实验5不同因素对家兔离体肠肌收缩的影响

实验5不同因素对家兔离体肠肌收缩的影响xxx（浙江中医药大学20xx级xxxxxxxxxxxx，20xxxxxxxxx）摘要：目的研究17℃台氏液、0.01%乙酰胆碱（Ach）、0.01%肾上腺素(E)、1当量NaOH、1当量HCl、缺氧等条件对家兔离体肠肌运动的影响。方法向浸有离体家兔肠肌的38℃的台氏液迅速换成17℃的台氏液并依次滴加0.01%Ach、0.01%E、1NNaOH、1NHCl及停止供氧，并用生物信号采集处理系统记录肠肌的收缩情况。结果将38℃的台氏液迅速换成17℃的台氏液后，肠肌运动肠肌运动张力与频率先迅速降低后逐渐增大；滴加0.01%Ach、1NNaOH后，肠肌运动张力和频率都增大；滴加0.01%E、1NHCl肠肌运动张力与频率迅速降低；停止通氧后，肠肌运动张力和频率逐渐降低；恢复通氧后，肠肌运动张力和频率逐渐升高。结论低温能使肠肌运动暂时减弱；一定浓度Ach、NaOH可促进肠肌的运动；一定浓度的E、HCl可以抑制肠肌的运动；短时缺氧使肠肌运动在一开始有增强的现象，而后减弱。关键词离体肠肌；收缩；台氏液；Ach；E；NaOH；HCl；缺氧1.材料和方法[1]1.1实验材料：家兔。1.2实验仪器：恒温水泵、空气泵、固定器、恒温离体小肠灌流装置、微调固定器、张力换能器、铁支架、电脑、生物信号采集处理系统、木锤、止血钳、手术刀、20ml注射器、手术剪、持针器、手术圆针、缝线、烧杯、手术盘、钢碗。1.3实验药品和试剂：台氏液、0.01%乙酰胆碱（Ach）、0.01%肾上腺素(E)、NaOH、HCl。1.4离体家兔肠肌制备：取家兔一只，将其倒提，用木锤猛击后脑勺，使之昏迷，将其仰卧位固定，用手术剪从剑突下沿腹部白线向耻骨联合方向剪开皮肤约5cm长，打开腹壁，暴露腹腔，顺着胃找到与胃相连的十二指肠，沿十二指肠向空肠的方向取出小肠段约30cm，放入一小手术盘中，用注射器抽取预冷台氏液冲洗肠内容物，直至冲洗干净为止。将干净的小肠段放入另一盛有预冷台氏液的小手术盘中，用手术刀刮去肠管外的血管和系膜，将小肠段切割成小段，每小段肠约2cm长，并在小段肠的两端、距断端约1mm处各穿约30cm长的线。1.5标本固定1.5.1取出固定架，将肠段的下端的线头尽量靠近并牢固地绑紧在固定架的小钩，将固定架放回内槽，使小钩尽量靠近槽底（尽量减少台式液的使用），重新用张力微调器固定固定架，将空气泵重新连接至固定架，并通过固定架将空气输入内槽的台氏液中。1.5.2将肠段的上端的线头与张力换能器的应变梁连接,用张力微调器缓慢升降拉线，保持线有一定紧张度，肠段、线应与地平面垂直，同时，肠段及上端的线头不得碰及槽壁和固定架。1.5.3换液：打开灌流槽的内槽排水阀门，排去原来的台氏液，用20ml注射器从恒温水泵的小烧杯中抽取被加温的台氏液放入灌流槽的内槽中，其每次用量以淹过肠段的量为准。调节位于固定架尾部的空气流量调节旋钮，使气泡即细小、均匀，又不影响肠段的运动。1.6实验观察1.6.1记录一段38℃的台氏液环境中小肠平滑肌收缩活动曲线，观察其收缩活动的特点。关闭恒温水泵，将原38℃台氏液换成等量的17℃台氏液，观察肠活动的改变,待其活动改变明显时，冲洗1遍，再加入等量的38℃的台氏液。1.6.2待肠活动恢复后，向台氏液中加入0.01%乙酰胆碱（Ach）2滴，观察小肠收缩活动的改变,待反应稳定后冲洗2遍，再加入等量的38℃的台氏液。1.6.3待肠活动恢复后，向台氏液中加入0.01%肾上腺素(E)2滴，观察小肠活动的改变，待反应稳定后冲洗2遍，再加入等量的38℃的台氏液。1.6.4待肠活动恢复后，向台氏液中加入1NNaOH2滴，观察小肠收缩活动的改变，待.