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实验八、粗脂肪的测定目的要求学习和掌握索氏提取器提取脂肪的原理和方法。学习和掌握用重量分析法对粗脂肪进行定量测定。实验原理粗脂肪是指包括脂肪、游离脂酸、腊、磷脂、固醇及色素等脂溶性物质的总称。这类物质一般溶于乙醚、石油醚、苯及氯仿等，不溶于水或微溶于水。索氏提取器由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的。提取时，将待测样品包在脱脂滤纸内，放入提取管内。提取管内加入无水乙醚。加热提取瓶，无水乙醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内的无水乙醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的无水乙醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶的无水乙醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到抽提完全为止。本法利用乙醚在索氏提取器中提取样品中的脂肪，然后蒸发除去乙醚，干燥、称重，即可得样品中粗脂肪的百分含量。叶黄素分子结构叶黄素结构β—胡萝卜素1.保护视力叶黄素对视网膜中的黄斑有重要保护作用，缺乏时易引黄斑退化和视力模糊．进而出现视力退化，近视等症状。叶黄素在人体内可转化为VA。叶黄素对眼睛的主要生理功能是作为抗氧化剂和光保护作用．视神经不可再生，极易受到有害自由基的伤害，叶黄素的抗氧化作用可抑制有害自由基的形成。叶黄素可吸收大量蓝光，蓝色可见光的波长和紫外光接近，是能达到视网膜的可见光中潜在危害性最大的一种光．在到达视网膜上敏感的细胞前，光先经过叶黄素的最高聚集区，这时若视黄斑处的叶黄素含量丰富就能将这种伤害减至最小。2.抗氧的作用叶黄素较强的氧化作用，能抑制活性氧自由基的活性，阻止活性氧自由基对正常细胞的破坏．有关实验证明，活性氧自由基可与DNA、蛋白质、脂类发生反应，削弱它们的生理功能，进而引发诸如癌症、动脉硬化，增龄性黄魔变性症等慢性病的发生．叶黄素可通过物理或化学淬灭作用灭活单线态氧，从而保护机体免受伤害，增强机体的免疫能力。3.降低白内障的发生率白内障是世界范围内导致失明的主要眼疾，最新的研究证明通过增加叶黄素的摄入量可达到生率的目的，目前认为其机理为较低的黄斑色素密度与中老年人较高的晶状体视觉密度紧密关联，而较高的晶状体视觉密度被认为是白内障发病的明显特征。4.延缓动脉硬化作用最近的研究结果表明，叶黄素对早期的动脉硬化进程有延缓作用。主要是动脉主干道血管内膜厚度的变化与血液中叶黄素含量之间的关系．血液中叶黄素含量较低，极易引起动脉血管壁增厚，随着叶黄素含量的逐渐增加，动脉壁增厚趋势降低，动脉栓塞也显著降低．同时，动脉壁细胞中的叶黄索还可降低LDL胆固醇的氧化性。5.抗癌作用多项研究表明，叶黄素对多种癌症有抑制作用，如乳腺癌、前列腺癌、直肠癌、皮肤癌等．根据纽约大学药物学院最近的研究，在降低乳腺癌的发病率与叶黄素摄人量间有很紧密的关系，调查发现叶黄素摄人量低的实验组的乳腺癌发病率是摄人量高组的(2．08～2．21)倍。这种作用可能涉及与其他器官组织协同的间接免疫调节作用．该项研究得出结论，在膳食中摄人叶黄素不仅能抑制肿癌甚至可以起到预防肿瘤发生的作用．有关机构建议人均每天摄入400g～600g的水果和蔬菜可使患癌症的相对危险性降低50％。叶黄素是一种天然的类胡萝卜素，广泛地分布在水果和蔬菜中，特别是在万寿菊花中。万寿菊花中叶黄素含量非常高，其他类胡萝卜色素的含量非常低，是提取叶黄素的理想材料。万寿菊花也是叶黄素在食品工业中应用的最重要的来源。万寿菊花中游离叶黄素非常低，以叶黄素酯的形式存在，不易被人体吸收，而很多功能性食品添加剂对叶黄素的纯度要求很高，所以开发与之相适应的功能性叶黄素食品具有重大意义。早在上世纪80年代中期，西方医学研究人员就发现植物所含天然叶黄素是一种性能优异的抗氧化剂。