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动物组织中核酸的提取与鉴定实验原理本实验运用盐溶液法用动物肝脏分离制备DNA核酸在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，要分离核酸必须使核酸与蛋白质分离并除去蛋白质。已知在0.14mol/LNaCl溶液中核糖核蛋白溶解度最大，而脱氧核糖核蛋白溶解度最小，在1mol/LNaCl溶液中脱氧核糖核蛋白溶解度增大，核糖核蛋白的溶解度则明显下降，根据这种特异性即可把这两种核蛋白分开实验原理十二烷基硫酸钠（SDS）处理，使蛋白质变性，蛋白质与DNA分开氯仿—异戊醇除去变性蛋白质冷的95%乙醇除去蛋白质，溶液中的蛋白质沉淀出来柠檬酸、EDTA等螯合物可以防止DNA酶降解DNA实验试剂PH=8.00.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA溶液50g/L十二烷基硫酸钠（SDS）溶液氯仿—异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1）氯化钠溶液（75%乙醇、95%乙醇）试验器材材料：动物猪肝（猪羊兔）组织捣碎机、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶、玻璃棒、离心管、称量瓶、滴管等实验步骤取动物肝脏浸入预先在冷水浴中冷却的0.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA溶液，反复洗涤几次，直至组织无血为止将洗净的组织剪成碎块，称取10g，加入20ml0.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA溶液，在组织捣碎机中匀浆，4℃4000r/min离心15分钟后弃上清液，在沉淀中加入4倍体积的低温0.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA溶液,搅匀后离心，弃上清液，如此反复2-3次，保留沉淀实验步骤将沉淀物悬于5倍体积的0.14mol/LNaCl-0.01mol/LEDTA溶液中搅匀，边搅拌边滴加SDS溶液，直至SDS的最终浓度达10g/L为止，然后加入固体NaCl，使NaCl最终浓度达1mol/L,继续搅拌30-45min,以确保NaCl全部溶解将上述混合液倒入一个具有塞的锥形瓶中，加入等体积的氯仿-异戊醇，振荡10min在室温3000r/min离心10min此时可见3层，小心吸取上层水相，记录体积，放入锥形瓶中再加入氯仿-异戊醇混合物，振荡离心，如此反复抽提数次，直至界面处不出现蛋白凝胶为止最后一次离心后，小心吸取上层溶液计量体积，放入干燥小烧杯，加入2倍体积的预冷95%乙醇，产生沉淀后，4000r/min离心10min弃去上清液，沉淀即为DNA实验步骤加2倍体积预冷乙醇，如用滴管滴加，边加边慢慢顺一个方向在烧杯中搅动，有粘稠维丝物缠在玻璃棒上，直至再无丝状物缠上为止将玻璃棒上的DNA取下，依次用75%乙醇、95%无水乙醇洗一次，放入干净量瓶中至于干燥器中抽干十二烷基硫酸钠（SDS）组织捣碎机离心机