实验四酵母核糖核酸的分离与组分鉴定

实验四酵母核糖核酸的分离与组分鉴定（P159）【目的】掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方法酵母核酸中RNA含量较多；一般提取的RNA主要是rRNA，与蛋白结合在一起形成核糖核蛋白（RNP）；RNA溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂；RNA的等电点在2.0-2.5，DNA的等电点在4.2左右；碱提法、盐提法在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。【原理】核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。磷酸+钼酸铵→磷钼酸铵↓核糖+地衣酚试剂→墨绿色化合物嘌呤碱+硝酸银→嘌呤银化物（白色）【原理】【试剂和器材】器材研钵刻度试管、普通试管刻度离心管搅拌棒量筒、移液管、滴管恒温水浴锅台式离心机【试剂和器材】试剂酵母片0.04mol/LNaOH溶液1.5mol/LH2SO4溶液冰醋酸浓氨水95%乙醇0.1mol/LAgNO3溶液三氯化铁浓盐酸溶液苔黑酚乙醇溶液定磷试剂（一）RNA的提取【实验方法】3片干酵母片于研钵中充分研磨放入刻度试管加0.04mol/LNaOH10mL沸水浴加热30min(搅拌)取出加乙酸4滴，使提取液呈酸性2500rpm,离心15min,弃沉淀取上清加入等体积95%乙醇，边加边搅拌静置5min2500rpm,离心5min,弃上清沉淀即为RNA粗制品RNA粗制品+5mL1.5mol/LH2SO4，沸水浴加热10min，制成水解液。组分鉴定嘌呤碱：1mL水解液+5滴浓氨水+1mL0.1mol/LAgNO3，观察有无白色絮状嘌呤银化物沉淀。核糖：1mL水解液+2mLFeCl3-HCl+0.2mL苔黑酚乙醇，沸水浴3min，观察溶液有无墨绿色出现。磷酸：1mL水解液+1mL定磷试剂，沸水浴3min，观察溶液中有无蓝色沉淀生成。（二）RNA的组分鉴定【实验方法】说明各试管中现象解释原因得出结论【结果与分析】RNA提取实验过程中各操作步骤的作用是什么？心得【讨论与心得】