现代分子生物学复习题

版权所有--毛毛雨制作东隅已逝1桑榆非晚！现代分子生物学一.填空题1.DNA的物理图谱是DNA分子的限制性内切酶酶解片段的排列顺序。2.核酶按底物可划分为自体催化、异体催化两种类型。3.原核生物中有三种起始因子分别是IF-1、IF-2和IF-3。4.蛋白质的跨膜需要信号肽的引导，蛋白伴侣的作用是辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质。5.真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：核心启动子元件和上游启动子元件。6.分子生物学的研究内容主要包含结构分子生物学、基因表达与调控、DNA重组技术三部分。7.证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是肺炎球菌感染小鼠、T2噬菌体感染大肠杆菌这两个实验中主要的论点证据是：生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能。8.hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接、mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴。9.蛋白质多亚基形式的优点是亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法、可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响、活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭。10.质粒DNA具有三种不同的构型分别是：SC构型、oc构型、L构型。在电泳中最前面的是SC构型。11.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是TFIID、SP-1和CTF/NF1。12.与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种螺旋-转角-螺旋、锌指模体、碱性-亮氨酸拉链模体。13.转基因动物常用的方法有：逆转录病毒感染法、DNA显微注射法、胚胎干细胞法。14.RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是：D、A、B、E。其中TFII-D的功能是与TATA盒结合。15.酵母DNA按摩尔计含有32.8%的T,则A为_32.8%_,G为_17.2%_和C为_17.2%__。16.操纵子包括_调控基因、调控蛋白结合位点和结构基因。17.DNA合成仪合成DNA片段时，用的原料是模板DNA‘TAQ、引物、缓冲液、dNTP。18.在琼脂糖电泳中，DNA会向正极移动。19.染色体包括蛋白质、染色体两大部分。20.环状DNA双链的复制主要可分为θ形、滚环形、D-环形三种类型。21.转录的基本过程包括转录的起始、延伸、终止。22.半乳糖对细菌有双重作用；一方面可以作为碳源供细胞生长；另一方面它又是细胞壁的成分。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从S2开始，无G时转录从S1开始。23.DNA重组技术也称为基因克隆或分子克隆。最终目的是把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤：①提取供体生物的目的基因或称外源基因，酶接连接到另一DNA分子上克隆载体，形成一个新版权所有--毛毛雨制作东隅已逝2桑榆非晚！的重组DNA分子。②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。24.质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为严紧型质粒，不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为松弛型质粒。25.PCR的基本反应过程包括：变性、退火、延伸三个阶段。PCR的反应体系要具有以下条件：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA引物约20个碱基左右。b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTP，d、作为模板的目的DNA序列26.哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是TFIID、SP-1和CTF/NF1。27.RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他们的结合顺序是：D、A、B、E。其中TFII-D的功能是与TATA盒结合。二.名词解释质粒:是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。启动子:是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。核受体:细胞内受体分布于胞浆或核内，本质上都是配体调控的转录因子，均在核内启动信号转导并影响基因转录，统称核受体。hnRNA:核不均一RNA，即mRNA的前体，经过5’加帽和3’酶切加多聚A，再经过RNA的剪接，将外显子连接成开放阅读框，通过核孔进入细胞质就可以作为蛋白质合成的模板了。分子杂交:互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。基因组文库:将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞，进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所有基因。密码的简并性:由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为密码的简并性衰减子：在色氨酸操纵子中，当mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，否则，转录总是在长162bp的前导区终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录，因为转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域被称为衰减子。DNA拓扑异构酶：DNA在细胞内往往以超螺旋状态存在，DNA拓扑酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间的转变。DNA拓扑异构酶有两类，大肠杆菌的ε蛋白(MW-110000)就是一种典型的拓扑异构酶Ⅰ.它的作用是暂时切断一条DNA链，形成酶-DNA共价中间物而使超螺旋DNA松弛化，然后再将切断的单链DNA连接起来，而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的DNA旋转酶(DNAgyrase)则的典型的拓扑异构酶Ⅱ，能将负超螺旋引入DNA分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，同时需要ATP水解为ADP以供能。基因表达：遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的过程。版权所有--毛毛雨制作东隅已逝3桑榆非晚！前导肽：分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现，它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA；如果翻译起始于AUG，应该产生一个14个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽（实际上还没有观察到）。启动子：启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。DNA分子克隆技术：（也称基因克隆技术）在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的DNA片段不同，有两种DNA库，一种是基因组文库（genomiclibrary）,另一种是cDNA库。G蛋白：受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。位于受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多，都属于结构和功能极为类似的一个家族，由于它们都能结合并水解GTP，所以通常称G蛋白，即鸟苷酸调节蛋白（guaninenucleotideregulatoryprotein）。受体型酪氨酸激酶：蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase，PTK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，他们通过从三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化.目前，已发现PTK有100多个家族成员，他们通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导入细胞核内，引起某些基因表达水平的改变，使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节.因此在调节细胞的分化、生长和激活中起到重要作用.根据PTK的结构，可分为受体型和非受体型PTK两大类，前者又称跨膜PTK，后者又称细胞内PTK.生长因子受体PTK(受体型酪氨酸激酶或RTK):这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白，其胞外部分为配体结合区，中间有跨膜区，胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域.根据他们的结构不同可分为，表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族.cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA及增强子，弱化子等。DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。版权所有--毛毛雨制作东隅已逝4桑榆非晚！Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’3’外切酶活性RNA编辑（RNAediting）:是某些RNA，特别是mRMA的一种加工方式，它导致了DNA所编码的遗传信息的改变，是因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。反密码子:tRNA上能与密码子以碱基互补方式配对的对应碱基，一般具有“摆动性”。转座子（transposon）:是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。基因（gene）:产生一条多肽链或功能RNA所必须的全部核苷酸序列。基因族(genecluster)：真核生物中许多相关的基因常按功能成套组合，被称为基因家族，同一家族的成员有时紧密的排列在一起，成为基因簇。C-值（C-value）：通常是指一种生物单倍体基因组DNA的总量。内含子(intron)：指基因组中的非编码序列。锌指（zincfinger）：属于反式作用因子，其特有的半胱氨酸和组氨酸之间氨基酸残基数基本恒定，有锌参与才具备转录调控活性。转座子(transposon)：是存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。基因家族(genefamily)：真核生物中许多相关的基因常按功能成套组合，被称为基因家族。模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域。魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应