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2013-7-13中药口服配合灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床观察及对肠黏膜IL-6、IL-10影响的研究*18h，2013-10-11，临床研究冯春霞1，张强2，陈晓蓉3，穆桂萍1，黄明河1（1广东省深圳市中医院，广东深圳518033；2广州中医药大学，广东广州510504；3广东省深圳市第二人民医院，广东深圳518035）*基金项目：（深圳市科技计划项目）201003172冯春霞深圳中医院中国广东省深圳市51803313600157666fengchx@163.com摘要：[目的]：观察理肠汤口服结合溃疡灵灌肠治疗溃疡性结肠炎（UC）的临床疗效，并检测患者结肠黏膜组织中的IL-6、IL-10的表达情况，探讨其治疗机制。[方法]将UC患者60例，随机分为治疗组30例与对照组30例，治疗组给予理肠汤口服及溃疡灵灌肠；对照组给予虎地胶囊口服，两组均治疗2个月。治疗结束后进行临床疗效比较，并利用免疫组化的方法，检测结肠黏膜组织中IL-6、IL-10在治疗前后的表达。[结果]两组治疗后均能改善腹泻、脓血便、腹痛等主要临床症状(P＜0.05)，治疗组优于对照组(P＜0.05)；治疗组总有效率高于对照组(P＜0.05)；两组均能降低IL-6的阳性表达率、提高IL-10的阳性表达量(P＜0.05)，治疗组优于对照组(P＜0.05)。[结论]：理肠汤口服结合溃疡灵灌肠治疗UC有较好的临床疗效，能够明显改善患者症状，减轻肠黏膜炎症，降低肠黏膜IL-6的表达、升高IL-10的表达。关键词：溃疡性结肠炎；中医药治疗；理肠汤；溃疡灵；IL-6；IL-10TheclinicalobservationoforaltraditionalChinesemedicinecombinedwithenemafortreatingulcerativecolitisandtheefficacyonintestinalmucosalIL-6、IL-10【Abstract】Objective:ToobservetheclinicalefficacyoforallytakenLi-ChangdecoctioncombinedwithKui-Yang-Lingenemaintreatingulcerativecolitis，WedetecttheexpressionofcolonicmucosainpatientswithIL-6,IL-10,andexploreitstherapeuticmechanism.Method：60casesofulcerativecolitispatientswererandomlydividedinto2groups:treatmentgroupandcontrolgroup.TreatmentgroupwasgivenLi-ChangdecoctionorallyandKui-Yang-Lingenema;thecontrolgroupwasgivenHu-dicapsule;Bothgroupsweretreatedfor2months.Theclinicaleffectswerecomparedaftertreatments.Byusingimmunohistochemistry,wedetecttwogroupsofpatientswithcolonicmucosatissueIL-6,IL-10expressioninthechangesbeforeandaftertreatment,andcomparison.Result：Thetreatmentgroupandthecontrolgroupcanimproveclinicalsymptomssuchasdiarrhea,bloodymucopurulentstoolandabdominalpainandother(P＜0.05),andthetreatmentgroupclinicalcurativeeffect(90%)betterthanthecontrolgroup(73.33%)(P＜0.05),bothofthemcandecreasedthepositiveexpressionofIL-6,increasetherateofIL-10positiveexpression.ThetreatmentgroupdecreasedpositiveexpressionofIL-6incolonicmucosaandimprovepositiveexpressionofIL-10wasbetterthanthecontrolgroup(P＜0.05).Conclusion:OralLi-ChangdecoctioncombinedKui-Yang-Lingenemahasbeenprovedaprominentclinicalcurativeeffectintreatingulcerativecolitis,whichcouldsignificantlyimproveclinicalsymptoms,reducetheintestinalmucosalinflammatoryresponse,decreasethecontentofIL-6,andincreaseIL-10content.OralLi-ChangdecoctioncombinedKui-Yang-Lingenemacanadjusttheimmunefunction,inflammatorycytokinesandinflammationcellinhibitoryfactor,soastoachievetotheequilibriumstate.Keywords:ulcerativecolitis;treatmentoftraditionalChineseMedicine;Li-Changdecoction;Kui-yang-ling;IL-6;IL-10溃疡性结肠炎（UC）是一种肠道炎症性疾病，其发病原因尚不十分清楚，目前认为与免疫、环境、遗传等因素有关，其中与免疫因素关系最为密切。