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1课题2：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（学案）【学习目标】研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定【重、难点】对土样的选取和选择培养基的配制。对分解尿素的细菌的计数。【自主学习】阅读课本P21－26，完成下列空格一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养的微生物，加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如：为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。二、实验设计关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3．样品的和微生物的与观察将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250mL)，充分摇匀，吸取上清液ml，转移至盛有ml的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取ml进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。4．细菌的计数2当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三、思考与讨论1、如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？2、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？四、结果分析与评价1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱性，PH。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。3、在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变，说明该细菌能够。五、典例分析【例1】分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别和。(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进行选择的?【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是()A．未接种的选择培养基B．未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基C．接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基D．接种了的选择培养基类型一选择培养基的配制类型三设置对照类型二统计菌落数目