反应稳定后冲洗2遍。1.6.5待肠活动恢复后，向台氏液中加入1NHCl2滴，观察小肠收缩活动的改变反应稳定后冲洗2遍。1.6.6待肠活动恢复后，停止空气泵的工作，观察肠活动的改变，待其收缩活动改变明显时反应稳定后冲洗1遍，再加入等量的38℃的台氏液，空气泵描记一段肠段收缩活动恢复曲线后终止实验。2.实验结果图表117℃的台氏液图表20.01%Ach图表30.01%E图表41NNaOH图表51NHCl图表6停止通氧、恢复通氧将38℃的台氏液迅速换成17℃的台氏液后，肠肌运动肠肌运动张力与频率先迅速降低后逐渐增大；滴加0.01%Ach、1NNaOH后，肠肌运动张力和频率都增大；滴加0.01%E、1NHCl肠肌运动张力与频率迅速降低；停止通氧后，缺氧后肠肌开始一段有增强的现象，而后肠肌运动张力和频率逐渐恢复正常；恢复通氧后，肠肌运动张力和频率先降低而后恢复正常。3分析与讨论3.1消化道平滑肌对温度刺激敏感。38℃的台氏液迅速换成17℃的台氏液后，肠肌内的酶活性降低，小肠代谢水平降低，故平滑肌兴奋性降低导致收缩频率降低，同时收缩幅度也减弱。由于肠肌对低温有适应能力，故随后肠肌运动逐渐恢复正常。3.2Ach可明显兴奋胃肠道平滑肌，故：①收缩频率增高：Ach与肌膜上的M受体结合，使生电性钠泵活动减弱，从而使静息电位升高，平滑肌兴奋性提高。②收缩幅度增加：平滑肌钙离子专用通道开放，钙离子内流，一方面使收缩频率增加，另一方面可以增加肌浆钙离子浓度。3.3肾上腺素作用于肌膜，一方面使生电性钠泵活动增强，另一方面结合膜受体。其中α受体使钾离子外流增加，β受体使钾、钙离子外流增加，同时增强钙泵活动。其中生电性钠泵活动增强、钾、钙离子外流增加导致细胞膜超级化，平滑肌兴奋性降低，收缩频率降低。钙离子外流、钙泵活动增强导致肌浆钙离子浓度下降，收缩幅度下降。3.4消化道平滑肌对化学刺激敏感，小肠的PH约为7.0～8.0,过高或过低的PH都会影响肠肌的收缩。滴加1NNaOH后，台氏液的PH值处于7.0～8.0之间，处于肠肌收缩的最适PH，肠肌运动加强。由于[H+]浓度降低：①使钙离子通道活性受抑制减弱，钙离子内流，平滑肌兴奋性增高，故收缩频率增高，收缩幅度增强；②肌浆网钙离子释放增加，平滑肌收缩幅度增强。张力曲线而后下降，说明肠肌对PH值变化有一定的适应力[2]。3.5消化道平滑肌对化学刺激敏感，滴加1NHCl后，台氏液的PH低于最适范围（7.0～8.0），胞外[H+]升高：①抑制钙通道的活性，钙离子内流减少，肌肉收缩减弱。②干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程，氢离子与钙离子竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低，使肌原纤维对钙离子的敏感性和钙离子从肌质网的释放量减少。收缩减弱。3.6停止通氧后，肠肌运动得不到能量供给，故肠肌运动在缺氧开始一段时间代偿性增强；由于ATP有限，故随后运动张力和收缩幅度减弱。恢复通氧后，肠肌得到能量供给，肠肌代偿运动消失，故造成运动张力和频率短暂降低，由于ATP充足，故随后运动张力和频率逐渐升高。4.结论低温通过抑制酶活性而使肠肌运动暂时减弱；一定浓度Ach、NaOH通过增强钙离子通道活性而促进肠肌的运动；一定浓度的E、HCl通过减弱钙离子通道活性而抑制肠肌的运动；短时缺氧能使肠肌运动暂时代偿性增强，随后减弱。5.参考文献[1]陆源林国华杨午鸣主编。机能学实验教程，第二版，北京科教出版社，2010。176。[2]朱大年主编。生理学，第七版。人民卫生出版社，2009。164。