将一定量叶黄素添加到食品中，可防止人体因器官衰老引起的一系列疾病。大量流行病学证据表明，叶黄素对视觉有保护作用，并具有预防白内障、动脉硬化、增强免疫力等功效，特别在预防癌变发生、延缓癌症发展等方面起着重要作用，是目前国际上功能性食品成分研究中的一个热点。万寿菊(TageteserectaL．)为菊科，万寿菊属植物，有香味，可作芳香剂；具有镇静、降压、扩张支气管、清热解毒、化痰止咳、解痉及抗炎等作用。用于治疗上呼吸道感染、百日咳、结膜炎、口腔炎、牙痛、咽炎、眩晕、小儿惊风、闭经、血瘀腹痛、痈疮肿毒、防治风湿等症。本文从万寿菊花中分离得到的24个单体化合物，利用核磁共振、质谱等光谱手段鉴定了22个化合物的结构。其中2个是新的半乳糖苷类光学异构体混合物，命名为二丁香酸酯3-α-半乳糖苷(3-α-galactosyldisyringicacid)15-a，二丁香酸酯3-β-半乳糖苷(3-β-galactosyldisyringicacid)15-b。已知化合物分别为：正三十四烷(tetratriacontane)1、dammarenediolⅡ3-o-n-palmitate2、β-香树脂醇(β-amyrin)3、16Z,19Z-pentacosadienoicacid4、乌发醇(uvaol)5、β-谷甾醇(β-sitosterol)6、豆甾醇(stigmasterol)7、VitaminEα8、9Z，12Z，15Z-十八碳三烯-1-醇(9Z，12Z，15Z-octadecatrien-1-ol)9、亚油酸甘油单酯(monolinoleoylglycerol)10、丁香酸(syringicacid)11、3，4-二羟基苯甲酸(3,4-dihydroxybenzonicacid)12、quercetagetin7-methylether13、槲皮万寿菊素(quercetagetin)14、正十六烷(n-hexadecane)16、quercetagetin5-methylether17、5,7-dimethoxyquercetin18、没食子酸(gallicgcid)19、3，4-二羟基-5-甲氧基苯甲酸(3,4-dihydroxy-5-methoxy-benzoicacid)20和槲皮万寿菊3-O-葡萄糖苷(quercetagetin3-o-glucoside)21，其中，2、3、4、5、8、9、12、19和20首次从该植物中分离得到。试剂和器材一、试剂乙醇石油醚二、材料万寿菊二、器材索氏提取器（50mL）;分析天平；烘箱；电加热板；脱脂滤纸；脱脂棉；镊子；烧杯。操作方法一、样品处理将干净的万寿菊放在80~100℃烘箱中烘4小时。待冷却后，准确称取2g,置于研钵中研磨细，将样品及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包扎好，勿使样品漏出。二、抽提将洗净的索氏提取瓶，在105℃烘箱内烘干至恒重，记录重量。将石油醚加到提取瓶内约为瓶容积的1/2~2/3。将样品包放入提取管内。把提取器各部分连接后，接口处不能漏气。用水浴加热回溜2~4小时。控制温度，每小时回馏3~5次为宜。直到用滤纸检验提取管中的石油醚液无油迹为止。提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，洗涤提取管。当提取管中的石油醚液面接近虹吸管口时，倒出石油醚。若提取瓶中仍有石油醚，继续蒸馏，直至提取瓶中石油醚完全蒸完。取下提取瓶，用吹风机在通风橱中将剩下的石油醚吹尽，再置入105℃烘箱中烘干、恒重，记录重量。五、计算按下式计算样品中粗脂肪的百分含量。式中：W0：接收瓶重；W：提取脂肪干燥后接收瓶重。注意事项（1）石油醚易燃、易爆，应注意规范操作。（2）待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上，在60~80℃烘箱中烘干后，放入提取管内。思考题1.做好本实验应注意那些事项？2．索氏提取法为什么又称游离脂肪酸定量测定法？