实验四-4pH对淀粉酶活性的影响

实验四-4pH对淀粉酶活性的影响一、实验目的了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。二、原理酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。三、试剂和器材1.试剂0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、柠檬酸钠溶液、碘化钾－碘溶液2.器材恒温水浴锅四、操作步骤1.取3个锥形瓶，按下表的比例吸取磷酸氢二钠溶液和柠檬酸钠溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0的三种缓冲溶液。锥形瓶号0.2mol/L磷酸氢二钠（mL）0.1mol/L柠檬酸缓冲液pH1235.157.729.724.852.280.285.06.88.02.另取3只干净试管，按下表操作。试管编号试剂处理123pH5.0缓冲溶液/mL3--pHh6.8缓冲溶液/mL-3-pHh8.0缓冲溶液/mL--30.5%淀粉溶液/mL222每隔1min逐管加入唾液稀释液/mL222充分摇匀，置37℃水浴保温2min，到达保温时间后，每隔1min依次取出立即加碘化钾－碘溶液/滴222记录观察结果五、注意事项1.本实验中的保温时间是2min，但实际是随不同的唾液淀粉酶的活性而变化的，所以在实验前先找出准确的保温时间是本实验的关键；2.加入酶液后务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉溶液接触，反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。六、思考题1.pH值导致酶活性丧失的分子机理是什么？2.pH值改变导致的活性丧失，pH值恢复后活性也能恢复吗？