冠心丹参滴丸抗垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的实验研究

国家重点基础研究发展规划项目（973）-方剂关键科学问题基础研究（G1999054403）冠心丹参滴丸抗垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的实验研究王怡高秀梅张伯礼（天津中医学院中医药研究中心天津300193）【摘要】目的：观察冠心丹参滴丸抗垂体后叶素（pituitrin，Pit）致大鼠急性心肌缺血的作用。方法：采用大鼠舌下静脉注射Pit造成急性心肌缺血模型，观察各给药组对注射Pit后不同时间点Ⅱ导联心电图T波变化百分率（%）以及血清LDH、CPK、SOD、MDA的含量变化的影响。结果：冠心丹参滴丸能明显对抗Pit引起的急性心肌缺血的心电图变化、提高血清SOD活性、降低MDA含量。结论：冠心丹参滴丸具有显著对抗Pit致大鼠急性心肌缺血的作用。【关键词】冠心丹参滴丸垂体后叶素心肌缺血实验研究Objective:TostudytheeffectofGuanXinSalviaDropPill(GXSDP)onpituitary(Pit)inducedacutemyocardiumischemia.Methods:Pit(0.35u/kg)wasgiventoformmodelofacutemyocardiumischemia.ThechangesofthesecondroadECG(Twave)andcontentsofLDH/CK/SOD/MDAinserumwasobservedafterinjectionPitviasublingualvein.Results:GXSDPgroupcansignificantlylowertheheightofTwave.InGXSDPgrouptheSODactivitywassignificantlyenhancedandMDAcontentswassignificantlyinduced.Conclusions:GXSDPhavethefunctionsofanti-acutemyocardiumischemia.冠心丹参滴丸的主要成分为丹参、三七、降香挥发油等，功能活血化瘀，理气止痛，主要用于治疗冠心病心绞痛、胸闷、憋气等。本实验用垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血模型来观察冠心丹参滴丸抗心肌缺血的作用。材料和方法1．实验主要仪器多道生理记录仪（MP-100，美国BIOPAC公司）、半自动生化分析仪（荷兰威图Dpu-411TypeⅡ）2．实验药物及试剂冠心丹参滴丸0.04g/粒，中发实业集团业锐药业有限公司生产，批号：200105031；消心痛，5mg/片，批号：000901（天津市海光制药厂）；垂体后叶素（pituitrin，Pit），每支10u/mL，批号：20000501（天津市生物化学制药厂）；乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购于南京建成生物工程公司。3．动物、动物分组及给药Sprage-Dawley大鼠共50只，雌雄各半，体重247.3±14.5g，由北京维通利华动物中心提供。随机分组：（1）正常对照组；（2）模型组；（3）吐温组；（4）消心痛组；（5）冠心丹参滴丸组。上述受试药物使用前均用生理盐水配制，浓度为1mL/kg，吐温剂国家重点基础研究发展规划项目（973）-方剂关键科学问题基础研究（G1999054403）量与溶解冠心丹参滴丸所用吐温剂量等同。4．具体方法于实验前一天首先进行动物对垂体后叶素（Pit）敏感性筛选实验，方法是：大鼠舌下静脉注射Pit0.35u/kg（浓度为1u/2mL），观察Ⅱ导联心电图变化情况，选取对Pit敏感大鼠用于实验（T波明显抬高，ST段抬高超过0.1Mv）,对Pit不敏感大鼠淘汰。将筛选获得的敏感大鼠40只，24小时后用于实验。实验前按随机分组原则提前1小时分别灌胃给药，用3%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉，将动物仰位固定在鼠台上，并与多道生理记录仪相接，描记Ⅱ导联心电图，将心电图正常大鼠舌下静脉注射Pit0.35u/kg，并于5秒内注完，描记Ⅱ导联心电图5分钟，观察3小时后心脏取血。（模型组和正常对照组灌服生理盐水，正常对照组舌下注射生理盐水）。5．统计方法：采用Stata4.0软件进行t检验。结果1.各组对大鼠注射垂体后叶素后Ⅱ导联心电图T波变化百分率的影响模型组和吐温组大鼠注射Pit后即刻Ⅱ导联心电图T波显著抬高，30秒时达到最高，即出现第一期心电图的变化，于注射Pit30秒后心电图出现T波低平、双相、倒置，心率减慢，P-R及Q-T间期延长等第二期心电图变化，吐温组与模型组比较二者之间无显著差异（P＞0.05）。消心痛组及冠心丹参滴丸组均能够显著对抗Pit引起的大鼠第一期和第二期的心电图变化，与模型组比较差异非常显著（P﹤0.05，P﹤0.01）；冠心丹参滴丸组与吐温组比较差异非常显著（P﹤0.01）(见表-1及图-1)。