在体小肠吸收实验

实验报告课程名称：_______________________________指导老师：________________成绩：__________________实验名称：_______________________________实验类型：________________同组学生姓名：__________一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验目的1、掌握大鼠在体肠管泵循环法研究吸收的试验方法。2、掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数（ka）和吸收半衰期t1/2的方法。二、实验原理1、研究药物消化管吸收试验方法：体外试验法、在体试验法和体内试验法。2、消化管吸收药物主要方式是被动扩散。这种形式的吸收不消耗能量，其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：-dQ/dt=DKS(C-Cb)/h（1）-dQ/dt=PSC/h=k’C（2）dQ/dt：分子型药物的透过速度D：药物在膜内的扩散系数k：药物在膜/水溶液中的分散系数C：消化管内药物浓度Cb：血液中的药物浓度h：膜的厚度式（2）说明药物透过速度属于表观一级速度过程：以消化液中药物量的变化率dx/dt表示透过速度，则：-dX/dt=KaXlnX=lnX0-KatlnX对取样时间t作图，可得一直线，从直线的斜率可求得吸收速度常数ka，其吸收半衰期t1/2为：t1/2＝0.693/Ka小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余的药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试液的体积，再根据测定的药物浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。三、实验仪器及试剂仪器：蠕动泵试剂：供试液（SD浓度：20ug/ml、酚红浓度：20ug/ml）、酚红液（酚红浓度：20ug/ml）、20%乌拉坦、生理盐水、0.1%NaNO2溶液、1mol/L盐酸、0.2mol/LNaOH、0.5%氨基磺酸铵(NH2SO3NH4)溶液、0.1%专业：________________姓名：________________学号：________________日期：________________地点：________________萘乙二胺溶液四、实验步骤1、循环试验的操作（1）恒温水浴调节：将水浴温度调节为37±0.5℃。（2）供试液的准备：量取75-80ml供试液加入循环装置的烧瓶中，置恒温水浴中预热至37±0.5℃。（3）生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。（4）蠕动泵流速的调节：调节流速为5ml/min和2.5ml/min。（5）大鼠麻醉：取大鼠一只称重，按1.1g/kg体重腹腔注射乌拉坦（浓度为20%）麻醉，并固定于固定台上。（6）小肠两端插管；沿大鼠腹部中线打开腹腔（约3cm），在12指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径为0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。（7）肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。（8）作成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，作成回路，开动蠕动泵，其流速为5ml/min。（9）取样：以5ml/min流速循环10min后，将流速调节为2.5ml/min时，立即自供试液烧瓶中取样两份（1ml和0.5ml各一份），分别作为SD和酚红零时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2ml，其后每隔15min亦按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。2、SD的测定取样品1ml置10ml带塞试管中加入1mol/LHCl5ml，摇匀，加0.1%NaNO21ml，摇匀，放置3min加0.5%NH2SO3NH41ml，摇匀，放置3min再加0.1%萘乙二胺2ml，摇匀，放置20min。在550nm的波长处测定吸收度。比色空白液:取酚红液1ml代替样品，其余操作与样品处理一致。3、酚红的测定取样品0.5ml置10ml带塞试管中，加0.2mol/LNaOH5ml，摇匀，在555nm的波长处测定吸收度。比色空白液：0.2mol/LNaOH五、实验数据记录和处理1、标曲回归方程：SD：y=0.0210x-0.0332(R2=0.9981)酚红：y=0.0153x+0.0082(R2=0.9973)2、SD和酚红样品浓度计算计算结果如下表：表1大鼠在体小肠吸收量的计算取样时间（h）SD酚红供试液体积ml剩余药量X（ug）lnXabs浓度ug/mlabs浓度ug/ml循环前20207515007.31300.38720.0100.32620.77172.221444.9927.2760.250.38019.6760.35422.60166.761343.5797.2030.50.36619.0100.35922.92866.071315.5557.1820.750.35418.4380.35122.40567.871339.3597.20010.34417.9620.35522.66767.371325.7057.1901.250.33317.4380.36823.51665.191279.3667.1541.50.32216.9140.36823.51665.391274.7777.1511.750.31116.3900.37223.77864.871257.3727.13720.30015.8670.36223.12466.891280.0437.155lnX～t作图，得一条直线，作图如下：图1大鼠在体小肠吸收后剩余药量对时间的曲线求得Ka=0.0528，t1/2=13.125h3、每小时吸收率计算每小时吸收率（%）=（零时间剩余药量-1h的剩余药量）/零时间剩余药量*100%=8.26%六、实验结果及分析实验结果详见实验数据记录七、讨论心得思考题：1、在体吸收实验法的特点是什么？在体试验法不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走,能避免胃内容物排出及消化管固有运动等的生理影响，对溶解药物是一种较好的研究吸收的试验方法。但本法只限于溶解状态药物，并有可能将其它因素引起的药物浓度的变化误作为吸收.。2、影响实验结果的主要因素有哪些？主要因素有：大鼠手术是否顺利，小肠内容物是否洗净，所取得药物量是否准确，蠕动泵的转速调节等。3、供试液中为什么要加入酚红？小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余的药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试液的体积，再根据测定的药物浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。P.