农药生物测定

1《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文(J.O.Irvin)首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼(D.J.Finney)出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温(L.G.Goodwin)出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（J.R.Busvine）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专著。特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。第三时期：20世纪70年代至今1.研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。2.杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。3.20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微2机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。农药生物测定的内容及应用1.测定农药对昆虫、螨类、病原菌、线虫、杂草以及鼠类等靶标生物的毒力或药效2.研究农药对植物的生理作用3.筛选新农药品种4.研究化合物的化学结构与生物活性关系的规律，为定向创制新农药提供依据5.研究农药的理化性质及加工剂型与毒效关系，提高农药的使用效果6.研究有害生物的生理状态及外界环境条件与药效的关系，以便提高农药使用水平，做到适时用药7.测定不同农药混用的效力，为农药的合理混用及寻找增效剂提供依据8.对有害生物抗药性的监测和研究克服或延缓抗药性发展的有效措施9.研究农药的作用机理及生理效应10.还可利用敏感生物（如蚊幼虫等）来测定农药的有效含量及残留量。11.测定农药对温血动物及有益生物的毒性3农药生物测定基础1.药剂浓度的表示方法:(1)百分浓度(2)百万分浓度（ppm）(3)倍数法(4)波美度(1)百分浓度:分容量百分浓度和质量百分浓度两种。液体与液体之间配药时常用容量百分浓度。固体与固体或固体与液体之间配药时多用质量百分浓度。新增登记和生产许可的农药产品，其有效成分含量原则上统一以质量百分含量（%）表示。(2)百万分浓度（ppm）ppm：partpermillion（百万分之…）10-6ppb：partperbillion（十亿分之…）10-9ppt：partpertrillion（万亿分之…）10-12与“％”一样，ppm、ppb、ppt不是浓度单位。但可定义为摩尔比、体积比、质量比或质量体积比等。(2)百万分浓度:即100万份药液或药粉中含有这种药剂成分的份数，以10-6(ppm)表示，其基本单位为百万分之一。常用mg/kg（μg/g）或mg/L（μg/mL）表示，即每L或每kg物质中所含的物质的mg数。如：1ppm阿维菌素丙酮溶液＝1mg/L….3)倍数法①内比法：稀释100倍或100倍以下计算稀释量时，要扣除原有药剂所占的那一份数量。如：稀释50倍时，表示用药剂1份加水49份。②外比法：稀释100倍以上计算稀释时，则不扣除原有药剂所占的那一份。如：稀释1000倍，则用原药剂1份加水1000份。在稀释农药时,如果未注明按容量稀释则均按质量计算！(4)波美度石硫合剂有效成分的表示单位，用“oBe”表示，它表示浓度与比重的正相关。4(1)百分浓度和百万分浓度之间的换算百万分浓度（ppm）=10000×百分浓度,如:75%的多菌灵丙酮溶液，为多少ppm？由上式得：10000×75=750000（ppm）即:750000ppm(2)百分浓度和稀释倍数之间的换算百分浓度（%）=原药剂浓度÷稀释倍数×100%如：90%的敌百虫稀释1000倍后的药液百分浓度为多少？由上式得90%÷1000=0.09%即得为0.09%(3)百分浓度与有效成分之间的换算当原药剂的比重等于或近似1时，百分浓度与有效成分（g）之间的换算关系为:药液有效成分（g）=毫升数×药液浓度如：25%功夫菊酯乳油100毫升，含有多少功夫菊酯有效成分？解：100×25%=2.5（g）波美度和稀释倍数之间的换算(1)稀释剂用量的计算公式容量稀释倍数(加水体积倍数)原液波美度×(145-需用药液波美度)-1需用药液波美度×(145-原液波美度)=重量稀释倍数(加水重量倍数)原液波美度数-1需用波美度数=需配制药剂浓度原药浓度原药剂的量稀释剂用量＝5例：将10毫升20％杀灭菊酯乳油稀释成50ppm的药液，需用多少水？解：原药剂的量＝10毫升原药剂浓度＝20%＝20×10000ppm所配制的药剂浓度＝50ppm根据公式10×200000÷50＝40000(毫升)＝40(升)(2)原药剂用药量的计算公式例如：50％敌敌畏配100公斤含量为500ppm的药液，需要原药多少？解：所配药剂量＝100公斤（kg）,所配制药剂浓度＝500ppm,原药剂浓度＝50%＝500000ppm根据公式100×500÷500000＝0.1（公斤）＝100克(3)倍数法计算公式当稀释倍数在100倍以下时（内比法）:当稀释倍数在100倍以上时（外比法）:原药剂浓度所配药剂浓度所配药剂的量原药剂用量＝1稀释倍数所需药剂量原药剂量稀释倍数所需药剂量原药剂量6例（内比法）：需配制98公斤20％敌稗乳油50倍液用于水稻秧苗除草，求用药量是多少？