实验一坐骨神经腓肠肌标本的制备

生理学实验录象系列实验操作:潘盛武技术指导:杨盛昌实验录像:奉俊课件制作:杨铭制作单位:广西师范大学生命科学学院生理教研室2006年7月[实验目的与要求]学习捣毁蛙脑和脊髓的方法。熟悉制备蛙类坐骨神经——腓肠肌标本的方法，为进行与之相关的实验打下基础。[实验原理]蛙是两栖类动物，某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，在实验中容易适应外界环境，实验要求比较简单，易于控制和掌握。生理实验中常用蛙的坐骨神经——腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。[实验对象]蛙[实验器材]手术剪、大剪刀、镊子、钟表镊子(尖头)、金属探针、蛙板、玻璃分针、锌铜弓、烧杯、培养皿、纱布、棉线等。[实验用药品]任氏液[实验方法与步骤]1.捣毁蛙的脑与脊髓：用金属探针在枕骨大孔处将蛙的大脑和脊髓破坏。2.去掉躯干上部及腹腔内脏用大剪刀将蛙耳后腺后缘水平位的脊柱断，左手持手术镊提起剪开的脊柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开腹壁的皮肤与肌肉，注意勿损伤骶髂神经丛，使蛙头及内脏自然下垂，剪除全部躯干上部及内脏组织(图1)，弃于污物盘内。图1剪除蛙躯干及内脏3·剥除后肢皮肤避开神经，用左手持镊子夹住脊柱断端，右手用镊子或直接用手捏住断端皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤，拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧(图2)。将全部皮肤剥除后，将剥干净的后肢标本置于盛有任氏液的培养皿中。洗净双手及手术器械上的污物。图2剥除后肢皮肤4·分离两腿沿耻骨联合中央，用大剪刀将脊柱剪成左、右两半，将己分离的两侧标本放在培养皿中，用浸过任氏液的棉花或纱布覆盖，保持湿度。5·游离坐骨神经(1)确定坐骨神经位置:取一侧后肢标本，在脊椎下段外侧可以看到下部脊神经，这些脊神经中最粗的就是坐骨神经，它走向大腿部。伸展大腿，从背面可以看到一条黑色的血管，与其伴行的便是坐骨神经。在大腿基部，坐骨神经位于坐骨神经沟内，即股二头肌和半膜肌之间。(2)游离坐骨神经：先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部分，将末与脊神经相连的椎骨片剪掉，轻轻提起与脊神经相连的一小段椎骨片，剪断神经分支。然后将标本腹位固定于干净蛙板上，用玻璃分针沿坐骨神经沟纵向分离、暴露坐骨神经的大腿部分，一直游离到膝关节，自上而下剪断所有坐骨神经分支。沿股骨的方向剪掉大腿全部肌肉，刮干净股骨。在股骨中部剪断，至少保留1～1.5cm，断面呈斜截面(图3)。图3游离坐骨神经6·游离腓肠肌腓肠肌为蛙小腿腹侧最突出的肌肉。在跟腱处穿线结扎腓肠肌,在结扎线下方剪断跟腱，游离腓肠肌至膝关节处，剪去膝关节以下的后肢部分，即制得一个完整的坐骨神经——腓肠肌标本，包括坐骨神经、腓肠肌、一段股骨和一小段脊柱骨4部分(图4)。图4坐骨神经—腓肠肌标本7·检验标本的兴奋性将标本放入培养皿中，滴上任氏液保持湿度，左手轻轻提起标本的脊柱骨片，右手持经任氏液蘸湿的锌铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生收缩，表明标本具有正常的生理活性，兴奋性良好。[关键技术]1.毁中枢的方法。2.坐骨神经的剥离技术。[注意事项]1·制备神经肌肉标本过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性。2·已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物，也不要用水冲洗，以免影响组织机能。3·分离神经时，一定要用玻璃分针。不得用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分，以免造成损伤。4·分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离于净。5·实验要迅速，以免时间过长影响标本活性(兴奋性)。[思考题]1·毁坏脑和脊髓后的蛙应有何表现?2·制备好的神经肌肉标本为何要放在有任氏液的培养皿中?3·锌铜弓刺激检测标本活性的原理是什么?实验录象实验一坐骨神经腓肠肌标本的制备