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实习报告一、实习目的及要求掌握寄生虫完全剖检法，通过剖解采集家畜的全部寄生虫标本并进行鉴定和计数，为诊断和了解蠕虫病的流行情况，防治和研究寄生虫病提供科学依据。二、实习器材器材：解剖刀、解剖剪、镊子、手术剪、剪刀、标本瓶、搪瓷盘、量杯、胶头滴管、烧杯、载玻片、盖玻片、水桶，培养皿、鸡笼、饮水桶、饲料桶、托盘、塑料袋若干、塑料薄膜、显微镜、脸盆、挑虫针、广口瓶、玻璃棒、麦氏计数器、量筒。试剂：生理盐水、酒精（70%、80%、90%、95%、100%）1号药（地克珠利溶液），2号药（盐酸氨丙啉磺胺喹噁啉钠可溶性粉）、消化液（浓盐酸0.7ml，胃蛋白酶0.5-1g，蒸馏水100ml）。三、实习内容1、山羊的剖检（1）在对山羊剖解前，对其体表应作认真检查和外寄生虫的采集工作。观察体表的被毛和皮肤有无瘢痕、结痂、初学、皲裂、肥厚等病变。看到有体外寄生虫时（虱、虱蝇、蜱、螨、皮蝇幼虫等），用镊子轻轻夹取放入标本瓶内，将虫体进行饥饿处理，以达到制作标本的要求。虱卵应连毛取下防御瓶内或保存液内保存。在皮肤患部的干硬痂皮处用小刀刮取病部与健康皮肤交界处的皮屑，至轻微出血为止，将此皮屑放在空瓶内或保存液内保存。在毛囊内，皮下形成米粒大小的结节，可将结节切开取其内容物涂片镜检，放在70%酒精内固定保存。(2)从山羊的肛门处取出少量粪便进行虫卵检查、计数，初步确定该畜体内寄生虫的寄生情况，对以后寻找虫体时提供帮助。利用麦氏计数器计算粪便中虫卵的类型和数量。取2g山羊粪便，放入小烧杯内，加入饱和食盐水58ml，用玻璃棒将粪球碾碎，时之成为均匀的粪液。用胶头滴管吸取粪液注入麦氏计数室内，放到显微镜下，静置1-2分钟。在显微镜下1cm2内数虫卵总数，求出两个刻度室内虫卵的平均数，乘以200即为每克粪便中的虫卵数。(3)对山羊进行颈静脉的打空气针致死。将山羊的躯干、脖子和四肢的皮肤一起剥下，观察身体各部淋巴结和皮下组织有无虫体寄生。头部从枕骨后方切下，首先检查头部各个部位和感觉器官。然后鼻中隔的坐侧约0.3cm处的矢状面纵向锯开头骨，撬开鼻中隔进行检查。检查鼻腔鼻窦是否有虫体，然后再水肿冲洗，沉淀后检查沉淀物，看是否有寄生虫。打开脑腔和脊髓管后先用肉眼观察有无啕蚴，羊鼻蝇蛆寄生。再切成薄片压薄镜检，检查有无微丝蚴寄生。肉眼观察眼球，再将眼结膜及球结膜在水肿刮取表层，水洗沉淀后检查沉淀物，嘴鸥剖开眼球，将眼房水收集在平皿内，在放大镜下观察是否有丝虫的幼虫、囊尾蚴、吸吮线虫寄生。检查唇、颊、牙齿间、舌肌、咽头，有无囊尾蚴、蝇蛆、１筒线虫等寄生。(4)沿腹中线剪开山羊腹部，再向上，沿靠近胸骨的肋骨剪开，打开胸腔。在直肠和肛门处做1次结扎并剪开，剪断食管，整个取下食管、胃、脾、小肠、胰脏和大肠。小心剥离肝脏与腹腔壁的粘膜连接，一同取下肝脏和胆囊。将胃、小肠、大肠之间剪开分开放置。将食道剪开，观察内、外表面是否有美丽筒线虫及住肉孢子虫。检查胃壁外面。先剪开瘤胃，倒出内容物，检查吸附在胃黏膜上的前后盘吸虫。然后将皱胃的内容物倒入瓷盆内，将其翻过来用生理盐水充分洗净，再用生理盐水反复冲洗，最后将沉渣倒入大培养皿中检查是否有捻转血矛线虫、奥斯特线虫、马歇尔线虫等，如发现虫体，用挑虫针挑出放于70%酒精中保存。检查肠系膜血管是否有血吸虫，并将肠系膜淋巴结切开检查有无舌形虫的幼虫，注意肠系膜上是否有细颈囊尾蚴的寄生，如有，可取下放入70%酒精中保存。沿肠系膜对侧长轴剪开肠壁，从十二指肠开始，边剪开边检查，并把肠内容物接搪瓷盘内。当发现有绦虫时，应轻轻的用剪刀尖紧贴肠壁，避免剪断虫体。其次应留心前端细小的头节不可拉断或是去，要小心的刮下完整头节，如果头节牢固吸附在宿主肠壁上则须连同肠壁组织一起取下，用水洗净（不超过5min）放入70%酒精中保存。将小肠的内容物用水冲洗并沉淀，倒去上清液，用玻璃皿仔细观察是否有仰口线虫、类圆线虫等小型线虫。