搜索
冰银三味通片的长期毒性研究及其文献综述摘要：冰银三味通片由银杏叶提取物、霪羊霍和冰片组成，片重0.5克的棕褐色糖衣片，每片还有原料药物0.35g，由葫芦岛帝国药业有限公司研制提供，批号20080226,铝塑包装，室温阴凉处保存。根据《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》，编号：[Z]GPT-3-1，采用Wister大鼠评价了冰银三味通片的长期毒性。结果表明，采用临床剂量的20、40、80倍（1.03、2.06和4.12g/kg动物体重,分别相当于5.2、10.4和20.8g生药/kg动物体重）口服给药28周，低剂量组大鼠无死亡，但是高、中剂量组动物都有死亡，且呈现剂量依赖性。动物死亡的原因：腹泻，胃、小肠和大肠溃疡、穿孔和肿块，但未见脏器系数、血液学指标（RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RCT、PLT、PT和WBC）、血液生化指标（AST、ALT、ALP、CK、BUN、Cre、TP、ALB、GLU、T-BIL、T-CHO、TG、Na、K和Cl）显著异常。动物解剖后，取主要脏器（脑、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胃、小肠、大肠、甲状腺、胸腺、膀胱、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脾脏、垂体、脊髓、骨髓、淋巴结、坐骨神经、气管、主动脉、食管和唾液腺）进行组织病理学检查。结果表明，胃、小肠和大肠有发生溃疡，大肠有产生肿块，甚至穿孔。部分动物于停药好继续饲养两周，正常进食饮水，两周后处死解剖进行同样观察和测定。结果表明，体重略有回升，溃疡、穿孔和肿块未能消失。但是，未见到迟发毒性作用。上述研究表明，冰银三味通片长期服用可能引起消化性溃疡，甚至引起大肠溃疡、肿块，主要毒性靶器官是消化道。临床剂量下服用2个月，除可能产生消化性溃疡之外，预计不会产生其他严中不良反应。临床研究中，应重点监测消化2系统不良反应。1．试验目的本研究的目的是根据《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的有关要求，采用Wister大白鼠研究冰银三味通片（银杏叶提取物：霪羊霍：冰片，8：10：5，w/w/w）的长期毒性，为冰银三通片的临床药理研究提供可靠的毒性试验依据，主要包括：预测冰银三味通片可能引起的临床不良反应；推测冰银三味通片的临床毒性靶器官或靶组织；预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量；提示冰银三味通片临床试验中应该重点监测的指标；为冰银三味通片的临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。2．试验材料2.1受试物冰银三味通片由银杏叶提取物、霪羊霍和冰片组成，片重0.5克的棕褐色糖衣片（银杏叶提取物：霪羊霍：冰片，8：10：5，w/w/w），每片还有原料药物0.35g，由葫芦岛帝国药业有限公司研制提供，批号20080426,20080919，铝塑包装，室温阴凉处保存。2.2试验动物预备Wister大鼠120只，体质健康，雌（未孕）、雄各半，体重60-70g，6-9周龄，由沈阳医学动物实验中心提供（动物合格证：SCSK,辽2003-0016）。筛选出80只用于本项研究。饲料由沈阳医学动物实验中心提供提。实验条件：雌雄分笼饲养，每笼10只。室温：18-30℃，相对湿度：40-50%，标准饲料，笼具每周清洗、75%乙醇消毒1次，大鼠垫料由沈阳医学院动物试验中心提供，每周更换一次。实验前动物在实验室饲养房内观察7d左右，一般体征正常方可用于实验研究。32.2仪器与药品DT2000型上皿电子天平，沈阳洁龙仪器公司生产；光镜、普通切片机由沈阳医学院附属医院病理科提供。甲醛，沈阳化学试剂厂；乌拉坦，上海海曲化工有限公司。10%甲醛溶液和20%乌拉坦溶液，自行配制。3．方法3．1实验分组动物先按性别分组别，再按体重差别最小原则分成4组，即赋型剂对照组、冰银三通片的低剂量、中剂量和高剂量组。