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附录二常用的培养基及试剂1、糖发酵管成分：牛肉膏5g磷酸氢二钠2g蛋白胨10g0.2溴麝香草本分蓝深液12ml氯化钠3g蒸馏水1000mlpH7。4制法：（1）葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装有一个倒置小管的小试管内，高压灭菌121℃15min。（2）其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml,高压灭菌121℃15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将糖溶液5ml加入100ml培养基内以无菌操作分装小试管。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36±1℃培养，一观观察2-3天，迟缓反应应需观察14-30天。附注：蔗粮不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。2、ONPG增减基成分：邻基粉β-D-半乳糖苷（ONPG）60mg（O-Nitropheny1-β-D-galactopyranoside）0．01%MpH7.5磷酸钠缓冲液10ml1%蛋白胨（pH7.5）30ml制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以滤过法除菌，分装10×75mm试管，每管0.5ml，用橡皮塞塞紧。试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物，满环接种，于36±1℃培养1-3h和24h观察结果。如有β-半乳糖苷酶产生则于1-3h变黄色，如无此酶则24h不变色。3、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）成分：磷酸氢二钾5g葡萄糖5g多胨7g蒸馏水1000ml制法：溶化后校正pH，分装试管每管1ml,高压灭菌121℃15min。甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-5天，哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：甲基工10mg溶于30ml95%酒精中，然后加入20ml蒸馏水。V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-4天。哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。加入6%。A萘酒精溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃4h再进行观察。4、西蒙氏柠檬酸盐培养基成分：氯化钠5G柠檬酸钠5g硫酸镁（MgS047H20）0.2g琼脂20g磷酸二氢铵1g蒸馏水1000ml磷酸氢二钾1g0.2%溴麝香草本分蓝溶液40mlpH6.8制法：先将盐类溶解于内，校正pH再加琼脂，加热溶化然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，高压灭菌121℃15min，放成斜面。试验方法：挑取少量琼脂增物接种，于36±1℃培养4天，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。5、丙二酸钠培养基成分：酵母浸膏1g氯化钠2g磷酸氢二钾0.6g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml磷酸二氢钾0.4g蒸馏水1000mlpH6.8制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水,分装每瓶100ml分别加入各种氨基酸。赖氨酸和鸟氨酸按0.5%加入，dl-氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小式管内管每0.5ml，上面滴加一层液体石蜡，高压灭菌115℃10min。试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±℃18-24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使增基变为黄色。对照管应为黄色。9、蛋白胨水（靛基质试验用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20g蒸馏水1000ml氯化钠5gpH7.4制法：按上述成分配制，分装小试管，高温灭菌121℃±15min。靛基质试剂：（1）柯凡克试剂将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中然后缓慢加入浓盐酸25ml。（2）殴-波试剂将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95%酒精95ml，然后缓慢加入浓盐酸25ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1-2天，必要时可培养4-5天。加入柯凡克试剂0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层呈红色。或加入殴-波试剂约0.5ml，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。附注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌咱鉴定后方可使用。10、尿素琼脂成分：蛋白胨1g0.4%本分红溶液3ml氯化钠5g琼脂20g葡萄糖1g蒸馏水1000ml磷酸二氢钾2g20%尿素溶液（后加）100mlpH7.2±0.1制法：先将尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，高压灭菌121℃±15min。冷至50-55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最后pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。11、氰化钾培养基成分：蛋白胨10g磷酸氢二钠5.64g氰化钠5g蒸馏水1000ml磷酸二氢钾0.225g0.5%氰化钾溶液(后加)20ml制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,高压灭菌121±1℃15min,放在冰箱内使其充分冷却。每100ml培养基加入0.5%氰化钾20ml（最后浓度为1：10000），分装于12×100mm灭菌试管，每管约4ml，立刻用灭菌橡皮塞塞紧。放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。试验方法：将琼脂培养物种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于KCN培养基，并另挑取1环接种于对照培养基。在36±1℃培养1-2天，观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2天细菌不生长为阴性（抑制）。附注：氰化钾是剧毒物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败主要原因是超过计划口不平，氰化钾逐渐分解产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。