婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法(HPLC-MSMS法)

博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-MS/MS法）北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。针对婴幼儿奶粉中基质复杂的特点，本方法加大了净化材料的用量，以获得了更好的净化效果。采用天津博纳艾杰尔科技的新一代的Cleanert®MAS-QuChERS-双氰胺净化管（500mg/15mL，货号：MS-SQA02）和Venusil®HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。1实验部分1.1仪器、试剂与材料高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。双氰胺标准品（CAS：461-58-5；FW=84.08），新一代Cleanert®MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil®HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。表1双氰胺的信息名称结构式分子量CAS双氰胺NHNH2NHN84.08461-58-51.2实验步骤称取1g试样于50mL具塞离心管中，加2mL水，涡旋30s，加2ml乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈，重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次，得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min，将全部上清液加入新一代Cleanert®MAS-QuChERS管中（500mg/15mL），将MAS管上下晃动30s，然后涡旋30s后，8000r/min离心5min，取全部上清液（约10ml）于玻璃试管中，50℃下氮气吹干，加入1ml乙腈复溶，过0.22μm微孔滤膜，待测。注：1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂，防止加标瞬间发生蛋白沉淀；2.乙腈提取分4次，为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快，影响提取效果。1.3实验条件1.3.1LC-MS/MS法：博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099（1）色谱条件：色谱柱：Venusil®HILIC（5μm，100Å，2.1*150mm）；流动相：A：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）B：乙腈；进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.3mL/min。表2流动相梯度程序时间，minA%B%010900.450501.850501.9109071090*备注：本文曾尝试过多种C18色谱柱，对双氰胺没有保留，需要使用离子对试剂，但是无法用于LC-MS/MS；也曾尝试过MERCKZIC-HILIC柱，但是得到双氰胺的峰面积偏差较大，分析原因是其具有阳离子交换基团，对双氰胺有不稳定的死吸附。最后确定使用键合丙基酰胺的VenusilHILIC柱，以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留。（2）质谱条件：质谱仪：API4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：20.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：600.00。表3双氰胺质谱信息药物名称监测离子对DPEPCECXP双氰胺85.1/68.1711041685.1/43.17110416注：带“____”的监测离子对为定量离子对。2结果与讨论2.1LC-MS/MS法2.1.1双氰胺的LC-MS/MS图博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099XICof+MRM(2pairs):85.100/68.100DafromSample19(10ppb+_new)of20130128.wiff(TurboSpray)Max.8.9e4cps.0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min0.05000.01.0e41.5e42.0e42.5e43.0e43.5e44.0e44.5e45.0e45.5e46.0e46.5e47.0e47.5e48.0e48.5e48.9e4Intensity,cps2.25图4双氰胺10ng/ml标准溶液质谱图2.1.2实际样品基质加标的线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液；分别称取1g奶粉试样，添加一定量标准溶液，配制成含双氰胺为5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和200ng/mL的添加样品，按照上述提取、净化方法操作，所得净化液按照上述液质条件，依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表6：表6双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法）名称保留时间线性方程相关系数最低定量限（S/N=10）双氰胺2.25minY=3859.1X+236940.99002ng/g2.1.3准确度和精密度选取市售某婴幼儿奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。表710ng/g添加回收实验结果平行1平行2平行3平均值RSD82.5%83.5%89.3%85.2%4.31%博纳艾杰尔产品应用案例地址：天津经济开发区西区南大街179号邮编：300462电话：[phone]传真：[phone]Email：[e-mail]网址：客服：400-606-8099XICof+MRM(2pairs):85.100/68.100DafromSample31(10ppb-yye*_new)of20130128.wiff(TurboSpray)Max.1780.0cps.0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min0100200300400500600700800900100011001200130014001500160017001780Intensity,cps2.214.262.630.892.990.690.273.113.330.186.901.913.523.955.214.915.281.755.866.561.465.536.086.49XICof+MRM(2pairs):85.100/68.100DafromSample29(kb-yye*_new)of20130128.wiff(TurboSpray)Max.5760.0cps.0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time,min050010001500200025003000350040004500500055005760Intensity,cps2.21图5婴幼儿奶粉空白质谱图图6婴幼儿奶粉10ng/g添加水平的质谱图3产品订货信息产品名称规格型号货号新一代MAS-QuChERS-双氰胺净化管（填料量加大，更适合婴幼儿奶粉等复杂样品）500mg/15mL，50支/包MS-SQA02MAS-QuChERS-双氰胺净化管100mg/2mL，50支/包MS-SQA01VenusilHILIC液相色谱柱4.6*250mm，5μm，100ÅVH952505-02.1*150mm，5μm，100ÅVH951502-0微孔滤膜0.22μm，直径13mm,200/PkAM021320双氰胺对照品500mg/瓶，含量≥99.0%DCD-00011g/瓶，含量≥99.0%DCD-0002离心管50mL，带螺纹盖，25个/包LXG0050一次性注射器5mL,100/pkZSQ-5ML另有HPLC检测方法，请登录查看