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大孔树脂对菊花黄酮的特性吸附研究中药2班滕智兴20085338概述•大孔树脂是20世纪70年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂,它是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂(如乙醇、丙酮及烃类等)对氧、热、化学试剂稳定及机械强度高的有机高分子聚合物,具有良好的吸附性能。现已广泛用于物质的分离纯化。•国外最早将大孔树脂用于工业废水处理、化学工业、医药工业、分析化学、临床检验等领域,我国主要用于医药工业的药物及生物活性物质的提纯和中草药化学成分的提取分离.该工艺操作简便,成本较低.树脂可反复使用,适合工业生产。因此,它具有很强的推广应用价值,目前已应用于中药新药的开发和中成药的生产中。•本实验主要研究大孔树脂在菊花黄酮分离纯化中的应用。•已完成的内容:选择4种大孔树脂，通过研究其静态吸附动力学特性，进一步筛选出适合分离野菊花总黄酮的理想树脂，并考察pH值和洗脱剂体积分数对其吸附容量和解吸率的影响。•研究结果:AB-8,DM-130，HPD-100和D-101树脂有较大的吸附容量和较高的解吸率，且其中AB-8树脂显著优于另外三种，其吸附容量高达90.57mg/g、洗脱率为87%，而且具有良好的静态吸附动力学特性，是更为适合吸附分离野菊花总黄酮的理想树脂。AB-8树脂吸附分离野菊花总黄酮较合适的上样液pH值为4-5，洗脱剂为60%乙醇溶液。论文进展及具体内容•1.前5周主要是查阅相关资料，按任务完成外文文献翻译，并且拟定出正确的实验方案。•2.第6周开始进入实验室完成实验相关的前期准备工作，包括实验所需材料.仪器，以及实验其他用品的准备。•3.第7周主要是根据实验方案的要求，配制出实验所需试剂和标准品溶液，完成样品溶液的制备，测定出标准曲线方程。•（1）.所需溶液有：5%的亚硝酸钠溶液；10%的硝酸铝溶液；4%的氢氧化钠溶液；以及浓度分别为30%，60%，75%等的乙醇溶液若干备用。•（2）标准溶液的配制:准确称取105℃烘至质量恒定的芦丁40.2mg，用体积分数60%乙醇溶液溶解并定容至200mL，得质量浓度为0.2010mg/mL的芦丁标准溶液。•（3）标准曲线的绘制和线性回归方程的测定：•准确吸取上述芦丁标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00mL于•25mL容量瓶中，各加30%乙醇溶液至6mL，加5g/100mL亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加10g/100mL硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加4g/100mL氢氧化钠溶液10.0mL，摇匀，用30%乙醇溶液定容，摇匀，放置15min，以零管调节零点，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标、芦丁标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程•y＝11.567x-0.016溶液量（ml）0123456浓度（mg/ml）00.00840.016080.024120.03260.04020.04824吸光度00.0770.170.2510.3310.4550.584表1标准溶液吸光度与浓度关系•（4）菊花黄酮样品溶液制备及含量分析:称取干燥菊花粗粉30克，加入10倍量的75%的乙醇在80摄氏度的温度下进行回流提取2小时，一共提取3次，过滤后合并滤液，得到菊花总黄酮提取液。取样品溶液1ml加75%乙醇稀释到100ml后，再从中取1ml根据实验方法测定出其吸光度为0.014，根据回归方程得出样品溶液的浓度为：6.484mg/ml。•4.