力不同。两者间的亲和力强，染色就深，否则，染色就浅或无，这样便能形成足够的反差以区分细胞组分。一般生物染料不能穿透细胞膜，只有用化学试剂或热固定细胞，破坏细胞膜结构后，染料才能进入细胞内部发挥其染色作用。有些染色剂对细胞无毒性或毒性很小，并能进入活细胞内的染色，显示活细胞的某些结构，称活体染色，活体染色分体内染色和离体染色两种。体内活染是使染料进入生物体内进行染色，离体活组织染色是对离体但仍保持生活状态的活细胞进行染色。三、实验材料1.器材光学显微镜、载玻片、盖玻片、示范片、消毒牙签、吸水纸、擦镜纸等。2.试剂活性污泥混和液(内有原生动物和微型后生动物）、醋酸洋红染液、50％乙醇、香柏油、二甲苯和0.85％生理盐水等。四、实验操作І、示范片的观察1.细菌三型制片标本先在低倍镜下找到待观察的样品区域，并将标本移至视野中央，然后，将低倍镜移开，在待观察的样品区域滴一滴香柏油，再用油镜观察。注意识别细菌的球状、杆状和螺旋状三种状态，在细菌细胞中可以观察到明显的细胞核吗？观察完毕，清洁油镜头。2.草履虫草履虫为微型单细胞动物。一般生物为多细胞，原生动物从单个细胞内分化出各种细胞器来完成多细胞动物所表现的各种生活机能。3.酵母菌、霉菌、放线菌示范片的观察ІІ临时制片1.口腔黏膜细胞涂片标本的制备、观察与绘图。(1)人口腔黏膜细胞的涂片标本的制备吸取醋酸洋红(或碘液)滴一滴在干净载玻片中央，将消毒牙签粗的一端伸入口腔，在口腔颊内壁上轻轻刮取黏膜上皮细胞，将刮下的白色粘性物质放入载玻片上的染液内，分散均匀。染色10~30min后，加盖盖玻片，即用镊子夹取盖玻片的一侧，将另一侧边缘先接触载玻片上的染液，然后将整块盖玻片慢慢盖上，注意两玻片之间不要有气泡。若盖玻片的周围的染液过多，可用吸水纸吸去盖玻片边缘多余的染液。(2)观察将以上制备的标本片置显微镜的载物台上，有盖玻片的一面向上。用标本移动器的卡片卡紧，并转动标本移动器的螺旋，移动标本片，使待观察的材料处于物镜的正下方。在低倍镜下，可看见人口腔黏膜上皮细胞呈扁圆形或扁平形。再寻找较分散，轮廓清晰的单细胞，移至视野中央转高倍镜观察。高倍镜下可看见细胞外仅有的一大致可辩的细胞界限，即细胞膜。细胞核扁圆形呈鲜红色(如用碘液染则为深红色)，位于细胞中央，细胞质浅红色(或浅黄2.采用压滴法观察活性污泥中的原生动物及后生动物。(1)擦净载玻片和盖玻片，即将浸洗过的玻片用纱布擦干。(2).用玻璃滴管吸活性污泥液，滴一滴在载玻片的中央。(3).加盖片：右手持镊子，轻轻夹住盖玻片，使盖玻片边缘与左边水滴的边缘接触，然后慢慢向下落，方平盖玻片。这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤掉，以免产生气泡。如果盖玻片下的水分过多，则盖玻片容易浮动，影响观察，可用吸水纸条从盖玻片的侧面吸去一部分水。如果水未充满盖玻片时，容易产生气泡，可从盖玻片的一侧再滴清水将气泡驱走，即可进行观察。活性污泥中常见微生物：五、思考题1.使用油镜为什么先用低倍和高倍镜检查？2.你观察到几种微生物？将他们的形态绘成图。