每组20只Wister大白鼠（体重：60-70g），雌雄各半，各组动物体重分别为：赋型剂对照组65.3±4.0g，低剂量组65.6±2.9g，中剂量组65.2±2.7g，高剂量组65.3±2.9g。3．2给药剂量、途径及给药时间采用临床剂量的20、40、80倍（每日剂量分别为1.03、2.06和4.12g/kg动物体重,分别相当于5.2、10.4和20.8g生药/kg动物体重）口服给药28周。对照组，经口给予3g赋型剂/kg动物，中、低剂量组赋型剂补足到3g赋型剂/kg，以确保各各组动物服用相同量的赋型剂（由葫芦岛帝国制药公司提供，批号：20080426）。3．3观察指标在给药期间，进行一般综合指标观察，包括动物外观体征、行为活动和粪便性状等。每周测定1次体重和平均食物摄入率和食物利用率。死亡动物，及时进行解剖，观察推测动物死亡原因。给药结束时，各组随机处死接近一半大白鼠(在末次给药后，禁食15h，不禁水)，眼眶取血（每只动物采3-4毫升全血不加抗凝剂，2.5毫升血液加由医院检验科提供的抗凝剂，供检测血液常规指标和血液生化指标。解剖后，取动物的4主要脏器(脑、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胃、小肠、大肠、甲状腺、胸腺、膀胱、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脾脏、垂体、脊髓、骨髓、淋巴结、坐骨神经、气管、主动脉、食管和唾液腺)，用10%福尔马林液固定，石蜡包埋，做病理切片，进行病理学检查。各脏器重量除以体重，得出每只大鼠的各脏器系数。血液学指标包括：RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、RCT、PLT、PT和WBC。血液生化指标包括AST、ALT、ALP、CK、BUN、Cre、TP、ALB、GLU、T-BIL、T-CHO、TG、Na、K和Cl。病理学检查项目，包括脑、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胃、小肠、大肠、甲状腺、胸腺、膀胱、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脾脏、垂体、脊髓、骨髓、淋巴结、坐骨神经、气管、主动脉、食管和唾液腺。首先检查高剂量组和对照组，高剂量组如果无变化，其它剂量组可以免检查。停药恢复期，即停药2周后，将各组余下的大白鼠全部处死，操作及检测指标同上，用于观察恢复状况和可能出现的迟发毒性。4．结果4．1对动物一般体征、体重和食物摄入率的影响（1）一般综合指标给药过程中，大、中、小剂量组动物毛色无光泽，食物摄入量显著减少。给药期间，各组大鼠其他一般体征未见异常。高剂量组动物出现死亡，中剂量组动物虽然死亡数与高剂量组相同，但是死亡发生比较慢，而且低剂量组动物未见死亡。经解剖观察，推测动物死于消化系统溃疡,穿孔或肿块。停药2周后，小、中、大剂量组动物的食物摄入量与对照组比较仍然显著减少（P0.05）。与对照组比较，各给药组动物体重仍有不同程度地减轻，溃疡，穿孔或肿块没有消失。冰银三味通片经口给药28周及恢复期大白鼠的体重变化，及相应的食物摄入率和食物利用率见表1-2。5结果表明，大鼠长期服用冰银三通片，体重明显减轻，食物摄入明显较少，食物利用率变化不显著。给药期间，及恢复期之后，脏器系数的改变如表3所示。4．2血液学检查给药结束后以及停药2周后，进行的血液学和血液生化指标检查，如表4所示。结果表明，停药后及2周的恢复期之后，各给药组血液学指标和生化指标与对照组比较差异均无显著性差异。4．4对病理学检查的影响大鼠口服冰银三通片6个月。肉眼观察各组动物各种脏器的表面和切面的颜色、质地、边缘、纹理、大小和重量等均在正常范围，各种脏器形态正常、表面光滑、无出血、粘连获坏死，切面观察亦无异常改变。各脏器重量及其系数军在正常范围内。脑：给药后，大体解剖观察：脑可分为大脑,小脑和脑干。大脑又分为端脑与间脑,脑干又分为中脑,脑桥和延髓，均基本正常，未见炎症的不良反应。显微镜下观察，神经细胞横断面结构完整，无炎症细胞浸润，亦未见异常改变，如图1-2。心脏：给药过程中，心脏基本正常。心脏是循环系统的重要组成部分。