将大肠的内容物倒入脸盆内，翻转大肠，用水冲净，再将内容物反复冲洗、沉淀，倒去上清液，将沉渣用玻璃皿检查，看是否有毛首线虫、食道口线虫等寄生。另外应注意检查肠壁上有无栗粒大道豌豆大的结节（食道口线虫引起的结节），将采集到的虫体组织放到70%酒精中保存。在肝脏表面先检查是否有细粒棘球蚴，然后去掉胆囊，检查内部，并切开胆管，检查是否有肝片吸虫或矛形双腔吸虫的寄生。然后将肝撕成小块用清水反复冲洗至上部液体清凉为止，倒去上清液，将沉渣用培养皿检查有无虫体。胰脏的检查方法与肝脏相同，检查是否有胰阔盘吸虫。(5)剪断气管，玻璃肺脏、心脏与胸腔的粘膜粘连，一同取下心肺。先观察肺脏表面是否有细粒棘球蚴的寄生，如有则应连同肺组织一起剪下放于酒精中。再剪开支气管及大支气管，检查是否有大型肺线虫（网尾线虫）。然后检查小支气管或细致地撕开肺的边缘部分看是否有小型肺线虫（原圆线虫等）。将心脏的两个心室心房均从侧面剪开观察房室腔内或内肌肉表面上是否有丝虫的寄生。2、虫制成装片标本(1)虫体的固定：大部分绦虫寄生于肠管中，并以头节牢固的附着于肠壁上。采标本时为了保证虫体的完整，切勿用力猛拉，而应将附着有虫体的肠段剪下，连同虫体浸入清水中，5～6小时后，虫体会自行脱落，体节也自行伸直。将收集到的完整的绦虫（有头节）虫体用生理盐水洗，也可将其放入含1%氨基甲酸乙酯的生理盐水中一定时间，使虫体松弛充分伸展。用于制作片标本的虫体可以保存在劳氏液和70%酒精内，用于瓶装陈列的虫体要保存在5%福尔马林溶液中。由于绦虫长，易于断裂、易于相互缠结要将虫体排列在玻璃板上，用线扎起来，在将虫体缠绕在玻璃瓶上。在大烧杯中，先放入固定液浸润的滤纸一张，提取虫体后端，使虫体由头节始逐步放落在滤纸上，加盖一层湿滤纸；再以同样操作，全部放好所有虫体，将固定液轻轻注满烧杯。不太长的虫体，提住虫体后端，悬空伸长，逐步地浸入固定液内固定24h以上取出。２(2)虫体制片：需要制片时，可将虫体平方与载玻片上，加盖一张载玻片，并稍加压力吧虫体压瓶至适当薄度后，放在培养皿内，加入10%福尔马林液固定之。一般固定数小时，较大型的虫体要在1天以上。固定后，翻开盖在上面的玻璃片把虫体标本慢慢取下，置于盛有5%福尔马林的玻璃瓶中固定保存。绦虫的幼虫可固定保存于巴氏液中。挑选绦虫的头节（若干颈节）、虫体前1/3的成熟节片及虫体后部的孕卵节片。一般绦虫头节和节片标本固定1～2天后，经过水洗即可染色。福尔马林固定的标本，必须在染色前流水充分水洗，才能着色均匀。保存于70%酒精中，则先后将虫体移经50%和30%酒精中各1h，再移入蒸馏水中。将苏木素染液加蒸馏水10～15倍，使呈浓葡萄酒色。将以上虫体移入此稀释的染液内，染色过夜。取出虫体后，先用蒸馏水除去多余的染色液，将绦虫剪成3～5节片（小于盖玻片长宽），再按照下表分别进行脱水、褪色、透明：30%酒精45min50%酒精45min70%酒精脱水2次，每次15min酸酒精（80%酒精100ml+2ml盐酸）数秒-数分钟（虫体成淡粉红色）80%酒精30min90%酒精30min95%酒精60min100%酒精脱水3次，每次15min二甲苯1h将透明的虫体放于载玻片上，滴1~2滴中性树胶，加盖玻片封固，待干，即成。封固时切忌留有气泡在内。虫体或虫段制出来的标本，应达到上下左右排列对称，标本虫体宜放置载玻片的右1/3与中1/3交界处，便于在玻片左端贴标签。(3)剖检记录和标签的书写：进行蠕虫剖检时，为了避免产生混乱和错误，应及时欧诺个铅笔和白色硬纸制成的标签上注明动物的种、剖解编号和器官名称，并将写好的标签投入盛有该器官的器皿中。搜集到的虫体，在已固定装瓶，但还没有经过鉴定的时候，应当向瓶内放入标签，标签正面说明动物的种、性别、年龄、解剖编号、虫体寄生部位和初步鉴定结果。反面注明解剖地点、日期、解剖者姓名、虫体数目。3、鸡抗球虫药的效力测定实验(1)全部选用20日龄左右的健康公雏，以防因公母雏鸡的增重速度不同，而影响增重率指标。在实验用雏出壳后就应加强饲养管理，防止雏鸡自然感染球虫。