病理条件下，肠壁对肠腔内微生物产生高敏状态,引起一系列由多种活性免疫细胞参与的局部免疫反应,免疫细胞同时分泌多种细胞因子，包括炎性因子和炎性抑制因子，炎性细胞因子，如IL-6（IL-6）、白介素8（IL-8）及肿瘤坏死因子（TNF）等；和炎性抑制因子，如白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）等，二者具有相互抗衡的作用。炎性细胞因子和炎性抑制因子的失衡状态是启动肠道炎症反应的病理基础。理肠汤口服配合溃疡灵灌肠治疗UC已在本科室应用近10余年，成功解除了许多患者的病情，临床疗效确切，本研究通过对溃疡性结肠炎病人治疗前后临床症状及结肠镜下表现进行对比，并通过结肠镜下采集标本，通过免疫组化染色，观察其炎性细胞因子IL-6和炎性抑制因子IL-10在治疗前后的变化。探讨该方对二者的影响作用。1资料与方法1.1临床资料选取2011年4月至2012年3月深圳市中医院脾胃病科门诊以及住院患者，属于UC活动期，诊断标准参考《溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案》[1]；中医辨证属脾胃气虚、湿热内蕴兼血瘀证患者60例，临床上有腹痛、腹泻、黏液脓血便、里急后重、大便不爽、乏力、舌淡暗，苔黄腻、脉滑数或濡数等表现。年龄在18-65岁之间，性别不限，签署知情同意书。随机分为治疗组30例与对照组30例，（补充两组资料，性别，病程，年龄，合并症等，治疗组男17例，女13例，平均年龄36±8.3岁，平均病程4.6±1.4年，对照组男15例，女15例，平均年龄34±9.6岁，平均病程4.4±1.7年，两组患者均无明显合并症。经统计，两组资料差异无统计学意义（P0.05）。1.2治疗方法治疗组给予理肠汤：党参30g，炒白术15g，椿根皮30g，薏苡仁30g，徐长卿30g，诃子15g，赤石脂30g，田七10g，白及15g，蒲黄15g，槐花15g，甘草10g。每日1剂，水煎，分2次空腹服用，并予溃疡灵灌肠，溃疡灵组成：苦参30g，田七10g，白及15g，儿茶15g，青黛10g，蒲黄15g，槐花15g，五倍子10g，枯矾10g。每日1剂，水煎1次，取汁100mL，排便后保留灌肠，每日1次；1个月为1疗程，共治疗2个月。对照组给予口服虎地胶囊(安徽古井集团九方制药有限公司，国药准字Z20020035)，主要药物组成：朱砂七、虎杖、地榆（炭）、北败酱、白花蛇舌草、二色补血草、白及、甘草。每次4粒，每日3次，1个月为1疗程，治疗2个月。每个疗程结束后观察记录患者的相关症状、体征，治疗前及治疗2个疗程后分别行电子结肠镜检查及并取组织标本，通过免疫组化测定患者肠黏膜炎症因子IL-6、IL-10的表达。1.3标本采集治疗前后行结肠镜检查，同时各取病变部位组织标本3块，活检标本用4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，3μm厚连续切片，苏-伊染色，免疫组化检查备用。1.4实验材料兔IgG-免疫组化试剂盒（SABC即用型，产品编号：SA1022，生产批号：07L24CJ）、DAB显色试剂盒(产品编号：AR1022)、兔抗IL-10多克隆抗体(产品编号：BA1201，规格0.2ml，生产批号：Y-B1-07D10A)均为博士德生物技术有限公司产品，兔抗IL-6多克隆抗体(生产批号：DA2178-0.1ml)为生工生物工程（上海）股份有限公司产品，操作按试剂盒说明书进行。1.5实验步骤载玻片防脱片剂处理；脱蜡、水化；滴加新鲜配置的3%过氧化氢甲醇溶液，以阻断内源性过氧化物酶的活性；抗原修复；滴加5%BSA封闭液1滴，室温下封闭；滴加兔抗IL-10（或兔抗IL-6）稀释液（1：200稀释），4℃过夜；滴加生物素化二抗（羊抗兔IgG-Biotin）；滴加SABC液，室温下孵育20分钟。滴加新鲜配制的DAB溶液，显微镜观察；苏木素染色，盐酸酒精分化；脱水，透明，封片，显微镜观察。已知IL-6/IL-10染色阳性的切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。IL-6的阳性表达为细胞质和（或）细胞膜被染色呈棕黄色，IL-10阳性表达为细胞质被染成棕黄色。先作定性观察，再于高倍镜下（×400）随机选取5个互不重叠的视野，以Image-ProPlus6.0软件测定每一视野中阳性染色物质的累积光密度值，取均值作为该切片中IL-6/IL-10的相对表达量。1.6疗效标准：综合疗效参照《溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案》[1]中的疗效评定标准。两组患者治疗前、后主要症状及镜下肠黏膜量化积分：分别于治疗前、后选取UC典型症状腹泻、脓血便、腹痛进行积分，量化积分表参照2002年《中药新药临床研究指导原则》制定。结肠黏膜病变积分采用Baron评分标准[2]。1.7统计学处理采用SPSS16.0软件进行统计学分析，计数资料采用x2检验，计量资料采用t检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两组综合疗效比较见表1。治疗组总有效率明显高于对照组(P0.05)。表1两组综合疗效比较组别n完全缓解显效有效无效总有效（%）治疗组3011106327（90.00）△对照组305710822（73.33）与对照组比较，△P0.05。2.2两组治疗前、后主要症状积分比较见表2。两组患者在治疗后腹泻、脓血便、腹痛、肠镜下黏膜病变积分与治疗前比较有明显统计学意义（P0.05），治疗组均优于对照组（P0.05）。表2两组治疗前后症状及肠镜黏膜病变积分（分，±S）组别腹泻脓血便腹痛肠镜下表现治疗组（n=30）治疗前5.70±2.1365.30±2.3225.40±2.2835.90±2.155治疗后3.00±1.762*△2.40±1.993*△2.20±2.074*△2.40±1.831*△对照组（n=30）治疗前5.40±1.9935.50±2.0975.40±2.2835.80±2.219治疗后4.10±1.845*4.10±2.295*3.90±2.249*4.00±2.233*与本组治疗前比较，*P0.0