实验二土壤微生物的分离鉴定

微生物学实验实验二土壤微生物的分离鉴定实验目的2.通过从土壤中分离微生物，初步掌握微生物的分离鉴定方法。1.掌握微生物的分离鉴定原理。实验原理该实验采用平板分离法，本方法由于操作比较简单，普遍应用于微生物的分离和纯化。其原理主要包括两方面：1.在适合于微生物的生长条件（如营养、温度、酸碱度、氧气等）下培养待分离微生物，或者加入某种抗生素形成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，进而筛除一些不需要的微生物。2.微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖形成的。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养的微生物。获得单个菌落的途径可通过稀释涂布平板或平板划线等方法来完成。实验器材（一）牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，试管，离心管（50ml）培养皿，电子天平，高压蒸汽灭菌锅，无菌操作台，恒温培养箱，移液枪（枪头），pH试纸（pH6.4~8.0）。（二）土样实验步骤牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g琼脂15～20g水1000ml调节pH至7.2～7.41.配制培养基2）121℃灭菌20min，倒平板固体培养基。2.制备土壤稀释液称取10g土样，放入盛有90ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的离心管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.1、0.01、0.001和0.0001不同稀释度的土壤溶液。(本实验采用50ml离心管盛无菌水)3.涂布培养把0.01、0.001和0.0001三个浓度的土壤稀释液作为涂布平板的含待分离微生物的菌液，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基上，共有9个培养基平板，标号，37℃温箱培养24~48h。4.划线分离（划线培养）对土壤稀释溶液微生物的培养基平板进行观察，记录区分明显的细菌特征。挑取此细菌在新的培养基中划线培养（每种细菌培养3个培养皿），标号，37°C温箱培养。1.斜线法2.曲线法3.方格法4.放射法5.四格法5、初步鉴定对菌体进行革兰氏染色观察，记录结果。注意事项1.制备土壤稀释液时，要注意应使土样均匀分散在稀释液中。2.无菌操作。实验思考1.在平板划线法中，为何每次都需将接种环上的残余物烧掉？2.为什么要涂布后的平板要先正放一段时间后再倒置培养？3.怎么检验培养皿上的某个单菌落是不是纯培养？