化学发光临床应用.

郑州安图生物工程有限公司化学发光免疫诊断技术及其在临床中的应用内容提要化学发光技术概况安图化学发光项目临床应用放射免疫诊断技术（RIA）酶联免疫诊断技术（ELISA）化学发光免疫诊断技术（CLIA）20世纪60年代70年代80年代90年代2000年2020年时间临床免疫诊断技术的发展基本历经了以下三个阶段：化学发光（CLIA）酶免（EIA）放免（RIA）灵敏度（M/L）10-17-10-1910-1510-15-10-16标记物酶蛋白或发光物质酶蛋白放射性元素灵敏度高低高线性范围宽窄宽放射污染无无有试剂稳定性6-12个月6-12个月1-3个月操作易易繁琐肿瘤标志物系列生殖激素系列甲状腺系列糖尿病系列传染病系列心梗系列综合系列安图化学发光产品的临床应用生殖激素检测系列垂体激素（由垂体分泌）LH促黄体生成素FSH促卵泡生成素PRL催乳素甾体激素（由性腺分泌）E2雌二醇P孕酮T睾酮下丘脑垂体前叶（腺垂体）FSHLHPRL孕酮雄激素雌激素绒毛膜促性腺激素性腺(卵巢，乳腺，睾丸等)边缘脑大脑皮层中枢表示促进表示抑制下丘脑-垂体-性腺机能轴女性月经周期中各种激素浓度变化生殖激素的检测意义青春期前儿童性早熟，判断真性性早熟和假性性早熟青春期延迟及性幼稚症的诊断和判别女性闭经和不孕症，有助于查找病因女性多毛症、多囊卵巢综合征的诊断男女性高催乳素血症的诊断男性性功能减退和不育症，有助于查找病因更年期综合征和卵巢功能衰竭的判断体外受孕（IFV）作为监测工具性早熟的诊断一般根据临床表现就可判别，而真性和假性性早熟的鉴别则有赖于激素水平的检测。真性性早熟者FSH、LH、E2、P或T均会异常增高；假性性早熟者仅有性腺激素（E2、P或T）的异常升高，但FSH、LH基本正常原发性性腺功能低下：由性腺（卵巢）本身造成的性腺功能低下。LH、FSH会升高，E2、P会下降。继发性性腺功能低下：由于下丘脑或垂体原因，垂体促性腺激素分泌缺乏导致的性腺功能低下。LH、FSH、P、E2都会较低。女性性腺功能低下继发性睾丸功能低下：FSH、LH、T均低原发性睾丸功能低下：T低，FSH、LH高若FSH、LH、T都正常，则说明睾丸功能正常，PRL的异常增高也是性功能低下的主要原因。男性性腺功能低下女性闭经和不孕症对于闭经和不孕症女性，测定FSH、LH、E2、P等可鉴别病变部位：FSH、LH同时低或仅LH异常低，则病因在下丘脑或垂体；FSH、LH均正常，E2、P含量低者，则病因在性腺（卵巢）。此外，LH/FSH比值增高提示排卵障碍，常见于多囊卵巢综合症及雄性激素升高患者；垂体瘤和高催乳素血症，也可抑制排卵导致不孕。是一组以月经失调、无排卵性不孕、多毛、肥胖伴双侧卵巢增大、多囊性病变等为特征的症候。本病患者一般情况下LH持续升高，FSH正常或偏低，LH/FSH比值增加。T大量分泌，含量增高。多囊卵巢综合征卵巢功能衰竭和更年期更年期是卵巢功能生理性的衰竭：激素水平表现为LH、FSH升高，P、E2降低。年轻女性出现上述的激素变化，则可诊断为卵巢早衰。高催乳素血症生理性：妊娠、产后泌乳、应激反应病理性：分泌催乳素的垂体腺瘤泌乳素抑制激素（PIH）运输至垂体前叶产生异常药物其他过高的催乳素可抑制LH和FSH分泌，抑制卵巢功能，抑制排卵生殖激素检测及相关疾病—女性相关疾病检测项目性早熟FSH、LH、E2、P青春期发育延迟FSH、LH、E2、P闭经和不孕症FSH、LH、PRL、E2、P多毛症FSH、LH、PRL、E2、P、T多囊卵巢综合征FSH、LH、PRL、E2、P、T高催乳素血症PRL更年期和卵巢衰竭FSH、LH、E2、P生殖激素检测及相关疾病—男性相关疾病检测项目性早熟FSH、LH、T青春期发育延迟FSH、LH、T性功能减退和不育症FSH、LH、PRL、T高催乳素血症PRL精子缺乏FSH、LH、T乳腺发育过度T、E2、PRL甲状腺功能系列TSHT3FT3T4FT4TGAbTPOAb甲状腺血清学检测意义•甲状腺疾病的诊断•非甲状腺疾病的排除•指导治疗和疗效观察下丘脑--垂体--甲状腺轴的调节下丘脑垂体甲状腺T3、T4TRHTSH表示促进表示抑制甲亢常见模式TSHT3T4FT3FT4降低偏高正常正常正常降低偏高正常偏高正常降低偏高偏高偏高正常降低高高高