解：所需药剂量＝98公斤稀释倍数＝50根据公式98÷(50-1)＝2公斤例（外比法）：需配制2.5％敌杀死乳油稀释2000倍液10升，求需加2.5％乳油多少？解：所需药剂重量＝10升稀释倍数＝2000根据公式10÷2000＝0.005升＝5豪升用64%杀毒矾可湿性粉剂750X防治黄瓜霜霉病调查情况如下：①请计算药前及第一次药后10天及第二次药后15天的病指。②请计算第一次药后10天及第二次药后15天的防效。③如果亩用药液为75升，每亩需要多少克64%杀毒矾WP？室内毒力测定和田间试验♦一般地，农药生物测定指在室内进行的测定。♦室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果，除可作为药剂的初步筛选的根据外，还可为田间试验提供参考。有时在田间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。♦田间试验主要测定或比较药剂在田间条件下的药效，其结果比较接近实际情况，为生产防治提供可靠的依据。处理分级72%杀毒矾水剂750倍清水CK013579013579药前调查结果90501000094458300第一次药后10天调查结果67252016220402516162825第二次药后15天调查结果1251510000452016162825病叶数结果调查g1007501000757农药生物测定试验设计的原则（1）相对控制测定条件（2）必须设立对照（3）各种处理必须设置平行重复（4）运用生物统计分析试验结果（1）相对控制测定条件♦环境条件：温度、湿度、光照。♦供试生物：标准化生物（同一环境下培养的，发育一致）。♦供试药剂：室内生物测定必须纯净（原油或原粉），至少要有确切的有效成分含量。施药要均匀一致。（2）必须设立对照对照(check，符号CK)，对照有三种：♦空白对照：♦非药剂成分对照：如丙酮对照。♦标准药剂对照：多菌灵•根据具体情况和测定要求确定试验中所需设置的对照。（3）各种处理必须设置平行重复♦任何实验都必须能够重复，这是具有科学性的标志。♦增加重复是减少误差的一种方法。♦一般室内毒力测定要求至少重复3次。田间小区药效试验，则要求重复4-5次。室内毒力测定线性浓度范围的寻找（1）浓度（或剂量）范围的寻找将待测样品分别配制成跨度较大的几个浓度，根据试验所需要的方法测定每个浓度（或剂量）对供试生物的活性，寻找其效应值（如死亡率、抑制率等）在1%-99%之间的浓度（或剂量），8即可确定大致的浓度范围（2）设置浓度（或剂量）在所得到的大致浓度范围内，设计一系列不同的药剂浓度（或剂量），浓度梯度可以根据药剂特点及初步确定的浓度范围设置成等比、等差或其它形式，然后测定不同浓度药剂对目标生物的效应值。（3）最终的浓度确定:若可选出5-7组满足上面两个条件的数据，即所设置浓度合理。反之，则需要重新设置浓度。注意：杀虫实验中对照组的死亡率不能超过20%杀虫剂室内生物测定杀虫剂生物测定技术的一般原则（一）控制影响因素环境条件、昆虫、药剂、溶剂等。（二）必须设立对照空白对照、溶剂对照、标准药剂对照。（三）必须设重复一般重复3次，每重复20~50头试虫。（四）供试的目标昆虫尽量选择农作物害虫，在同一环境条件下人工饲养,或在田间同一环境条件下抓捕，尽量一致。标准目标昆虫：是指在生物测定中被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，并且抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示的试虫群体。对标准目标昆虫的要求1、易饲养，繁殖力强，不互相残杀，不受季节限制，能保证常年充分供应；2、要求有一定的代表性和经济意义。3、生活力及抗药力要稳定和均匀一致；4、选用合适虫期、龄期、年龄的试虫群体或混合群体作为测试对象。95、便于进行移取处理标准目标昆虫的移取方法(一)一般移取法(二)趋光法(三)麻醉法:1、CO2法；2、挥发蒸气法；3、冷冻法；4、乙醚低温麻醉法(四)吸虫法(五)自行运动移虫法二、初步毒力试验1、应用范围:①主要用于对大量化合物的杀虫活性筛选②用于为田间防治害虫筛选有效药剂初步毒力试验又叫过筛试验（screentest）。其目的是：确定一种新化合物对某一目标昆虫是否有毒，以便确定是否有必要进一步做毒杀作用方式或精密的毒力测定。比较粗放的初步试验，对筛选新农药来说是更为主要的。初步毒力测定的方法:①喷雾②喷粉③浸渍④食料混药法精密的毒力测定:就是我们常说的毒力测定。指在特定条件下衡量某种杀虫剂对某种昆虫毒力程度的一种方法。可用来了解某一杀虫剂对某一害虫的毒力程度，也可用来比较几种杀虫剂对某一种昆虫的毒力差别；1、内容:①毒杀作用方式的测定②毒力程度的测定定量取食法、夹毒叶片法、液滴饲喂法、口腔注射法叶片夹毒法致死中量的计算：根据取食面积、单位面积上的着药量及试虫体重，求出每头试虫的单位体重受药量，排序，分组:生存组、生死组、死亡组。叶片夹毒法致死中量的计算：）g昆虫体重（）2ug/mm药量（）2mm吞食面积（）＝ug/g吞食药量（致死中量（LD50）=A+B210A:中间组每项死虫单位体重药量累加除以总死虫数得A。B:中间组每项活虫单位体重药量累加除以总死虫数得B。经典夹毒叶片法的缺点：操作麻烦.需要控制取食量。湿度不好控制，导致叶片干缩，难测定面积。要求施药均匀。杀虫剂胃毒毒力测定技术——改进夹毒叶片法改进夹毒叶片法的特点：将不定量进食改为定量给食，并用点滴药量代替喷粉或喷雾。杀虫剂的触杀毒力测定技术－局部施药法①点滴法（topicalapplication)将一定浓度的药液点滴于虫体的某一部位，多在幼虫的前胸背板上，药剂迅速挥发，药剂在体壁形成药膜而侵入体内。熏蒸