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动物生物化学实验（共21学时）指导老师:刘建昌池雪林1、系统练习和掌握生物化学的基本实验技能；一、实验教学的目标和要求4、培养理论联系实际的学风和动手能力。2、熟悉常用生化仪器的原理和使用方法；分光光度计、离心机、电泳仪等3、了解有关电泳、离心、层析、光谱分析、制备、透析等基本的生化实验手段；二、实验室的规则1、实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验的原理。2、实验过程要听从教师的指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。3、如实进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。4、使用各类的仪器应严格遵守操作规程。5、实验完毕必须及时清洗并放好各种的玻璃仪器，做好值日生。三、实验室的管理正确清洗玻璃器皿各组玻璃仪器的管理每次实验认真清点保管好玻璃器皿损坏丢失赔偿问题1、用规范的实验报告纸书写；四、实验报告书写要求5、真实准确描述实验结果，并对结果进行分析2、报告包括实验目的、实验原理、试剂与器材、实验步骤、实验结果和结果分析；3、简明扼要的概括实验原理和实验步骤；4、列出主要的试剂与器材；包括分析结果与预期实验现象差异的原因、注意事项、实验课改进的意见等。学时分配表章次实验、实习内容总学时实验一乳酪蛋白的制备及部分性质检测3实验二蛋白质含量的测定3实验三唾液淀粉酶活性的观察3实验四血浆IgG的分离制备3实验五动物组织染色体DNA的制备3实验六聚丙烯酰胺凝胶柱状电泳分离血清蛋白6实验一乳酪蛋白的制备及部分性质检测1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。掌握蛋白质等电点沉淀蛋白质的原理和方法。二、实验目的一、实验内容2、对酪蛋白、乳清蛋白的部分性质进行检测。1、采用等电点沉淀、低速离心等方法从牛乳中制备酪蛋白粗品;2、通过鉴定加深对蛋白质理化性质的认识。三、原理乳的营养成分蛋白质乳脂乳糖矿物质蛋白质酪蛋白乳清蛋白牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，人乳中的蛋白质主要是白蛋白。乳蛋白的分离纯化是研究其组成、结构、性质和生物学功能的基础。根据这个原理，将牛乳的pH调整到4.6，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白便会沉淀出来。牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，约占总蛋白量的80%。蛋白质是两性电解质。蛋白质在等电点时，溶解度最小，容易沉淀析出。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，便可得到纯度较高的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定。1、醋酸钠缓冲液（0.2mol/L，pH4.6）2、95%（v/v）乙醇3、乙醚4、0.1mol/LNaOH5、0.2%HCl6、5%醋酸铅7、pH试纸（或pH计）8、表面皿，电炉，离心机，水浴锅,循环水真空泵。四、试剂及器材1、酪蛋白等电点沉淀（一）酪蛋白的制备取新鲜牛乳50mL,放入250mL烧杯中加热至40℃。加入50mL加热至同样温度的醋酸钠缓冲液，一边加一边摇动，调整混合液的pH为4.6。冷却至室温，继续放置5min，然后离心15分钟，上清液为乳清（保留）。过滤所得沉淀即酪蛋白。五、实验步骤2、除脂类杂质将上述沉淀物转入烧杯中，加约30mL乙醇混匀，用布氏漏斗抽滤。该沉淀继续用乙醇和乙醚等量混合液（30mL）洗涤1次，抽干。取出粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发。（二）酪蛋白的性质鉴定2、含硫（胱氨酸和蛋氨酸）测定取少量酪蛋白溶于1mL0.1mol/LNaOH溶液中，再加入1~3滴醋酸铅，加热煮沸，观察溶液的颜色。1、溶解度取试管4支，分别加入蒸馏水、0.2%盐酸、0.1mol/L氢氧化钠、2mol/L尿素溶液各2mL。于每管中加入少量酪蛋白。不断摇荡，观察并记录各管中的酪蛋白溶解性。（三）乳清中可凝固蛋白质的鉴定将制备酪蛋白时所得滤液移入烧杯中，徐徐加热。即出现蛋白质沉淀。此为乳清中的球蛋白和清蛋白。注意事项3、离心机使用时注意平衡,加热溶液小心烫伤。1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛乳液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。2、乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。思考题1、等电点沉淀蛋白质的机制是什么？2、用本实验方法获取的蛋白质是否具有生物活性？祝各位同学实验成功!