高甲减常见模式TSHT3T4FT3FT4升高正常正常正常降低升高正常降低正常降低升高降低降低正常降低升高降低降低降低降低非常见模式影响因素1垂体，下丘脑功能异常2干扰物质—甲状腺结合蛋白（TBG、白蛋白）及一些竞争性结合蛋白物质，药物，激素3亚临床甲状腺疾病4先天性TBG，白蛋白异常5先天性甲状腺相关激素异常6不同的病理或治疗过程7非甲状腺疾病的影响疾病甲状腺相关激素变化TSHT3T4FT3FT4肝脏疾病正常或降低降低正常降低正常或降低糖尿病正常降低降低降低正常颅脑损伤降低升高降低正常精神病一过性升高一过性升高一过性升高一过性升高肾脏疾病正常降低降低降低正常心血管疾病降低正常甲状腺球蛋白抗体Anti-TG甲状腺过氧化酶抗体Anti-TPO1.主要用于自身免疫性甲状腺病的诊断2.TGAb阳性主要见于①桥本甲状腺炎，自身免疫性甲状腺疾病、原发性甲状腺功能减退，甲状腺功能亢进患者等，桥本甲状腺炎患者阳性检出率高达80％～90％。②某些肝脏病、各种胶原性疾病和重症肌无力。③正常妇女随年龄的增长,阳性检出率增加，40岁以上妇女阳性率达18％。3.TPOAb阳性见于桥本甲状腺炎（90%），原发性甲状腺功能亢进，原发性甲状腺功能减退，可比正常人高几十倍或上百倍4.有些患者TGAb阴性，但TPOAb阳性，因此两种抗体同时检测可提高抗甲状腺自身抗体的阳性检出率。AFPCEAβ-HCGPSAfPSACA125CA15-3CA19-9CA50SFβ2-MG肿瘤标志物系列肿瘤标志物的检测意义•肿瘤的早期检测•肿瘤复发的早期检测•预后应用•疗效监测理想的肿瘤标志物应具有：•⑴灵敏度100%；•⑵特异性100%；•⑶器官特异性；•⑷与肿瘤的大小或分期有关；•⑸与预后有关；•⑹监测肿瘤的复发。然而目前所应用的肿瘤标志物均未完全达到上述要求，但如正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价肿瘤标志物检测的临床意义。AFP•原发性肝癌的诊断检测血清AFP含量是诊断原发性肝癌的重要手段之一，排除妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎性肿瘤的情况下•孕妇血清可见升高，从妊娠6周开始合成，12-15周达到高峰。胎儿出生后数月至一年后体内AFP水平接近成人•急慢性肝炎、肝硬化患者血清中可检出AFP一般仅为50-200ng/ml，少数病人可暂时升高到400ng/ml以上。•先天性胎儿畸形诊断和恶性畸胎瘤的诊断。CEA•非器官特异性肿瘤相关抗原，胃肠道、呼吸道、泌尿道多有升高•广泛应用于常规体检•术后及疗效观测•肝炎、肝硬化及肺部疾病等也可以造成升高，吸烟亦能导致CEA升高•前列腺癌筛查，组织特异性抗原，而非癌特异性抗原。PSA对前列腺癌阳性检出率为50%-80%•前列腺创伤，良性前列腺增生症（BPH）时，前列腺炎、肾脏和泌尿生殖系统的疾病，可见血清PSA可增高；良性前列腺增生血清中游离PSA的比例显著增高PSA与f-PSA35%30%25%20%15%10%5%0%良性疾病的可能性增加前列腺癌的可能性增加FREEPSA%结果解释P-Ca10%34%70%CA125•卵巢癌筛查，观察疗效，判断有无复发•动态检测CA125的增速以鉴别肿瘤是良性还是恶性•非卵巢癌阳性结果：妊娠、月经期、子宫内膜炎等妇科炎症情况。在妊娠头3个月和月经期CA125阳性率偏高CA153•用于乳腺癌筛查•常用于术后观察•其它恶性肿瘤也可使CA15-3有不同程度的阳性率，如卵巢癌、胰腺癌、胃癌、肝癌•CA15-3对蛋白酶等酶类很敏感，血清标本应避免微生物的污染CA199•胰腺癌、胆囊癌、结直肠癌CA19-9明显上升,胃癌、肝癌也有升高。•急性胰腺炎、胆囊炎，肝硬化、肝炎等疾病也会造成CA19-9上升，应注意区别对待。CA50•广谱肿瘤标志物.对胰腺癌、胆囊癌，胃癌、结直肠癌、肝癌及卵巢肿瘤诊断亦有较高价值。•常用于常规体检•溃疡性结肠炎、肝硬化、自身免疫性疾病等也可见其上升，注意区别对待。HCG•检测正常妊娠、异位妊娠•检测自然流产•滋养层细胞肿瘤的诊断•其他肿瘤的重要标志（如胃癌、胰腺癌、肝癌，多发性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等）血清hCG浓度的变化•受精卵植入子宫内膜后，胎盘滋养层合体细胞分泌hCG。