试验场地、饲养笼具要做好消毒和杀灭卵囊工作。工作人员进出亦应严格消毒，防止人为地传播卵囊。供试鸡使用前应绝对禁用含有抗球虫活性药物的饲料，直至试验结束。(2)试验开始时，分别称量雏鸡的个体中，其差别应在5-8g以内，尽量挑选体重接近的，以10只为1组，每组总体重应基本一致。根据试验药物的多少及试验药物的多少及试验剂量要求分别设2个给药组，一个感染不给药组（感染对照组），一个不感染不给药组（空白对照组），每个实验组的雏鸡分别单独饲养在清洁的铁笼内，垫好粪托盘，并做好标记。(3)由于柔嫩艾美尔球虫卵囊易于纯分离，且致病力最强，故一般抗球虫药药效试验的人工接种均用柔嫩艾美尔球虫卵囊。取保存在重铬酸钾内的有感染能力的孢子化卵囊，离心去掉重铬酸钾溶液，然后加水稀释，进行卵囊计数。实验组每只雏鸡接种量为5-10*104个卵囊，以0.2-0.5ml为宜，一般在给饲前用习惯经过口腔将卵囊液注入嗉囊。３（4）试验期前后应做好详细记录，作为药效试验的原始资料。总的试验期为8天，以人工接种当天为第0天，以后每天观察试验雏鸡数次，记录精神、食欲、粪便等状况，根据不同实验组分别给足相应的饲料和饮水。第3天开始检查粪便，每天数次，记录各试验组血粪堆数（仅有血丝不算），直至第8天扑杀剖检为止。在第3天之后死亡的雏鸡应逐只进行称重、剖检，查明死因，并做好详细记录。若肠粘膜刮取物镜检发现裂殖体（子），配子体，卵囊应判为球虫病死亡。从第5天开始收集每组试验鸡的粪便，几种分别检查出每组雏鸡排出的卵囊总数。收集粪便和检查时应特别注意防止各试验组互相混杂。第7天卵囊数不数，直接在第8天早上将所有的鸡分别进行扑杀剖检。一般先扑杀不感染不给药组，然后为给药组，最后是感染不给药组。剖检器具要分开，每组一套或组间进行清洗消毒。剖检前应逐只称重，剖检后重点检查盲肠病变，根据病变标准进行评分。然后将盲肠按试验组用消化液进行消化制成匀浆，来计数盲肠中的卵囊数。试验期间一定要加强饲养管理，保证不感染不给药组不被球虫自然感染，否则试验即告失败。1号药为液体，每组加0.2ml与水中，每天加药1次。2号药为白色粉末，每天取2g,加4L水混合，分给4个实验组。四、结果1、判定方法：错误!未找到引用源。、相对增重率得分：以不感染不给药组在试验期间每只鸡的平均增重为100%，算出其他各组每只鸡的平均增重比分率，再*100。错误!未找到引用源。、存活率得分、以不感染不给药组的存活率为100%，算出其他各组试验鸡的存活率，再*100。错误!未找到引用源。、血粪扣分：分别对各组实验鸡生前最严重的一天血粪进行积分，改天每只鸡平均血粪堆数在1-3.9堆，则计1-3.9分，4堆及以上的计4分，一直无血粪的计0分。得出的分数再*5。错误!未找到引用源。、病变扣分：以各试验组平均每只雏鸡的病变积分*5病变积分标准无卵囊盲肠正常记0分有卵囊盲肠粘膜稍增厚，有少量散在性初学或少量肠芯记1分有卵囊盲肠壁增厚，有明显的血液或血样肠内容物记2分有卵囊盲肠粘膜鞥后，有大量的血凝块或明显的血样肠芯记3分死亡外观盲肠呈酱色，明显肿大，有卵囊，内容物血样记4分错误!未找到引用源。、卵囊扣分：把剖检后消化的盲肠匀浆内卵囊数与该组第5-8天粪中卵囊数相加，分别求出每组每只鸡的平均卵囊数，按下列标准扣分４每只鸡平均卵囊数（*106）该组卵囊扣分0-0.100.1-1.011.0-2.052.0-5.0105.0-6.0156.0-10.02010.0-11.03011.040ACI(抗球虫指数)=（相对增重率得分+存活率得分）-（病变扣分+卵囊扣分+血粪扣分）ACI意义120不宜用作抗球虫药160控制球虫感染不满意160-180只有中等的控制球虫感染作用180控制球虫感染满意，用作抗球虫药药效好2、实习结果如下表：体重统计表组别攻虫前体重（g）攻虫后体重（g）平均增重（g）相对增重率（%）相对增重率得分非感染非免疫组67.01±16.59105.96±29.4838.95±19.8010