表-1各组Ⅱ导联心电图T波变化百分率（%）的比较组别动物数即刻15秒30秒1分钟2分钟3分钟4分钟5分钟模型组1031.13±14.9136.49±25.5044.58±20.6041.88±24.6241.35±21.1538.61±15.4631.95±15.8238.72±9.13吐温组1028.43±19.5540.95±25.8653.33±23.9851.03±27.7440.88±28.6441.64±24.2930.42±16.6032.51±12.77消心痛组107.44±6.47**6.46±5.42**10.55±7.30**8.61±5.88**5.12±4.92**5.36±3.30**4.91±3.53**4.48±3.35**冠心丹参滴丸组1011.99±11.59**#17.11±13.74*#13.54±6.23**##13.58±7.64**##11.56±8.73**##11.70±8.31**##13.04±7.69**##14.56±6.22**##注：与模型组比较：*p﹤0.05，**p﹤0.01；与吐温组比较#p﹤0.05，##p﹤0.0101020304050600即刻15秒30秒1分钟2分钟3分钟4分钟5分钟T波变化的百分率（%）正常对照组模型组吐温组消心痛组冠心丹参滴丸组图-1各组Ⅱ导联心电图T波变化百分率（%）的比较2．各组对大鼠血清LDH、CK的影响模型组和吐温组大鼠注射Pit后血清LDH有所升高，消心痛组及冠心丹参滴丸国家重点基础研究发展规划项目（973）-方剂关键科学问题基础研究（G1999054403）组有降低血清LDH的趋势；模型组和吐温组大鼠注射Pit后血清CK明显升高，与正常对照组比较差异显著（P0.01），消心痛组及冠心丹参滴丸组对血清CK有不同程度的减少趋势（见表-2）。表-2各组血清LDH、CK的比较组别动物数CK(u/l)LDH(u/l)模型组101008.7±318.6**1068.0±329.9吐温组101149.0±686.9**1087.0±240.9正常对照组10571.6±243.5860.0±185.7消心痛组10842.5±350.4768.3±418.6冠心丹参滴丸组10825.1±254.6813.5±280.0注：与正常对照组比较**p﹤0.013．各组对大鼠血清SOD、MDA的影响模型组及吐温组注射Pit后血清SOD活性明显降低、MDA含量显著升高，与正常对照组比较差异显著（P﹤0.01）；消心痛、冠心丹参滴丸组均能显著提高SOD活性、降低MDA含量，与模型组比较差异非常显著（P﹤0.01）；冠心丹参滴丸组与吐温组比较差异显著（P﹤0.01）；消心痛组及冠心丹参滴丸组之间无显著差异。（见表-3）。表-3各组血清SOD、MDA的比较组别动物数SOD(NU/ml)MDA(nmol/ml)模型组10167.96±14.06##13.75±1.82##吐温组10166.22±13.30##14.25±2.56##正常对照组10202.53±7.2210.33±1.53消心痛组10191.06±18.03**11.17±1.93**冠心丹参滴丸组10186.23±10.42**△△11.07±1.37**△△注：与模型组比较**p﹤0.01；与正常对照组比较##p﹤0.01与吐温组比较△△p﹤0.01讨论垂体后叶素（Pit）是从动物脑垂体中提取的，内含有加压素（抗利尿素）和催产素，加压素能直接使血管，特别是毛细血管和小动脉收缩，包括冠状动脉收缩，从而使血压升高，心肌缺血缺氧；收缩全身小血管，导致心脏负荷加重[1][2]。冠心丹参滴丸的主要成分为丹参、三七、降香挥发油等，其中丹参、三七具有活血化瘀止痛，降香辛温，活血散瘀止痛，三味药物均是治疗冠心病心绞痛的主要药物，实验结果显示：冠心丹参滴丸组能够显著改善由垂体后叶素诱发的急性心肌缺血。由垂体后叶素诱发急性心肌缺血模型复制方法十分简便，该模型广泛用于筛选抗心肌缺血药物的研究。本实验应用垂体后叶素舌下静脉注射造成大鼠急性心肌缺血模型[3][4]，观察心电图、心肌酶、过氧化物的变化。近年来随着心肌缺血损伤机制研究的深入，发现大量氧自由基生成及脂质过氧化物反应增强是心肌缺血损伤的主要机制之一[5]。超氧化物歧化酶（SOD）常作为反应氧自由基清除能力的指标，它是机体清除氧自由基的重要酶类，对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。SOD能清除超氧阴离子，保护细胞免受损伤，其活力的高低常间接地反映了机体清除自国家重点基础研究发展规划项目（973）-方剂关键科学问题基础研究（G1999054403）由基的能力，当心肌受损时，可导致SOD活性的降低，而脂质过氧化反应的中间产物MDA常被作为观察氧自由基生成和造成细胞膜损伤的指标[6]，间接反映机体内细胞损伤的轻重和脂质过氧化的程度。本实验结果显示：消心痛组和冠心丹参滴丸组均能够明显增强SOD的活性，降低MDA的含量，从而对心肌发挥保护作用；磷酸肌酸激酶（CK）以及乳酸脱氢酶（LDH）在心肌损伤时因缺血后膜损伤而释放入血内，故可作为观察心肌缺血的指标；冠心丹参滴丸对心肌酶的溢出也有一定的保护作用，提示冠心丹参滴丸能够对抗由垂体后叶素引起的大鼠急性心肌缺血，对缺血的心肌具有保护作用，其确切机制有待于进一步实验研究。参考文献[1]张页，杨学娟，沈绍功.冠心病心绞痛气虚痰浊症动物模型研究.中国中医基础医学杂志，2000，6（12）：820-821[2]李绍芝，朱文锋，黄献平，等.心气虚证动物模型的研制.中国中医基础医学杂志，2000，6（7）：466-471[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996，564[4]吴伟康，侯灿，罗汉川，等.垂体后叶素性心肌缺血模型再探.中国病理生理杂志，1993，9（2）：124-127[5]潘洪平.复方丹参滴丸治疗心血管的研究进展.广西医学，2000，22（4）：758-761[6]周苏宁，邵伟，等.黄芪注射液抗心肌缺血再灌注损伤的临研究.中国中西医结合急救杂志，2000，7（3）：168-170作者简介：王怡，女，37岁，天津中医学院中医药研究中心工作，中医内科硕士学位，主要从事心脑血管病中医药的新药研发。本课题得到国家重点基础研究发展规划项目（973）-方剂关键科学问题基础研究课题（G1999054403）的资助。