•在第一周约为50mIU/ml。•在其后六周每1.5－3天增加一倍，至第10周左右为峰。•其后下降，从第10到第16周逐步降为峰值的1/5，一直维持到分娩。血清hCG浓度的变化正常妊娠妇女血清中HCG平均值肿瘤标志物检测注意点联检更有意义灰区结果的分析肿瘤标志物联合检测----提高灵敏度肿瘤标志物动态观察----提高准确性SFβ2-MG血液病f-PSAPSA前列腺SFβ-HCG子宫CA125AFPβ-HCGCEA卵巢CA15-3CA125CEA乳房CA50CEACA19-9肺CA19-9CEACA50胰腺CEACA19-9CA50结直肠AFPSFCEA肝肿瘤标志物选择顺序癌肿部位糖尿病检测系列胰岛素C-肽PI、INS和C-P三者的关系临床诊断意义•糖尿病分型•评价胰岛分泌功能•观测疗效•诊断胰岛瘤02040608010012012345抽血次数浓度胰岛素（C-肽）测定方法及试验结果INS、C-肽测定注意事项1.只测空腹值，不进行激发性实验临床意义不大2.只测胰岛素，不进行C-肽检测，受干扰因素较大3.勿将测量数据与其它测定方法作简单对照传染病系列•化学发光两对半定量检测试剂HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb化学发光两对半定量检测的应用•乙肝感染筛查•急性乙肝诊断治疗中的具体监测•酶免或胶体金检测HBsAg（-）的HBV感染的结果分析•注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs浓度的定量分析）•结合FQ-PCR-DNA诊断病情FQ-PCR-DNA与HBeAg定量检测相关性分析•结合PCR诊断病情HBV-DNA——病毒复制和患者具有传染性的标志HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除或痊愈。HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均还较高，提示并未完全痊愈。HBV-DNA阴性HBeAg阳性提示有可能停药后病毒再次出现复制状况。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均很低或阴性并持续一段时间，提示可能完全痊愈，预后疗效良好。化学发光两对半比酶免两对半的优势一灵敏度高——缩短“窗口期”，降低漏检率1.献血人员的筛查——降低低浓度标本的传染率2.乙肝感染早期的检测——为病人争取治疗时间3.部分慢性乙肝患者及携带者HBsAg浓度较低，酶免法可能会造成漏检4.某些人群如医护人员，病人家属长期接触患者但非直接经输血传播，可能造成低浓度感染5.病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA或胶体金检测易造成漏检，化学发光法极有可能同时检测出HBsAg和抗-HBs。HBsAg阳性人群中，有部分人群浓度小于1ng/ml，化学发光定量试剂能缩短“窗口期”，最大限度地避免漏检，降低传播率•化学发光定量（CLIA）检测HBsAg灵敏度可达0.05-0.1ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0.5-1.0ng/ml，胶体金检测HBsAg灵敏度是1-5ng/ml，所以只有血清中的HBsAg达到0.5-5ng/ml酶标或胶体金才会呈阳性反应。二线性范围宽，定量检测——有效检出高、低值标本，动态观测病情1.急性乙肝1，2两项的互转通过定量检测更清晰直观，可预见乙肝是否处于康复期，是否转为慢性乙肝。如HBsAg浓度降低，HBsAb的浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展。反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较底水平，则容易发展为慢性乙肝或携带者。2.定量分析HBeAg和抗-HBe的浓度变化，可