低密度脂蛋白胆固醇测定试剂(盒)技术审评规范

1低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）技术审评规范（2014版）一、前言本审评规范旨在指导注册申请人对低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。本审评规范是对低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本审评规范是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本审评规范。本审评规范是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本审评规范相关内容也将适时进行调整。二、适用范围低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）用于体外定量测定人血清和/或血浆中的低密度脂蛋白胆固醇的含量。从方法学考虑，本文主要指采用分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室进行低密度脂蛋白胆固醇定量检验所使用的临床化学体外诊断试剂。本规范不适用于干式低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）。依据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（以下简称《办法》）低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒管理类别为Ⅱ类，分类代号2为6840。三、基本要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、临床意义、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《办法》和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》（国食药监械〔2007〕609号）的相关要求。下面着重介绍与低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）预期用途有关的临床背景情况。低密度脂蛋白（LDL）是富含胆固醇（CHO）的脂蛋白，是动脉粥样硬化的危险性因素之一，LDL经过化学修饰后，其中的apoB-100变性，通过清道夫受体（scavengerreceptor）被吞噬细胞摄取，形成泡沫细胞并停留在血管壁内，导致大量CHO沉积，促使动脉壁形成动脉粥样硬化斑块（atheromatousplaque），故LDL为致埃及粥样硬化的因子。临床上以LDL-C的含量来反映LDL水平。LDL-C水平增高：⒈判断发生冠心病的危险性：LDL是动脉粥样硬化的危险因子，LDL-C水平增高与冠心病发病呈正相关，因此，LDL-C可用于判断发生冠心病的危险性。⒉其他：遗传性高脂蛋白血症、甲状腺功能减退症、肾病综合征、阻塞性黄疸、肥胖症以及应用雄激素、β-受体阴滞剂、糖皮质激素等LDL-C也增高。LDL-C水平减低：LDL-C减低常见于无β-脂蛋白血症、甲状腺功能亢进症、吸收不良、肝硬化，以及低脂包含和运动等。LDL-C检测的适应症：临床上主要用于高胆固醇血症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。3（二）产品说明书说明书承载了产品预期用途、试验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据。因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写审评规范》的要求，结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，下面对低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）说明书的重点内容进行详细说明，以指导注册申报人员更合理地完成说明书编制。1.【产品名称】（1）试剂（盒）名称由三部分组成：被测物名称、用途、方法或原理。例如：低密度脂蛋白胆固醇测定试剂（盒）（直接法－选择抑制法）。（2）英文名称（如有）应当正确、完整、直译，不宜只写缩写。⒉【包装规格】（1）不得多于标准中所列的包装规格；（2）注明装量或可测试的样本数，如××测试/盒、××mL。⒊【预期用途】应至少包括以下几部分内容：（1）说明试剂盒用于体外定量测定人血清和/或血浆中低密度脂蛋白胆固醇的含量。（2）与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床适应症的发生率、易感人群等，相关的临床或实验室诊断方法等。⒋【检验原理】本规范适用于对人血清和/或血浆中的低密度脂蛋白胆固醇4进行定量检测的试剂（盒），以下介绍几种典型反应原理：（1）聚乙烯硫酸沉淀法：样本中的聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚（PVS）选择性的沉淀LDL，离心后上层液中含高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒（CM），用胆固醇酶法测定试剂分别测定上层液和血清总胆固醇含量，二者之差即为LDL-C含量。（2）直接法-表面活性剂清除法：反应分两步进行：第一步：R1中聚阴离子与LDL形成复合物，在表面活性剂1作用下，不与胆固醇酶试剂反应。而其它脂蛋白（CM，VLDL-C，HDL-C）则被酶试剂水解产生过氧化氢，在缺乏偶联剂时被消耗而不显色。第二步：R2中表面活性剂2使LDL释放胆固醇，在胆固醇酶试剂与偶联剂作用下参与Trinder反应而显色，吸光度与标本中低密度脂蛋白胆固醇浓度成正比。（3）直接法-保护性试剂法：在反应第一步，LDL在两性表面活性剂（保护剂）作用下被选择性保护，而非LDL脂蛋白（CM，VLDL-C，HDL-C）被胆固醇酶法试剂处理。第二步中，LDL中胆固醇被释放，在酶试剂与偶联剂作用下参与Trinder反应而显色，吸光度与标本中低密度脂蛋白胆固醇浓度成正比。⒌【主要组成成份】（1）说明试剂盒包含组分的名称、数量、比例或浓度等信息，如果对于正确的操作很重要，应提供其生物学来源、活性及其他特性；明确说明不同批号试剂盒中各组分是否可以互换。（2）试剂盒内如包含校准品和/或质控品，应说明其主要组成成分及其生物学来源，校准品应注明其定值及溯源性，溯源性至少应写明溯源到的最高级别，包括：标准物质的发布单位及编号，质控品应有合适的靶值范围。⒍【储存条件及有效期】5（1）对试剂盒的效期稳定性、复溶稳定性、开瓶稳定性等信息做详细介绍。