南医大药物分析第03章药物的杂质检查

第三章药物的杂质检查1.认识药物杂质来源，纯度要求;2.认识药物分析中杂质检查的意义;3.掌握药物中一般杂质检查的主要项目及检查方法;4.掌握药物中杂质限量的计算方法;5.了解药物特殊杂质的概念及其检查方法。基本要求：一、药物的纯度（puritiesofdrugs)指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。第一节药物的杂质及其来源杂质（forin、impurities）是指：1.有毒副作用的物质;2.本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质;3.本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质。二、药物中杂质的来源与种类（一）杂质来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物；（2）试剂、溶剂、催化剂类；（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质。例：1）NaCl注射液（海盐、井盐、岩盐或高温精制而得）原料中含有溴化物、碘化物、硫酸盐、钡盐、钾盐、镁盐、砷盐和重金属等；2）解热镇痛药阿司匹林，是由水杨酸乙酰化制得。乙酰化不完全或贮存过程中水解都可能产生水杨酸；3）阿片提取吗啡，有可能引入罂粟碱及其他生物碱；4）从植物中提取盐酸小檗碱，可能含有药根碱、巴马汀等其他生物碱。在药物生产过程中引入杂质的途径为A.原料不纯或部分未反应完全的原料造成B.合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C.需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质2.贮藏过程中产生由于贮存过程，包装或保管不善，在外界条件（如温度、湿度、日光、空气和微生物等）的影响下，水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等。易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等；例：阿司匹林---水解为水杨酸和醋酸；阿托品---水解为莨菪醇和消旋莨菪酸；青霉素---遇碱易水解为青霉酸,受热可进一步分解为D-青霉胺和青霉醛而使青霉素失效。易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键例：麻醉乙醚醛+过氧化物二巯基丙醇二硫化物日光、空气、水分氧化同分异构：同质异晶（立体异构、旋光异构、几何异构—顺反式）（光照、温度、湿度和酸度的影响）例：四环素差向四环素（毒性高、活性低）（效力降低至原来1/27）重酒石酸去甲肾上腺素（左旋）（血压过低或抗过敏性休克）酸性温度右旋体（二）杂质的分类药物中的杂质按来源分为1.一般杂质：在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。2.特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。四、药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。例.临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是A.所含杂质的生理效应不同B.所含有效成分的量不同C.所含杂质的绝对量不同D.化学性质及化学反应速度不同E.所含有效成分的生理效应不同三、杂质的限量指在不影响药物的疗效和不发生毒性的前提下，药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几（%）或百万分之几（ppm）来表示。杂质量≤杂质限量＜杂质量药品合格药品不合格（一）、药物的杂质检查法1.对照法—限量检查法（LimitTest）特点：不需知道杂质的准确含量方法：取一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理，如显色或产生沉淀等，是否超过限量（比色或通过比较反应的结果，来确定杂质含量比浊）。2.灵敏度法方法：系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，观察有无反应出现，以不出现反应为合格。特点：不需对照品3.比较法（含量测定法）方法：测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等。特点：准确测定杂质的量，不需对照品*（二）、杂质限量的计算供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量供试品量标准溶液浓度标准溶液体积杂质限量%100ScVL6ppm10ScVLL(%）P101示例一、茶苯海明中氯化物的检查：加热、过滤取滤液25ml对照品：c:10g/ml,V:1.5ml6CVL(%)=100S10101.5100250.302000.04S：0.30gH2O50ml+NH33ml+NH4NO36ml+AgNO325ml定容至200ml•检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（1g/ml的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001％，应取供试品的量为A.0.20gB.2.0gC．0.020gD.1.0gE.0.10gg0.2%100%0001.01012%1006LcVS已知：c＝1g/ml＝1×106g/mlV＝2mlL＝0.0001%检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC．2mlD.1mlE.20mlml110100.1101066cSLV杂质的常用检查方法（一）化学方法*（二）色谱方法药物中的有机杂质，其结构、性质和药物相近，利用药物和杂质的色谱性质差异，分离和检测杂质和药物。1.薄层色谱法（1）杂质对照品法：适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。根据杂质限量，取供试品溶液和一定浓度和一定浓度的杂质对照品溶液，分辨点样于同一薄层板，展开、斑点定位。