第8周主要完成大孔树脂的预处理：将DM-130型、AB-8型、HPD-100型、D-101型树脂先用4倍体积量95%乙醇或丙酮浸洗数次，每次24h,至浸洗液加适量水无白色浑浊现象止,用水反复清洗干净至无醇味,加入4倍体积量2mol./L的NaOH,浸泡12h,以水洗至中性;再加入4倍体积量4mol/L的HCl,浸泡12h,用水洗至中性后备用。•5.第9周主要完成4种大孔树脂静态吸附量和解吸率的测定：•精密称取已预处理好的4种干树脂各3份,每份1.5g,置100mL三角瓶中,精密加入样品液25mL后于恒温磁力搅拌机上,振摇2h,然后静置20h,使其达到饱和吸附,吸取上层液测定总黄酮浓度,按下式计算树脂饱和吸附量:饱和吸附量=[吸附前溶液总黄酮的量-吸附后溶液总黄酮的量]/树脂量(mg/g干树脂),取3次平均值。•将经静态饱和吸附总黄酮后树脂滤出,吸干表面水分,精密加入60%乙醇30mL后放于恒温磁力搅拌机上,振摇2h后滤出,测定洗脱液黄酮的浓度,计算洗脱率:洗脱率=[洗脱前溶液中总黄酮的量-洗脱后溶液中总黄酮的量]/洗脱前溶液中总黄酮的量×100%,取3次平均值。树脂类型AB-8DM-130HPD-100D-101吸附后的吸光度0.8690.9680.9270.996吸附后的溶液体积ml22222222吸附量90.5776.8778.1775.99洗脱后溶液的吸光度0.0780.1840.1620.196洗脱率87%73%76%71%注：洗脱后溶液的体积都为26ml表24种大孔树脂静态吸附量和解吸率•6.第10周完成内容:•（1）研究洗脱剂浓度对洗脱率的影响：精密称取处理好的AB-8型干脂7份,每份1.5g,分别置100mL三角瓶中,精密加入25mL样品液后于恒温磁力搅拌机上,按上面的方法使其达到饱和吸附,分离树脂,吸干表面水分。对应加入浓度分别为30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%的乙醇30mL后于恒温磁力搅拌机上,振摇洗脱2h后滤出,测定洗脱液中总黄酮浓度,按上面公式计算洗脱率,取3次平均值。乙醇浓度30%40%50%60%70%80%90%洗脱后体积（ml）26262626262626吸光度0.1210.1190.0900.0780.0750.0680.063洗脱率81%82%86%87%88%89%90%上图表明,60%～90%的乙醇洗脱率均在87%以上,考虑到节约成本及生产安全上的方便,本实验选用60%乙醇为洗脱剂。表3洗脱剂浓度对洗脱率的影响PH值345678910吸附后溶液体积ml1616161616161616吸附后溶液吸光度0.8070.8860.8890.8920.9180.9290.9530.983树脂的饱和吸附量101.298.4898.3898.2897.3897.0096.1795.13上表表明,上样液以pH4-5吸附量大。黄酮类化合物多具酚羟基,显弱酸性,当上样液pH偏大时,野菊花总黄酮有离子化趋势而不易被吸附。因此,上样液pH值应约偏酸。表4pH对AB-8型树脂吸附量的影响•（2）研究pH对AB-8型树脂吸附量的影响：精密称取已预处理好的AB-8型干树脂各8份,每份1g,置100mL三角瓶中,精密加入pH3,4,5,6,7,8,9,10样品液各20mL后于电动震荡机上,按上面的方法震荡,使其达到饱和吸附,吸取上层液测定总黄酮浓度,按上面的公式计算树脂饱和吸附量,取3次平均值。•1.在使用紫外分光光度仪时注意操作的正确性和严谨性，绘制标准曲线必须要比较准确;•2.在测量总黄酮的浓度时注意一定要稀释到一定的倍数，防止浓度过高测量不出正确的吸光度，无法计算其浓度;•3.在吸附试验和解析试验中,由于操作的局限性,吸附和解吸后可能会损失掉少量的溶液，所以在计算其吸附量和吸附率时注意测量好吸附后和解吸后溶液的体积，以免照成错误的结果;•4.在解吸和吸附的过程中为了减小溶液的损失量，最好在密闭的容器中进行搅拌，而且温度不能太高，导致样品溶液中的乙醇容易挥发，减少溶液的体积损失。实验中要注意以下几点：毕业设计（论文）后期工作安排•实验内容：AB-8型树脂对菊花总黄酮的动态吸附-洗脱性实验.研究上柱液浓度,洗脱剂,洗脱次数对AB-8型树脂动态吸附野菊花总黄酮的吸附率的影响。•整理实验数据,完成毕业论文的撰写.•准备好毕业答辩内容最后感谢宋红老师在此次毕业设计中对我的指导，欢迎各位老师对我的批评和指正。谢谢大家！