奶粉中双氰胺的检测方法(HPLC-UV和HPLC-MSMS法)

博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。本文采用Cleanert®MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil®HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。1实验部分1.1仪器、试剂与材料高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。双氰胺标准品（CAS：461-58-5；FW=84.08），Cleanert®MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil®HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。图1双氰胺分子式1.2实验步骤提取、净化：称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加入Cleanert®MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22µm滤膜，待测。1.3实验条件1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）：色谱柱：Venusil®HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）；流动相：10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；波长：220nm；进样量：10µl；柱温：30℃；流速：1mL/min。1.3.2LC-MS/MS法：（1）色谱条件：色谱柱：Venusil®HILIC（5μm，100Å，2.1*150mm）；流动相：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.2mL/min。（2）质谱条件：质谱仪：API4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。NHNH2NHN博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099表1双氰胺质谱信息药物名称监测离子对DPEPCECXP双氰胺85.1/68.1711041685.1/43.17110416注：带“____”的监测离子对为定量离子对。2结果与讨论2.1高效液相色谱法：2.1.1线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL，2.0µg/mL，5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2：表2双氰胺线性方程和定量限（HPLC法）名称保留时间线性方程相关系数最低定量限（S/N=10）双氰胺4.92minY=116.44X+3.26990.99970.1µg/ml2.1.2检测方法稳定性考察选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3：表3检测方法定性和定量稳定性考察考察（HPLC法）标号保留时间/min峰面积14.9301061.724.9331072.234.9301064.444.9291079.754.9301067.364.9341073.6RSD，%0.040.62博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099图2双氰胺0.5µg/mL标准溶液谱图（HPLC）图3定性定量稳定性考察谱图（HPLC法）2.1.3准确度和精密度选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4表410µg/g添加回收实验结果（HPLC法）平行1，%平行2，%平行3，%平均值，%RSD，%98.688.489.892.35.99图4奶粉空白谱图（HPLC法）图5奶粉10µg/g添加水平谱图（HPLC法）2.2LC-MS/MS法2.2.1线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液。分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表5：表5双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法）名称保留时间线性方程相关系数最低定量限（S/N=10）双氰胺3.15minY=8777.2X+7435.90.99935ng/mL2.2.2检测方法稳定性考察选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表6：博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099表6检测方法定性和定量稳定性考察考察（LC-MS/MS法）标号保留时间，min峰面积13.2938295023.3038795033.2538284043.3139982053.3037858063.30383810RSD，%0.651.922.2.3准确度和精密度选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。表7100ng/g添加回收实验结果平行1平行2平行3平均值RSD84.6%80.7%90.2%85.2%5.61%图610ng/mL双氰胺标准溶液质谱图图7奶粉空白质谱图