例：1：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查2：盐酸环丙沙星中氟喹啉酸的检查3：盐酸阿米洛利中有关物质的检查（2）供试品溶液自身稀释对照法：适用于杂质结构不确定，或者没有杂质对照品；限于杂质斑点颜色与主分斑点颜色相同或相近情况。例：1：吡罗昔康有关物质的检查2：盐酸马普替林中有关物质的检查（3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法：药物存在多种杂质，若已知杂质有对照品，则采用杂质对照品法；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，则同时采用供试品溶液自身稀释对照法。例：1：盐酸黄酮哌酯易水解的有关物质检查（4）对照药物法：无合适的杂质对照品，或供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可采用与供试品相同的药物作为对照。例：1：马来酸麦角新碱中有关物质的检查2.高效液相色谱法HPLC分离效能高、专属性强、检测灵敏性好，可以准确地测定各组分的峰面积，广泛应用于杂质检查。（1）外标法：适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制的情况。方法：配制杂质对照品溶液和供试品溶液，分别取一定量注入色谱仪，测定杂质对照品溶液和供试品溶液中杂质峰的响应，按外标法计算杂质的浓度。优点：准确度高不足：需要杂质对照品，这个比较困难（2）加校正因子的主成分自身对照法：适用于已知杂质的控制；以主成分为对照，用杂质对照品测定杂质的校正因子。方法：将杂质对照品和药物对照品配制成一定浓度的测定杂质校正因子的溶液，进行色谱分离、分析后，按内标法求出杂质相对于主成分的校正因子（f）例：1：红霉素中红霉素B、C杂质的检查2：甲基多巴中有关物质的检测f=（AS/CS）/(AR/CR)AS为药物对照品的峰面积AR为杂质对照品的峰面积CS为药物对照品的浓度CR为杂质对照品的浓度CX=AX/(A`S/C`S)·fAX为供试品杂质的峰面积A`S为对照品溶液药物主成分的峰面积CX为杂质的浓度C`S为对照溶液中药物的浓度（3）不加校正因子的主成分自身对照法：适用于没有已知杂质的控制。该法适用于单一杂质含量较少，无法得到杂质对照品、杂质结构与主成分相似，即杂质与主成分的响应因子基本相同的情况下使用。（四）面积归一化法：适用于供试品中结构相似、相对含量较高且限度范围较宽的杂质含量粗略考查。3.气相色谱法4.毛细管电泳法（三）光谱方法依据药物和药物中杂质对光选择吸收性质差异进行的。1、紫外-可见分光光度法2、红外分光光度法（四）其他方法1、热分析法2、酸碱度检查法，利用杂质与药物酸碱性差异，可用酸碱滴定法、指示液法和pH测定法3、物理性状检查法第二节一般杂质检查＊一般杂质检查规则《药品检验操作标准》规定：1.遵循平行操作原则（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作2.正确的取样及供试品的称量范围1g不超过±2%，＞1g不超过±1%3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份一、氯化物检查法（一）原理-对照法白色浑浊药物：AgClAgNOCl3HNO3白色浑浊）（对照：AgClAgNO,NaCl3HNO3Vc（二）检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。（三）测定条件1.标准NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含50～80g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液5～8ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。（1）加速AgCl浑浊的形成；（2）产生较好的乳浊；（3）避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。3.试剂：硝酸银5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。7.平行操作原则（四）干扰及排除1.若供试品有色，需经处理后方可检查。（1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵（黄色）中氯化物的检查。一份+AgNO31ml过滤滤液+NaCl标准液50ml(对照溶液)一份+AgNO3（采用药典方法）10minH2O（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。4.有机药物中有机氯杂质的检查，需破坏结构方可检查。（1）加热水解法：氯代脂烃或氯在环的侧链供试品+H2O+NaOHNaCl，然后依法检查加热30分钟例：二羥丙茶碱的氯化物二、硫酸盐检查法（一）原理对照法白色浑浊药物：4HCl224BaSOBaClSO白色浑浊）、（对照：4HCl242BaSOBaClSOKVc（二）测定条件1.标准K2SO4溶液100g/ml，50ml溶液中含0.1～0.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1～5ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行（除去BaCO3、Ba3(PO4)2，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。3.试剂：氯化钡5.比浊方法：同置于黑色背景上自上向下观察4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。（三）干扰及排除例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是:A.标准氯化钡B.标准醋酸铅溶液C.标准硝酸银溶液D.标准硫酸钾溶液E.以上都不对三、铁盐检查法1.原理对照法2.FeNH4(SO4)2·12H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液红色药物：