12、氧化酶试验试剂：（1）1%盐酸二甲基对苯二胺溶液，少量新鲜配制，于冰箱内避光保存。试验方法：（1）取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈粉红色，并逐渐加深。（2）以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。13、明胶磷酸盐缓液成分：明胶2g蒸馏水1000ml磷酸氢二钠4gpH6.2制法：加热溶解，校正pH，高压灭菌121±1℃15min。14、乳酸苯酚溶液成分：苯酚10g甘油2g乳酸（比重1.21）10g蒸馏水1000ml制法：将酚在水上加热溶解，然后加入乳酸及甘油用途：检验真菌形态。15、肉浸液肉汤成分：绞碎牛肉500g磷酸氢二钾2g氯化钠5g蒸馏水1000ml蛋白胨10g制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，加蒸馏水100ml，混合后放冰箱过液，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒纸过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量,加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4-7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，高压灭菌121±1℃15min。16、血琼脂成分：豆粉琼脂pH7.4-7.6100ml脱绺维羊血（或免血）5-10ml制法：加热溶化琼脂，冷却50℃，以无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀、倾注平板。变可分装灭菌试管，置成斜面。变可用其他营养丰富的基础培养基配制血液琼脂。17、营养琼脂成分：蛋白胨10g琼脂15-20g牛肉膏3g蒸馏水1000ml氯化钠5g制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内。加入15%氢氧化钠溶液约2ml，校正pH至7.2-7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，高压灭菌121±1℃15min。附注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面，如用于菌数计数，琼脂量为1.5%，如作成平板或斜面，则应为2%。18、营养牛肉汤成分：蛋白胨10g氯化钠5g牛肉膏3g蒸馏水1000mlpH7.4制法：按上述成分配合，溶解后校正pH、分装烧瓶，每瓶225ml高压灭菌121±1℃15min。19、乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g蒸馏水1000ml乳糖10gpH7.4制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10ml，并放入一个小试管，高压灭菌121±1℃15min。附注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。20、乳粮发酵管成分：蛋白胨20g0.04%溴甲酚紫水溶液25ml乳糖10g蒸馏水1000mlpH7.4制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个小试管，高压灭菌121±1℃15min。附注：（1）双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。（2）30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。21、缓冲蛋白胨水（BP）成分：蛋白胨10g磷酸二氢钠1.5g氯化钠5G蒸馏水1000ml磷酸氢二钠（含12H2O）9gpH7.2制法：配好后以大烧瓶装，高压灭菌121±1℃15min。临用时以无菌操作分装，每瓶225ml。附注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。22、氯化镁孔雀绿增菌液（MM）甲液：胰蛋白胨5g磷酸二氢钾1.6g氯化钠8g蒸馏水1000ml乙液：氯化镁（CP）40g蒸馏水100ml丙液：0.4%孔雀绿水溶液制法：分别按上述成分配好后，高压灭菌121±1℃15min备用。临用时取甲液90ml，乙液9ml，丙液0.9ml，以无菌操作混合即可。附注：本培养基变称Rappaport（R）增菌液。23、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）基础培养基：多胨或月胨5g硫代硫酸钠30g胆盐1g蒸馏水1000ml碳酸钙10g碘溶液:碘6g蒸馏水20ml碘化钾5g制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100ml。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，高压灭菌121±1℃15min备用。临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml，0.1%煌绿溶液1ml。24、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）成分：蛋白胨5g磷酸二氢钾4.5g乳糖4gL-胱氨酸0.01g亚硒酸氢钠4g蒸馏水1000ml磷酸氢二钠5.5g制法：将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900ml蒸馏水中，加热煮沸，俊冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mml蒸馏水，加热煮沸，俟冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸氢氧化钠溶液1.0ml，分装灭菌瓶中，每瓶100ml，pH应为7.0±0.1,1%L-胱氨酸氢氧化钠溶液。配称：称取L-胱氨酸0.1g或DL-胱氨酸0.2g，加1NNaOH1.5ml，使溶解再加入蒸馏水8.5ml即成。25、GN增菌液成分：胰蛋白胨20g甘露醇2g葡萄糖1g柠檬酸钠5g去氧胆酸钠0.5g氯化钠5g磷酸氢二钾4g蒸馏水1000mlpH7.0制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH，分装每瓶225ml，高压灭菌115℃15min。26、肠道菌增菌肉汤成分：蛋白胨10g磷酸二氢钾2g葡萄糖5g煌绿0.015g牛胆盐20g蒸馋水1000ml磷酸氢二钾8gpH7.2制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH，分装每瓶30ml，高压115℃15min。27、亚硫酸饿琼脂（BS）成分：蛋白胨10g煌绿0.025g牛肉膏5g柠檬酸饿铵2g葡萄糖5g亚硫酸钠6g硫酸亚铁0.3g琼脂18-20g磷酸氢二钠4g蒸馋水1000mlpH7.5制法：（1）将前面5分钟成分分别溶解于300ml蒸馏水中。（2）将柠檬酸饿铵和亚硫酸钠另用50ml蒸馏水溶解。（3）将琼脂于600ml蒸馏水煮沸溶解，冷至80℃。（4）将以上三液合并，补充蒸馏水至1000ml，校正pH，加0.5%煌绿水深液5ml，摇匀，冷至50-55℃，倾注平皿。附注：此培养不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。28、DHL琼脂（deoxycholatehydrogensulfidelactoseagar）成分：蛋白胨20g硫代硫酸钠2.3g牛肉膏3g柠檬酸钠1g乳糖