包括环境温湿度、避光条件等。（2）不同组分保存条件及有效期不同时，应分别说明，产品总有效期以其中效期最短的为准。注：保存条件不应有模糊表述，如“室温”。稳定期限应以月或日为单位。⒎【适用仪器】（1）说明可适用的仪器，并提供与仪器有关的必要信息以便用户能够作出最好的选择。（2）应写明具体适用仪器的型号，不能泛指某一系列仪器。⒏【样本要求】重点明确以下内容：（1）样本采集前对患者的要求：如采集时间、采集顺序等，是否受临床症状、用药情况等因素的影响。（2）样本采集：说明采集方法及样本类型，如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求。（3）样本处理及保存：样本处理方法、保存条件及期限、运输条件等。冷藏/冷冻样本检测前是否须恢复室温，冻融次数。对储存样本的添加剂要求等。（4）应明确当测定值超出线性上限时的稀释方法，并给出稀释最大倍数说明。⒐【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括：（1）试验具体操作步骤。（2）试剂配制方法、注意事项。（3）试验条件：温度、时间、仪器波长等以及试验过程中的注意事项。（4）校准：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制。应注明推荐的仪器校准周期。6（5）质量控制：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释以及推荐的质控周期等，如质控不合格应提供相关的解决方案。⒑【参考值（参考范围）】（1）应注明常用样本类型的正常参考值（范围），如：＜3.12mmol/L(＜120mg/dL)。并简要说明参考值确定的方法。（2）简单介绍设定该参考值（范围）所选健康人群的区域特征，建议注明以下字样“由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值（范围）”。⒒【检验结果的解释】说明可能对试验结果产生影响的因素；说明在何种情况下需要进行确认试验。⒓【检验方法局限性】（1）说明检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。（2）说明该检验方法由于哪些原因会使测量结果产生偏离，或测量结果还不能完全满足临床需要。如：干扰（胆红素、血红蛋白、甘油三酯等）等。⒔【产品主要性能指标】产品性能指标应符合企业标准要求。说明该产品主要性能指标，应至少包括：外观、装量、试剂空白吸光度、试剂空白吸光度变化率、分析灵敏度、线性范围、重复性、批间差等。⒕【注意事项】应至少包括以下内容：（1）本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。（2）使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会存在差异。7（3）对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待，提示操作者采取必要的防护措施。⒖【参考文献】注明引用参考文献，其书写应清楚、易查询且格式规范统一。⒗【生产企业】包括企业名称、地址（注册地址和生产地址不同的应分别列出）、邮政编码、电话和传真号码、网址等。⒘【其他】如医疗器械生产企业许可证编号、医疗器械注册证书编号、产品标准编号、说明书批准日期及修订日期等。（三）拟定产品标准及编制说明拟定产品标准应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》的相关规定。如已有相应的国家/行业标准发布，则企业标准的要求不得低于其相关要求。下面就标准中涉及的产品适用的相关标准、主要性能指标、标识标签说明书以及检验规则等相关内容做一简要叙述。⒈产品适用的相关标准⑴GB/T191-2008包装储运图示标志⑵GB/T21415—2008体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性⑶GB/T26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）⑷YY/T0316-2008医疗器械风险管理对医疗器械的应用⑸YY/T0466.1－2009医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分：通用要求⒉主要性能指标：（1）外观a)试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；8b)包装标签文字符号应清晰。（2）装量液体试剂的净含量应不少于标示量。（3）试剂空白吸光度用指定空白样品测试试剂（盒），在说明书规定的测试条件下，记录反应结束(T)后的吸光度（A），测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应不大于0.05。（4）分析灵敏度用试剂（盒）测试低密度脂蛋白胆固醇已知浓度在（2.00～4.00）mmol/L的样本，记录在试剂（盒）规定参数下的吸光度差值。换算为1.00mmol/L的吸光度差值，吸光度差值（ΔA）应0.03。（5）线性用接近线性区间下限的低浓度样本稀释接近线性区间上限的高浓度样本，混合成6个稀释浓度（xi）。用试剂（盒）分别测试以上样本，每个稀释浓度测试3次，分别求出每个稀释浓度检测结果的均值（yi）。以稀释浓度（xi）为自变量，以检测结果均值（yi）为因变量求出线性回归方程。按公式（1）计算线性回归的相关系数（r）。2i2iii)y-(y)x-(x)]y)(yx-[(xr……………………………………（1）稀释浓度（xi）代入求出线性回归方程，计算yi的估计值及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差。试剂（盒）至少在[0.30，10.00]mmol/L的线性范围内分析性能应符合如下要求：①线性相关系数（r）应不小于0.995；②[0.30，10.00]mmol/L区间内，线性偏差应不超过±0.30mmol/L或不超过±10％。（6）重复性9①批内重复性：测试浓度在（2.50±0.50）mmol/L和（5.00±1.00）mmol/L的血清样品或质控样品，各重复测试10次，分别计算测量值的平均值（）和标准差（s）。所得结果的变异系数（CV）应不大于3%。②批内瓶间差（干粉或冻干试剂适用）用(2.50±0.50)mmol/L的血清样品或质控样品测试同一批号的10个待检试剂（盒），并计算10个测量值的平均值（x1）和标准差（s1）。用(2.50±0.50)mmol/L的血清样品或质控样品对该批号的1个待检试剂（盒）重复测试10次，计算结果的均值（x2）和标准差（s2）。按公式（2）、（3）计算瓶间差的变异系数（CV）。22