动物组织中五氯酚残留量测定的标准操作程序气相色谱质谱法

十、动物组织中五氯酚残留量测定的标准操作程序气相色谱质谱法1适用范围及检出限本方法规定了猪肉、鸡肉等动物组织中五氯酚的气相色谱—质谱仪测定。本方法适用于猪肉、鸡肉等动物组织中五氯酚含量的测定。当动物肌肉取5.0g，最终定容0.5mL时,本方法五氯酚定量限为1.0μg/kg，检出限为0.3μg/kg。2原理猪肉、鸡肉等动物组织加入内标后，经5%三氯乙酸沉淀，正己烷-乙酸乙酯溶液提取，SLC柱净化，乙酸酐-吡啶溶液衍生成五氯苯乙酸酯，气相色谱-质谱法测定，内标法定量。3试剂3.1SLC固相萃取柱：500mg/6mL（杭州福裕科技服务有限公司）。3.2正己烷：色谱纯。3.3乙酸乙酯：色谱纯。3.4乙酸酐：分析纯。3.5吡啶：分析纯。3.6丙酮：色谱纯。3.7无水硫酸钠：分析纯。3.8五氯酚标准储备液（100μg/mL，甲醇）：购自农业部环境保护科研监测所，编号GSB05-1850-2008，0-4℃冰箱放置，有效期1年。3.9五氯酚标准使用液（1.0μg/mL）：取0.25mL标准储备液用色谱纯丙酮稀释25mL，得到1.0μg/mL使用液，放置4℃冰箱。3.102，4-二溴酚内标液(10.0μg/mL)：称取2，4-二溴酚标准品0.05g，用色谱纯丙酮溶解定容到50mL，得到1.0mg/mL内标储备液，经丙酮逐级稀释至浓度10.0μg/mL，放置4℃冰箱。3.11提取液:乙酸乙酯：正己烷=1：1（V:V）。3.12衍生提取液:乙酸乙酯：正己烷=1：4（V:V）。3.13衍生化试剂:乙酸酐：吡啶=1：1（V:V）现配现用。3.140.2mol/L碳酸钾溶液:称取2.76g碳酸钾溶于重蒸水,并定容于100mL。4仪器与耗材4.1气相色谱质谱仪。4.2匀浆机（IKA）。4.3氮吹仪。4.410mL具塞玻璃刻度试管、离心管。4.5固相萃取仪。4.6冷冻离心机：最大转速12000rpm以上。5色质谱条件5.1DB-5MS毛细管色谱柱：30m×0.25mm（内径）×0.25μm（膜厚）。5.2进样口温度：230℃。5.3柱温：初温80℃，保持2min，以10℃／min升至250℃，290℃后运行4min。5.4载气：氦气，纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min。5.5进样量：1μL。5.6电离方式：EI源，70eV。5.7离子源温度：230℃。5.8进样方式：不分流进样。5.9五氯苯乙酸酯标准保留时间及监测离子见附录表1，总离子流图见图1。6样品处理6.1样品采集和保存采集猪肉、鸡肉等动物组织样品（肥瘦各半），用绞肉机绞碎后装塑料瓶内后-20℃冻藏，检测前解冻。6.2提取称取5.00g样品入离心管内，加入30μl10.0μg/mL2，4-二溴酚内标液、20mL5%三氯乙酸溶液，匀浆1min,再加入10mL提取液，斡旋提取2min，然后0℃12000rpm离心4min，吸出上层有机相入具塞试管内，在60℃水浴内氮气吹干，加入2mL乙腈超声溶解，3000rpm离心4min，乙腈相待净化。6.3净化取SLC柱（500mg/6mL），加0.2g无水硫酸钠,用4mL乙腈淋洗活化柱子，然后将上述乙腈相加到柱子上，并收集，再用4mL乙腈洗脱收集，洗脱液60℃氮气吹干,残余物待衍生。6.4衍生上述残余物中加1.0mL衍生提取液溶解，再加衍生液0.1mL，密封，于60℃水浴反应15min，取出冷却，加碳酸钾溶液2.0mL，充分混匀，静置分层，取有机相，供气相色谱质谱测定。7计算取10μL、25μL、50μL、100μL、200μL1.0mg/L1.0μg/mL五氯酚标准使用液，分别加入30μl10.0μg/mL2，4-二溴酚内标液、1.0mL衍生提取液、0.1mL衍生液，密封，同样品一起衍生，获得10μg/L-200μg/L五氯酚标准曲线。根据标准曲线计算样品中五氯酚的含量C。样品中五氯酚含量按如下公式计算，结果保留三位有效数字。X=C*1/m式中：X—实际样品中五氯酚含量，μg/kg；转化成五氯酚钠乘以系数1.08；C—仪器测定样品中五氯酚含量，μg/L；m—取样量，g8数据处理根据五氯苯乙酸酯保留时间及碎片离子进行定性、定量分析。图2五氯苯乙酸酯质量色谱图9分析方法质量控制9.1质谱定性按照欧盟规定，定量离子和定性离子比例在要求范围之内，保留时间定性时间窗口一般为0.02min。9.2为了保证分析结果的准确，要求在分析每批样品时，进行加标试验，五氯酚肉样加标5.0μg/kg，五氯酚添加回收率应在70-120%范围之内。