心位于胸腔内，左右两肺之间，上面为进出心脏的上腔静脉、主动脉和肺动脉，均无异常。心表面有三条沟，冠状沟为心房与心室的表面分界，前、后纵沟为左右心室的表面分界，界限清楚。心内部分为四个腔，基本正常。上部两个为心房，由房中隔分为左心房和右心房；下部两个为心室，由室中隔分为左心室和右心室。心房心室的大小结构基本正常。显微镜下观察，亦未见异常改变，如图3-4。肝脏：大体解剖表明，肝脏外观呈红褐色，质软而脆。肝脏形态不规则楔形，右6侧钝厚而左侧偏窄，上面突起浑圆，大小正常。显微镜下观察，肝小叶是肝的基本结构和功能单位，呈六角柱状。肝小叶中央贯穿着一条小静脉称为中央静脉，肝细胞以中央静脉为中心，向四周呈放射状排列成一行行的肝细胞索(肝细胞板\肝板)，肝细胞索之间的空隙是肝血窦，窦壁有枯否氏细胞，基本结构完整，无异常表现，如图5-6。肺：大体解剖表明，肺表面包有完整的胸膜脏层,透过胸膜脏层,可观察到多边形肺小叶的完整轮廓。肺的形态依空气充盈程度和胸廓的形状而变化,一般为圆锥形，基本正常。但是，部分动物的肺脏似乎有炎症，不过于药物无关，可能是动物感冒。肺为白色分叶状，质地疏松，均无异常表现。显微镜下观察，肺是以支气管反复分支形成的支气管树为基础构成的，结构完整。左、右支气管在肺门分成第二级支气管，第二级支气管及其分支所辖的范围构成一个肺叶，每支第二级支气管又分出第三级支气管，每支第三级支气管及其分支所辖的范围构成一个肺段，支气管在肺内反复分支最后形成肺泡，部分动物有炎症反应。支气管各级分支之间以及肺泡之间都由结缔组织性的间质所填充，血管、淋巴管、神经等随支气管的分支分布在结缔组织内，基本正常。肺泡之间的间质内含有丰富的毛细血管网，是血液和肺泡内气体进行气体交换的场所，也无异常表现，如图7-8。肾：各族动物肾脏表面光滑、质地柔软，肾脏重量和脏器系数之间并无显著差异。显微镜下观察，各组动物肾小球大小均匀，散在分布，肾小囊内无渗出，无出血或坏死，肾小球基底膜未见增厚。肾小管上皮细胞排列整齐、规则，管腔无管型，肾脏间质高剂量组偶见轻微炎症反应，如图9-10。肾上腺：各组动物肾上腺大小均匀，表面光滑，形态和质地均未见异常反应，如图11-12。胃肠道：大体解剖表明，消化系统由消化管和消化腺两部分组成。消化管是一条起自口腔延续为咽、食管、胃、小肠、大肠、终于肛门的很长的肌性管道，包括口腔、咽、食管、胃、小肠（十二指肠[图13-14]、空肠、回肠）和大肠[图15-16]（盲肠、结肠、直肠）等部，均基本正常。消化腺有小消化腺和大消化腺两种。小消化腺散在于消化管各部的管壁内，大消化腺有三对唾液腺（腮腺、下颌下腺、舌下腺）、肝和胰，它们均借导管，将分泌物排入消化管内，也没有7异常反应。显微镜下观察，食管和末端肛管的上皮为鳞状上皮，其余消化道粘膜由柱状上皮细胞组成，各种结构基本完整。上皮层下的粘膜固有层中有毛细血管网、淋巴管和肠相关淋巴组织的免疫细胞，无异常反应。粘膜下层位于粘膜下。粘膜肌层是一层薄的肌肉，将粘膜层和粘膜下层分隔开。粘膜下层含有血管、淋巴管和称之为粘膜下神经丛完整的神经网。肠壁的肌肉包括数层肌纤维，每层肌纤维排列方向不相同，结构完整。大部分消化器官有两层肌肉，内环肌和外纵肌。镜下观察，也未发现胃粘膜改变。胃壁粘膜层、粘膜下层、肌层和浆膜层，均无异常表现，如图17-18。甲状腺：大体解剖，所见各组动物甲状腺形如“H”，棕红色，分左右两个侧叶，中间以峡部相连，形态均匀，大小一致，基本正常。显微镜下观察，甲状腺由两层被膜包裹；内层被膜为甲状腺固有膜、很薄，与甲状腺紧密相连，外层被膜又称甲状腺外科被膜，较厚，与内层被膜借疏松的纤维组织联接；各组动物的甲状腺结构都很完整，均无异常反应，如图19-20。胸腺：各组动物胸腺表面光滑，腺体质地均匀，颜色均一。显微镜下观察，各组动物胸腺皮质内充满淋巴细胞和网状内皮细胞，均无异常现象，如图21-22。睾丸：各组动物大体解剖，动物睾丸形态大小均匀一致，灰白颜色深浅一致。显微镜下观察，睾丸表面有两层鞘膜，脏层鞘膜被盖睾丸表面，壁层鞘膜贴附于阴囊内侧壁。两层之间有一腔隙，称为鞘膜腔，内含少量液体，可以减少睾丸在阴囊内移动时的阻力。在脏层鞘膜之下，有一致密的纤维膜（即白膜）包围睾丸实质，白膜后上方（睾丸门）特别增厚，称为睾丸纵隔。各组动物的睾丸显微结构均匀