噬菌体的分离和纯化及效价测定

实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定一、噬菌体的分离1、制备菌悬液2、增殖培养（选择湖水和在实验室放置了5天的阴沟污水同时进行分离噬菌体）湖水过滤后取200ml加在l00m13倍浓缩的液体培养基的三角烧瓶中，并加入2m1宿主菌悬液，37℃振荡培养24h。在实验室放置了5天的阴沟污水同上。实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定3、制备裂解液将以上混合培养液4000r/min离心15min。用无菌滤器将上述离心上清液加入到无菌试管中以制备噬菌体裂解液。4、噬菌体的检测在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上加入0.1ml大肠杆菌菌液，用无菌玻璃涂棒将菌液均匀的涂布在培养基表面上实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定待平板上菌液干后，分散滴加数小滴滤液于平板菌层上面，置37℃培养过夜。无噬斑出现。从湖水和在实验室放置了5天的阴沟污水中都为出现噬菌体。实验一、噬菌体的分离和纯化及效价测定二、实验总结我们组共提取噬菌体5次。从阴沟污水中提取了3次未分离到噬菌体。分析可能外界温度太低，阴水沟中噬菌体及其微量。尝试让其在常温下繁殖几天，并采取更换噬菌体的来源即从湖水中分离。仍未分离到。实验二、微生物固定化培养技术本实验选择藻酸钙凝胶包埋法固定化酵母菌，有关不同的胶球大小的研究一、酵母菌的培养我们采用多加了10%的葡萄糖的麦氏培养基培养酵母菌。酵母菌悬液达到！个/ml二、制备固定化胶球将无菌海藻酸钠溶解液与培养至酵母菌菌悬液按（1：3-4）比例混合均匀，选用不同针头型号的注射器，将混合液缓慢的逐滴滴入0.2mol/l的无菌CaCl2溶液中，静止后，出现胶球。实验二、微生物固定化培养技术三、培养将滴好的胶球用无菌去离子水清洗后，将大小各600个胶球分为两组作为平行组。各将300个胶球放入多加了10%的葡萄糖100ml麦氏培养基中密封培养。四、测定1、细胞数量的测定每天取培养的胶球3粒，分别测定其直径并计算胶球体积，加入一定体积的5%的柠檬酸钠溶液溶解胶球并用血球记数板在显微镜下计算细胞数量。实验二、微生物固定化培养技术2、酿酒酵母发酵液的酒精含量的测定。发酵液的体积(ml)蒸馏到的酒精(g)发酵液蒸馏到的酒精(g/ml)大胶球11101.931.75大胶球2901.892.10小胶球1901.731.92小胶球2811.832.26实验二、微生物固定化培养技术五、总结本实验操作两次。第一次未蒸馏到酒精。分析原因：第一次酒精发酵时，每天计细胞数量，导致很多的氧气进入，影响了酒精发酵。