嗜酸乳酸菌的计数方法

嗜酸乳杆菌的检测计数方法所用方法:下列方法适用于在浓缩的或标准化的益生菌混合粉末中嗜酸乳杆菌的计数。参考文献:1.乳制品检验的标准方法。16版,1992第6章(微生物计数法)P213-246.2.下列方法参考了“由美国营养食品协会1992年9月推荐的国际乳品标准测试方法(方法号为117A:1988)”操作步骤:1.无菌称取11.0g冷冻干燥的NCFM菌种片，粉末或混合粉末加入一无菌袋.2.无菌称取99ml经灭菌的室温的MRS培养基，加入上述菌种粉末的无菌袋。.3.将无菌袋轻轻震荡充分混和2分钟4.将其在室温下放置30分钟，使经冷冻干燥的菌种重新水合。5.再次将无菌袋轻轻震荡充分混和2分钟。6.用0.1%蛋白胨溶液作空白，按下列方法进行系列稀释：从上述袋中吸取1.0ml菌种溶液加入99mls蛋白胨溶液，得到10-3的稀释液.重复上述操作得到适宜的稀释液。按照上述文献中的标准方法轻轻振荡。7.每一样品重复三个操作：用1.0ml无菌移液管将上述稀释液加入贴有标签的无菌陪替氏培养皿中。8.将装有已灭菌的DifcoMRS琼脂培养基的小瓶在100C加热30分钟融化，然后放入45C水浴中保温在45C，将瓶浸入500PPM氯水溶液(每天新鲜制备),或在火焰上消毒.9.以下操作在超净工作台下进行：每100mlDifcoMRS琼脂培养基中加入1.0ml经灭菌的5%盐酸半胱氨酸溶液，使得最后MRS琼脂培养基中盐酸半胱氨酸的浓度为0.05%.10.将上述含0.05%盐酸半胱氨酸的MRS琼脂培养基约15mls加到已稀释好的培养皿中，轻轻旋转培养皿使其混合均匀，放置在温度较低的表面上使其在室温下固化。11.将培养皿在38C厌氧培养(H2/CO2加入BBL厌氧缸)72小时.计数:在含0.05%盐酸半胱氨酸的MRS琼脂培养基中数出菌落总数。挑选菌落数在25-250个之间的进行计数，按照稀释的倍数换算出每个菌种粉末中嗜酸乳杆菌的数量。参考“乳制品标准检测方法,16版,p213-246.”