华中农业大学本科课程考试试卷

【第1页共6页】华中农业大学本科课程考试试卷考试课程与试卷类型：基因操作原理姓名：学年学期：2003-2004-2学号：考试时间：2004-05-28班级：一、填空题（每小题2分，共24分）1.限制性内切酶的命名主要根据__________________________________________来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确________________。A:SalI;B:SmaI;C:HindIII;D:HindIII;E:Tth111I;F:Bsp1286I;G:NotI2.RNApolymerase可识别启动子并启动基因的转录从而合成mRNA，____________________和___________________方法可用来检测mRNA合成的起始位置。3.在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam和Dcm甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA的特定位点作甲基化修饰，而许多限制性内切酶位点对甲基化是敏感的，如ClaI(AT/CGAT)。请问ClaI能切割以下哪个或哪些来自dam+dcm+E.coli菌株的DNA序列________________。（A）ATCGATA;（B）ATCGATG;（C）ATCGATC;（D）ATCGATT.4.从高温嗜热细菌中发现高温DNApolymerase后，使得PCR技术得以广泛应用，在高温下有活性的DNApolymerase有、、、。其中具有3’-5’外切活性的高温DNApolymerase有和。5.DNaseI切割DNA的方式受条件的影响,在Mn++存在下________________________________________，在Mg++存在下__________________________________________。6.限制性内切酶有其特定的识别位点，如EcoRI的识别位点为_______________；___________限制性内切酶与____________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。7.Lambdaphage的基因组在噬菌体颗粒中是_____________，在感染宿主细胞后主要以___________形式存在。8.Sequenase是用于_________________________的工具，与_________________最相似，但不同之处在于_____________________________________________。9.在基因操作过程中有许多对人体有害的物质,应小心使用,常用的有害物质有:_____________,_________________,___________________,_________________。10.Splicingbyoverlapextension是一种___________工作方式，可用于对两个DNA片段作___________________连接。11.Competentcells是一种处于_________________________状态的细胞,electroporation是指一种将___________（物质）通过_________________方式_____________________________遗传转移方法。12.用于基因克隆的载体种类繁多，从克隆片段的大小来看，可分为常规克隆载体和大容量克隆载体。常见的大容量克隆载体有_____________，______________，_____________，_______________。【第2页共6页】二、名词解释（每小题3分，共24分）1．Klenowfragment2.BACvector3.CIP4.IPTG/X-gal5.M13KO76.Sitepreference7.Nicktranslation8.Plateaueffect(inPCR)三、分析简答题（每小题5分，共25分）pBlue-A10000bps200040006000800010000/0EcoRI30005000700090001000HindIII1．当利用质粒载体从基因组中克隆得到含有目标基因的DNA片段后，通过限制性内切酶切割该重组DNA可制作该目标DNA片段的物理图谱。例如，选用3种内切酶切割重组pBlue-A，通过agarose电泳分析，得到如下大小的DNA片段。请标出酶切位点A的相对位置。EcoRI：10kbHindIII：10kbA酶：4kb,3.5kb,2.5kbHindIII和EcoRI：4kb,6kbA酶和EcoRI：3.5kb,2.5kb,2.5kb,1.5kbA酶和HindIII：4kb,2.5kb,1.0kb,2.5kb【第3页共6页】3．许多限制性内切酶切割DNA后可产生相同的突出末端，这些产物彼此之间可进行粘端连接。但在连接产物中相应位置的酶切位点就不存在了。例如某DNA片段用ClaI(AT/CGAT)酶切后，可与AccI(GT/CGAC)切割的载体连接，但在连接点处的ClaI和AccI位点都消失了，相应的序列变成了ATCGAC。右图最上面的序列为ClaI/AccI连接处的DNA序列。通过右边步骤可在连接点处恢复ClaI位点，请指出每一步所用的关键酶和底物。SphI位点：GCATG/CRecoveringClaI--ATCGACAAGCTT----TAGCTGGCCAA----ATCGATT----TAGCTAA----ATCGATT----TAGCTAA----ATCGACCGGCATGCAAGCTT----TAGCTGGCCGTACGTTCGAA----ATCGACCGGCATGCAAGCTT----TAGCTGGCCGTACGTTCGAA--()()(,)()2．右图是一个常用克隆载体的遗传图谱。请问该载体有何主要特点，利用该特点可作何用途，举出一种构建该特点的方法。【第4页共6页】4．右图是一个典型的E.coli表达载体，利用T7噬菌体的启动子可达到高效表达的目的。在利用T7噬菌体的启动子表达时，一般对宿主菌有一定要求，通常使用BL21(DE3)菌株。请问该载体利用T7噬菌体的启动子高效表达外源基因的工作原理。UUUUUUUUUUUUUUUUUUUUInserttargetDNA转化E.coliCJ236M13K07感染IsolatephagemidssDNA与突变寡核苷酸退火T7DNApolymeraseligase转化MV1190dut+/ung+phagemid5.下图是通过Kunkel法进行DNA定点诱变的流程示意图。请结合流程步骤，简述其工作原理。【第5页共6页】四、问答题（每小题9分，共27分）1.截至2004年5月17日，有9种真核生物、144种细菌和18中古细菌完成了基因组测序工作。在某一植物基因组测序过程中，通过生物信息分析发现一个全新的ORF，试问如何检测该植物是否表达出相应ORF的蛋白质产物？如果存在该蛋白产物的话，请问如何找到与之发生相互作用并结合的其他蛋白质的编码基因。2.通过生物化学的的方法从某植物中分离到一个蛋白质活性因子，若要在E.coli中大量表达该蛋白质，试问如何分离得到该基因。【第6页共6页】3.禽流感(AI)是正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒(AIV)引起的禽类的烈性传染病。禽流感病毒中能引起AI暴发流行的高致病力AIV毒株仅有H5和H7两个血清型。其基因组由8条单链(-)RNA组成,编码10种蛋白(PA、PB1、PB2、HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2)。目前已经测定了许多不同来原AIV的蛋白基因，其核苷酸序列在GenBank上注册。从广东分离到一株名为GD1/96(H5N1)的AIV，提取病毒基因组总RNA,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别扩增该病毒分离株的8个基因片段的cDNA,分别克隆后进行序列测定。结果表明内地H5N1血清亚型分离株GD1/96与1997年香港禽流感事件的发生明显缺乏直接联系。如果由你来测定该AIV的基因组序列，请问你将如何实施。请列出主要的步骤（或方法）。